专利名称：镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于一种中药组成的药品，涉及一种镇静催眠的药品，特别涉及镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物。
背景技术：
酸枣仁养心血和柏子仁养心气是常用养心安神中药对药，常成对出现于养心安神中药复方中。一般认为，酸枣仁和柏子仁的水溶性部位(酸枣仁总苷、柏子仁醇提物)是它们的对中枢神经作用的有效部位。
根据申请人所作的资料检索，有关酸枣仁油的研究报道和专利申请如下1)研究报道酸枣仁油具有调节血脂作用，压榨提取法提取酸枣仁油具有中枢神经作用。
2)专利申请酸枣仁油降脂滴丸的配方及其制备方法(中国专利申请号94107184)；酸枣仁的加工方法(中国专利申请号00104496)，超临界二氧化碳萃取法提取酸枣仁油和酸枣仁粉。
3.柏子油的研究报道和专利申请柏子油的提取工艺研究已有专利受理(一种从柏子仁中提取柏子油的方法[P].中国.发明专利，CN1280171A)。
4、二氧化碳萃取法和软胶囊制备是成熟工艺。
截至目前为止，申请人还没有看到有关柏子油的镇静催眠作用的相关报道。
发明内容
本发明的一个目的在于，提供一种镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物。
实现上述目的的技术解决方案是一种镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物，其特征在于，该组合物由酸枣仁油与柏子油组成，其质量比为1∶1。
本发明的另一个目的是证明复方酸枣仁油与柏子油组合物用于镇静催眠的药物用途。
申请人按照医药学的要求，经过各种实验已得到证明，本发明的镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物，其复方大于单质的酸枣仁油、柏子油的作用，并证明了柏子油也能够用于制备镇静催眠药物的应用。申请人已经着手准备复方新药或功能食品的申报相关工作，开发出复方酸枣仁与柏子油的复方产品。
具体实施例方式
以下结合发明人给出的各种实验对本发明作进一步的详细说明申请人对于酸枣仁油的研究已经多年，酸枣仁油是酸枣仁的镇静催眠的主要作用部位，经申请人的实验证明，在酸枣仁油的基础上，加入同比例的柏子油具有更显著的镇静催眠作用。
(一)酸枣仁油和柏子油组方比例研究采用正交实验设计，利用镇静实验法，对柏子油与酸枣仁油的交互作用及剂量比例进行研究。
实验设计柏子油为因子A，酸枣仁油为因子B，均取三个水平(5ml·kg-1，1.5ml·kg-1，0.5ml·kg-1)，交互作用表示为A*B。使用两因素三水平正交试验，选择L9(34)正交表，进行9组实验，第一组A1B1，第二组A1B2，第三组A1B3，第四组A2B1，第五组A2B2，第六组A2B3，第七组A3B1，第八组A3B2，第九组A3B3。每组重复5次。因素水平表、正交设计如表1、表2表1 因素水平表
表2 正交试验设计表L9(34)
材料健康成年昆明种封闭群小鼠，体重18～20g，♀，由西安交通大学医学院试验动物中心提供，动物合格证陕医动08-005号。室温15～21℃，湿度30％～53％。安静，自然光线。仪器YLS-1A多功能小鼠自由活动仪，山东省医学科学院仪器设备站生产。药品及配制酸枣仁油和柏子油，CO2超临界萃取，密封放置备用；使用时按正交表剂量配制。
分组及给药取健康昆明种小鼠54只，按体重均衡随机分为9组，每组5只，按正交表剂量给药，每天1次，连续3天。
方法与结果依照卫生部1993年版“新药临床前研究指导原则汇编”，及“药理实验方法学”，采用光电法进行。分9组测试，每组同时灌胃给药，组间给药间隔10min。给药后45min按给药次序进行测试测10min内的小鼠自主活动数并记录，直至将各组小鼠给药和测试完毕。
研究表明(见表6、表7)，柏子油(A)能影响小鼠自主活动次数，具有显著意义(P＝0.018＜0.05)，为主效应；酸枣仁油(B)也能影响小鼠自主活动次数，具有显著意义(P＝0.016＜0.05)，也是主效应；并且柏子油(A)与酸枣仁油(B)的交互作用有显著意义(P＝0.02＜0.05)，柏子油与酸枣仁油有交互作用，最佳组合为A3B3(均数277.8)。柏子油与酸枣仁油配方比例宜为1∶1，偏大剂量较好(表3，表4)。
表3 柏子油、酸枣仁油对小鼠自主活动影响的方差分析
表4 酸枣仁油、柏子油交互作用
用SPSS 11.5进行数据处理，采用方差分析。
(二)复方柏子油与酸枣仁油的镇静、催眠作用及拆方研究1.镇静实验(小鼠自发活动实验)实验设计根据前面的实验，酸枣仁油5ml·kg-1作为2A，柏子油剂量5ml·kg-1，为2B，将柏子油与酸枣仁油等量混合，混合物设计了大、中、小三个剂量水平，分别为2(A+B)，A+B，(A+B)/2，相对应则为10ml·kg-1，5ml·kg-1，2.5ml·kg-11。加上阳性对照及空白对照共为7组，即柏子油组、酸枣仁油组、大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组及空白对照组。通过柏子油组与空白组的效应比较，可研究柏子油的镇静作用；通过比较大剂量组与柏子油组、酸枣仁油组效应，可研究柏子油、酸枣仁的相互作用是否为相加作用；通过中剂量组与柏子油组、酸枣仁油组效应的对比，可以推断两者之间相互作用是否为协同作用。这样分组设计既研究了柏子油的镇静作用，又研究了柏子油与酸枣仁油之间的相互作用。药物相互作用的判断标准协同AB＞2A，同时AB＞2B；相加AB＞A，同时AB＞B；拮抗AB＜A或AB＜B.
实验材料同正交实验分组及给药取健康昆明种小鼠108只，按体重均衡随机分为7组，每组14只，分为①复方酸枣仁柏子油大剂量组10ml·kg-1灌胃；②中剂量组5ml·kg-1灌胃；③小剂量组2.5ml·kg-1灌胃；④柏子油组5ml·kg-1灌胃；⑤酸枣仁油组5ml·kg-1灌胃；⑤地西泮组1.65mg·kg-1灌胃；⑦空白组蒸馏水10ml·kg-1灌胃给药。每天一次，连续三天。
方法和结果依照卫生部1993年版“新药临床前研究指导原则汇编”及“药理实验方法学”，采用光电法进行。分组测试，给药后45min进行测试小鼠置活动箱中适应3min，然后测10min内的小鼠自主活动数并记录。每组分三次给药，给药间隔为10min，直至将三组小鼠给药和测试完毕。采用spss11.5统计软件，用单因素方差分析结合组间LSD检验进行进行统计处理。
与空白组比较，复方酸枣仁柏子油(2.5、5、10ml/kg)、柏子油(5ml/kg)、酸枣仁油(5ml/kg)和地西泮均可使小鼠自主活动减少(P＜0.05或0.01)；与中剂量复方酸枣仁柏子油组(AB5ml/kg＝2.5+2.5ml/kg)比较，酸枣仁油组(2A5ml/kg)、柏子油组(2B5ml/kg)对小鼠的镇静作用弱于复方组(P＜0.05)，即A+B＞2A，A+B＞2B。拆方提示，复方酸枣仁柏子油中，酸枣仁油与柏子油之间产生了协同作用。(表5)表5 柏子油、酸枣仁油对小鼠自主活动的影响(x±s)
表1 对大鼠缺血2小时再灌注24小时的神经病学评分、大脑半球含水量及脑梗塞体积的影响
注★为藁本内酯/石菖蒲挥发油，▲为含有相当比例量藁本内酯的川芎挥发油；与假手术组比较＝P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001(2)对脑组织含水量的影响模型组缺血-再灌注一侧(大脑右半球)脑组织含水量非常显著高于假手组(P＜0.01)。试验药物V～X组脑组织含水量均显著低于模型组，与模型组比较有显著差异(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)，优于相同剂量的单一组分形式的藁本内酯(III、IV组)和石菖蒲挥发油(XI～XIII组)，如表1所示。
(3)对脑梗塞体积的影响假手术组脑组织无梗塞，模型组缺血侧脑组织有梗塞现象，梗塞区占全脑组织的百分比为26.6±6.3％。试验药物V～X组均可显著缩小缺血侧脑组织梗塞体积，与模型组比较有显著差异(P＜0.01，P＜0.001)，优于相同剂量单一组分形式的藁本内酯(III、IV组)和石菖蒲挥发油(XI～XIII组)，如表1所示。
(4)对组织形态学的影响假手术组两侧脑组织正常，模型组、试验药物组非缺血侧脑组织均正常。对于缺血侧脑半球模型组出现脑组织出血坏死及脑组织严重水肿、灶性坏死；试验药物V～X组均可缩小出血坏死灶，优于相同剂量单一组分形式的藁本内酯(III、IV组)和石菖蒲挥发油(XI～XIII组)。
上述试验结果显示，以藁本内酯和石菖蒲挥发油两基本有效药用成分组成的本发明的试验药物，可明显缩小脑缺血再灌注损伤引起的脑组织出血坏死灶、减轻神经细了相加作用。
对睡眠时间的拆方研究表明，与中剂量复方酸枣仁柏子油组(AB5ml/kg＝2.5+2.5ml/kg)比较，酸枣仁油组(2A5ml/kg)、柏子油组(2B5ml/kg)对小鼠的睡眠潜伏期作用的差异有显著性意义，说明复方中酸枣仁油与柏子油产生了协同催眠作用。
3.对戊巴比妥钠阈下剂量的影响实验材料、分组给药同正交实验方法和结果预试发现，各组在戊巴比妥钠阈下剂量并不是全部入睡，于是将观察指标定为入睡的动物数。剂量选择同上，地西泮的剂量为3.25mg·kg-1。预试找出使小鼠100％不入睡的剂量，为30mg·kg-1，各组动物灌胃给药，每天1次，连续3天。末次给药后45min后，各组动物均给予30ml·kg-1戊巴比妥钠(i.P.)，以15min内有多少动物翻正反射消失达1min以上为入睡，记录入睡的动物个数。因样本较小，且有理论数＜1，采用Fisher确切概率法进行统计分析。结果见表7。
表7 柏子油、酸枣仁油对戊巴比妥钠阈下剂量入睡动物数的影响
对比组以:表示。
与空白对照组比较，复方酸枣仁柏子油(5、10ml/kg)、柏子油(5ml/kg)、酸枣仁油(5ml/kg)和地西泮均可使小鼠戊巴比妥钠阈下剂量入睡动物数增加。
拆方研究表明，与中剂量复方酸枣仁柏子油组(AB5ml/kg＝2.5+2.5ml/kg)比较，酸枣仁油组(2A5ml/kg)、柏子油组(2B5ml/kg)对入睡动物数的影响差异无显著性意义，未观察到复方中的协同作用。与大剂量复方酸枣仁柏子油组(AB10ml/kg＝5+5ml/kg)比较，酸枣仁油组(A5ml/kg)、柏子油组(B5ml/kg)对入睡动物数的影响有显著的意义，即AB＞A，AB＞B，提示复方中产生了相加作用。
对睡眠时间的拆方研究表明，与中剂量复方酸枣仁柏子油组(AB5ml/kg＝2.5+2.5ml/kg)比较，酸枣仁油组(2A5ml/kg)、柏子油组(2B5ml/kg)对小鼠的睡眠潜伏期作用的差异有显著性意义，说明复方中酸枣仁油与柏子油产生了协同催眠作用。
4.直接催眠作用实验材料、分组给药同正交实验。每天一次，连续五天。
方法及结果末次给药后35min后，小鼠翻正反射消失超过30秒视为进入睡眠。记录入睡的动物个数。
因样本较小，且有理论数＜1，采用Fisher确切概率法进行统计分析。
与空白组比较，大剂量组和地西泮组均具有使小鼠直接入睡的作用(P＜0.05)，提示酸枣仁油与柏子油混合物在大剂量时有直接镇静催眠作用。由于计数资料例数偏少，未观察到复方的协同或相加作用的显著性变化。(表8)表8 酸枣仁油、柏子油对动物入睡的影响
对比组以:表示。
5.研究结论1、柏子油具有镇静催眠作用和用途。
2、正交实验确定了酸枣仁油和柏子油均处于主药地位，它们的最佳配比是1∶1，偏大剂量较好。
3、复方酸枣仁油与柏子油具有的镇静、催眠作用，二个子油之间具有相互协同或相加的中枢抑制作用。
上述研究证明，本发明的复方酸枣仁油与柏子油组合物比例恰当，具有明显镇静催眠作用。
权利要求
1.一种镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物，其特征在于，该组合物由酸枣仁油与柏子油组成，其质量比为1∶1。
2.酸枣仁油与柏子油的组合物用于制备镇静催眠药物的应用。
3.柏子油用于制备镇静催眠药物的应用。
全文摘要
本发明公开了一种镇静催眠的复方酸枣仁油与柏子油组合物，该组合物由酸枣仁油与柏子油组成，正交实验确定了酸枣仁油和柏子油均处于主药地位，它们的最佳配比是1∶1，偏大剂量较好。复方酸枣仁油与柏子油具有镇静、催眠作用，二个子油之间具有相互协同或相加的中枢抑制作用。本发明的复方酸枣仁油与柏子油组方合理，组方比例恰当，具有明显镇静催眠作用。本发明也同时证明了柏子油也能够用于制备镇静催眠药物的用途。
文档编号A61P25/00GK1857455SQ20061004263
公开日2006年11月8日 申请日期2006年4月6日 优先权日2006年4月6日
发明者袁秉祥 申请人:西安交通大学