专利名称：圆斑星鲽鱼的育苗方法
技术领域：
本发明属于鱼类的养殖领域，同时涉及鱼的喂饲、容器、加热或照明装置。
背景技术：
圆斑星鲽，属鲽形目、鲽科、星鲽属，是大型鲆鲽鱼类，但数量极少。星鲽具有较高的经济价值和养殖价值，是一个值得推广的优良品种。在我国水产养殖业内对圆斑星鲽的人工育苗的基础研究和育苗技术做了大量研究工作如陈四清等对圆斑星碟的分类特征、栖息环境、食物组成、生长发育及病害等进行了研究(圆斑星碟生物学特性研究《现代渔业信息》2002，17[10]25～27)。王开顺等对其胚胎及胚后发育进行观察(圆斑星碟胚胎及仔鱼发育的观察《中国水产科学》2003，10[6].451～456)。张永忠等分别用扫描电镜和透视电镜方法研究了圆斑星碟精子的超微结构(圆斑星碟精子的超微结构及核前区特殊结构《动物学报》.2004，50[4].630～637)。另外，还有如鱼类精子及胚胎的超低温冷冻保存等基础研究的报导，这些都为圆斑星碟鱼的人工繁育提供了基础技术和基础理论。郑惠东对圆斑星碟的人工繁育作了初步研究(圆斑星碟的人工繁殖及育苗技术《福建水产》.2003[3].15～17)。虽然育苗获得成功，然而成活率仅有18.3％。
发明内容
针对目前现有技术对圆斑星碟育苗所存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种可以有效提高受精卵的孵化率、鱼苗质量及成活率，且可实现工厂化生产，为大规模养殖提供苗种的圆斑星鲽人工育苗技术。
本发明的技术方案包括亲鱼促熟、受精卵孵化、苗种培育三个阶段，其具体实施步骤及要点如下 一、亲鱼促熟 圆斑星鲽亲鱼雌雄发育不同步，雌性亲鱼的产卵时间比较长，一般能持续2个月左右时间，而雄性亲鱼性腺发育较快，一般比雌鱼早，持续时间较短，为了同期获得成熟雌雄亲鱼，本发明采用了多种促熟方法(生态调控方法；激素促熟方法；精子冷冻技术)，保证亲鱼在整个繁育期雌雄同步 1、生态调控方法控光、控温促熟技术，多池调光技术。该项技术改变了以往简单控光、控温技术(只进行升温，增加光照)。使水温和光照同步进行变化，使其性腺发育随自然环境变化有一个变化的过程，这就更接近了圆斑星鲽自然产卵的水域环境，为亲鱼的顺利产卵做好前期物质基础。具体方法如下 1.1水温调整 降温期亲鱼培育水温应随自然水温(12℃)下降而降低，水温将到6～7℃。
恒温期自然水温在6～7℃时，恒温7～10天。
升温期水温每周升高1℃，达到12℃。
恒温期当水温达到12℃，恒温培育。
1.2光照调整 遮光布遮光(黑暗层)，采用灯光照明；光照强度500LX，光照时间随水温的变化而变化，具体情况如下 日照缩短期从降温期开始，每周缩光1小时(注从11小时开始缩光)。
日照恒定期当光照降到8小时，恒光培育。
日照升高期根据水温的升高，按每周增加1小时光照，达到18小时，恒光培育。
1.3投饵调整 饵料品种虾30％，沙蚕20％，黄花鱼20％，蛤15％，蛎子10％，鱿鱼5％。
添加维生素Vc，Ve，复合维生素，以饵料重1～2％添加，每隔10天投喂一次。
促进性腺发育药物卵磷脂，以鱼体重0.5％添加。
1.4日常管理 投喂一天一次，投足量，不同饵料搭配投喂。
换水每天换水一次，底污每天清扫一次。
洗鱼观察亲鱼摄食情况，摄食不良，药浴100ppm甲醛，1h.。
注意观察亲鱼性腺发育情况和摄食情况。
2、激素促熟方法 采用HCG、LHRH等激素促熟，调节雌雄发育速度的方法。该项技术长期以来被广泛使用，但由于催产的品种不同而用量和方法，也各有不同。圆斑星鲽一般进行两次催产。第一次HCG 400VI/KG；第二次HCG 200VI/KG；LHRH-A320ug/kg。
3、精子冷冻技术 根据鱼类发育“先雄后雌”规律，先行将发育成熟的雄性精子冷冻，待雌鱼成熟后使用。此项技术虽然在鱼类繁育上已经应用。但根据鱼类的品种不同，选择的保护液也各不相同，用量和配比也有差异。本发明具体方法如下保存容器液氮罐 保存方法VTS-2∶V精子＝7∶10 VDMSO∶V精子＝2∶10 V小牛血清∶V精子＝1∶10 混合均匀，放入试管，密封，放入液氮罐中，液面上8～10分钟，液面内5分钟，然后完全放入。保存时间一年。保存效果精子复温后成活率80％。
二、获卵和孵化 (一)获卵 本发明采用人工挤卵、干法授精，一般雌鱼产卵期为2个月左右，人工挤出的卵可分为过熟卵、成熟卵、未熟卵，因此，掌握好采卵时机是人工授精的重点之一。如采用“分子标记辅助家系繁育”技术中的标记方法，来确定最佳采卵时机，提高受精率和孵化率。标记方法选择性腺将要发育的亲鱼，一般有两种标记方法(1)背部肌肉标记(2)腹腔标记。根据鱼类的品种不同选择标记方法也不同，对于圆斑星鲽，本发明选择背部肌肉标记方法用标记枪把子弹打入背部肌肉(子弹必须经过消毒)，然后用感应器测出子弹的编码，记下数据，产卵时就可以确定每条亲鱼的产卵时间和产卵量。
(二)孵化 圆斑星鲽受精卵为特殊半浮性卵。通常在孵化池中微充气进行孵化。但本发明做出的受精卵前期为沉性，和未受精卵都沉于池底，很难分离，根据此种情况改变常规用新型孵化网箱(规格1m×1m×1m)；通过强充气使卵上浮或悬浮，来进行前期孵化，时间一般为96小时(水温12±0.5℃)。当受精卵发育到一定阶段时(体节形成)，受精卵表现为半浮性，此时我们把悬浮的受精卵收集，放入孵化池中进行后期孵化，一般24小时后孵出仔鱼。此时的孵化率在90％以上，孵化水温12±0.5℃，每天换水1/2，光照500LX，前期强充气，后期微充气，经过110-132小时脱膜孵出仔鱼。
三、鱼苗的培育 (一)前期培育 育苗池经清洗消毒后，加水至1m后投入仔鱼，放养密度5000～10000尾/米3，仔鱼经过7天开口摄食，水温12～13℃，仔鱼开口后投喂轮虫和添加小球藻，轮虫密度5个/ml，日投两次，换水2次/天，每次1/2，投饵在换水后。同时加入“防沉底反流装置”防止鱼苗下沉而死亡，前期培育时间为15天。
“防沉底反流装置”是一种通过水流的反冲使下沉鱼苗重新上浮或悬浮的装备。
(二)后期培育 使用规格为前期培育水体10-15倍水泥池进行后期培育，把前期培育的仔鱼移入。后期培育换水量加大，2次/天，每次2/3至全部，第15～35天继续投喂轮虫，每天投喂两次，投饵在换水后，水体轮虫密度保持5个/ml；第20～55天投喂丰年虫幼体，日投1～2次，密度保持在1～2个/ml；第45天以后，每日辅以大型桡足类及人工配合饲料，第20天后，稚鱼摄食较旺盛，粪便较多，开始进行吸底，每天吸底一次；第40天后由于有部分稚鱼开始附底，吸底操作必须非常小心，吸出来的稚鱼集中起来，消毒后再放回池内，培育期间池水pH保持在7.8～8.0之间，溶氧在4mg/L以上。
采用本发明的技术受精卵的孵化率达到16～17％，15天培育后成活率达40～50％，40天成活率达70～80％，伏底期成活率达80～90％，成长为3～5cm时的成活率达到90～95％。孵化至成长为3～5cm时的总成活率达到28.0～30.0％。鱼苗育成到8～9cm的总成活率达到21％以上。
与现有技术相比本发明的突出的优点是提供的圆斑星鲽人工育苗技术科学合理，实用性强，利用该技术可以实现工厂化生产，为大规模养殖提供苗种。成功地解决了圆斑星鲽雌、雄亲鱼发育不同步，反季节操作使鱼苗成活率低等关键性技术难题，使得本发明育苗达到较高的成活率，这是现有技术无法达到的水平。
以下用实施例对本发明作进一步说明。
具体实施例方式 实施例 圆斑星鲽亲鱼800尾，经过4个月的驯化。
一.采用如下方法进行培育和促熟 1.水温调整 降温期亲鱼培育水温应随自然水温(12℃)下降而降低，水温将到6～7℃。
恒温期自然水温在6～7℃时，恒温7～10天。
升温期水温每周升高1℃，达到12℃。
恒温期当水温达到12℃，恒温培育。
2.光照调整 采用灯光照明；光照强度500LX，光照时间随水温的变化而变化。
日照缩短期从降温期开始，从11小时开始缩光每周缩光1小时。
日照恒定期当光照降到8小时，根据水温情况确定光照时间。
日照升温期根据水温的升高，按每周增加1小时光照，达到18小时。
3.投饵调整 饵料品种虾30％，沙蚕20％，黄花鱼20％，蛤15％，蛎子10％，鱿鱼5％。
添加维生素Vc，Ve，复合维生素，用量1～2％，每隔10天投喂一次。
促进性腺发育药物卵磷脂、用量0.5％。
4.日常管理 投喂一天一次，投足量，不同饵料搭配投喂。
换水每天换水一次，底污每天清扫一次。
洗鱼观察亲鱼摄食情况，摄食不良，药浴100ppm甲醛，1h.。
注意观察亲鱼性腺发育情况和摄食情况。
5.激素促熟方法 采用HCG、LHRH等激素促熟，调节雌雄发育速度的方法。一般进行两次催产。第一次HCG 400VI/KG；第二次HCG 200VI/KG；LHRH-A3 20ug/kg。
二.采精、采卵与受精卵的孵化我们选择背部肌肉标记方法用标记枪把经过消毒子弹打入雌性亲鱼背部肌肉，然后用感应器测出子弹的编码，记下数据，产卵时就可以确定每条亲鱼的产卵时间和产卵量。此批亲鱼成熟后，采卵30余公斤。同时采得精子20余毫升，用如下液氮法保存保存容器液氮罐。精子与配料之比为VTS-2∶V精子＝7∶10VDMSO∶V精子＝2∶10V小牛血清∶V精子＝1∶10 将精子和配料混合均匀后装入试管，密封。放入液氮罐中液面上8～10分钟，液面内5分钟，然后完全放入。保存时间可达一年。精子复温后成活率80％。已成功保存精子20余毫升，可正常处理圆斑星鲽4000毫升成熟卵。
采用人工挤卵、干法授精取得受精卵。共做出0.5KG受精卵。
用规格为1m×1m×1m孵化网箱，以沉性卵孵化方法进行前期孵化。时间一般为96小时(水温12±0.5℃)，当受精卵发育到体节形成时受精卵表现为半浮性，此时我们把悬浮的受精卵收集，放入孵化池中进行后期孵化，一般24小时后孵出仔鱼。此时的孵化率在90％以上，孵化水温12±0.6℃，每天换水1/2，光照500LX，前期强充气，后期微充气。
三、鱼苗的培育 (一)前期培育 育苗池经清洗消毒后，加水至1m后投入仔鱼30000尾，孵化率16.7％，放养密度5000～1万尾/米3，仔鱼经过7天开口摄食，水温12～13℃，仔鱼开口后投喂轮虫和添加小球藻，轮虫密度5个/ml，日投两次，换水2次/天，每次1/2，投饵在换水后。同时加入“防沉底反流装置”，防止鱼苗下沉而死亡，前期培育时间为15天左右。成活率50％，“防沉底反流装置”是一种通过水流的反冲使下沉鱼苗重新上浮或悬浮的装备。
(二)后期培育 使用15米3规格水泥池，把前期培育的仔鱼移入。后期培育换水量加大，2次/天，每次2/3，第15～35天继续投喂轮虫，每天投喂两次，投饵在换水后，水体轮虫密度保持5个/ml；第20～55天投喂丰年虫幼体，日投1-2次，密度保持在1～2个/ml此阶段不断提高水温，每天升温0.5℃到16℃为止，使鱼苗快速生长，鱼苗成活率80％。
第45天以后，每日辅以大型桡足类及人工配合饲料，第20天后，稚鱼摄食较旺盛，粪便较多，开始进行吸底，每天吸底一次；第40天后由于有部分稚鱼开始附底，吸底操作必须非常小心，吸出来的稚鱼集中起来，用5ppm呋喃浸泡20分钟消毒后再放回池内，培育期间池水PH保持在7.8～8之间，溶氧在4mg/L以上，伏底期一般5～7天，此时饵料以配合饵料S3和丰年虫为主，水温16℃，换水3次，全量，此阶段成活率80％，规格2cm，进入伏底状态后，鱼苗基本稳定，死亡量减少，只是在饵料转换时，部分鱼苗因无法摄食而死亡，出现少量死亡，此时应改为流水，水温16℃。此阶段成活率90％，数量为8640尾，规格3～5cm。此时就可以进行正常养殖阶段。现阶段我们这批鱼苗规格7～8cm，数量6400尾，生长良好，状况稳定。
权利要求
1.圆斑星鲽鱼的育苗方法，其特征在于工艺步骤为
(一)亲鱼培育和促熟
1)水温调整
降温期亲鱼培育12℃水温随自然水温下降而降低到6～7℃；
恒温期自然水温在6～7℃时，恒温7～10天；
升温期水温每周升高1℃，达到12℃；
恒温期当水温达到12℃，恒温培育；
2)光照调整
采用灯光照明；光照强度500LX，光照时间随水温的变化而变化；
日照缩短期从降温期开始，从11小时开始缩光，每周缩光1小时；
日照恒定期当光照降到8小时，根据水温情况确定光照时间；
日照升温期根据水温的升高，按每周增加1小时光照，达到18小时；
3)投饵调整
饵料品种虾30％，沙蚕20％，黄花鱼20％，蛤15％，蛎子10％，鱿鱼5％；
添加维生素Vc，Ve，复合维生素，以饵料重1～2％添加，每10天投喂一次；
促进性腺发育药物卵磷脂、以鱼体重0.5％添加；
4)日常管理
投喂一天一次，投足量，不同饵料搭配投喂；
换水每天换水一次，底污每天清扫一次；
洗鱼观察亲鱼摄食情况，摄食不良，药浴100ppm甲醛，1h.；
5)激素促熟方法
采用HCG、LHRH激素促熟，一般进行两次催产第一次HCG 400VI/KG；第二次HCG 200VI/KG；LHRH-A3 20ug/kg；
(二)采精、采卵与受精卵的孵化先行人工采精后进行液氮冷冻保存，待后成熟雌鱼采用人工挤卵、精子复温后干法授精取得受精卵；用规格为1m×1m×1m孵化网箱，以沉性卵孵化方法进行前期孵化水温12±0.5℃96小时；当受精卵发育到体节形成时受精卵表现为半浮性，此时我们把悬浮的受精卵收集，放入孵化池中在水温12±0.6℃进行24小时后期孵化出仔鱼；每天换水1/2，光照500LX，前期强充气，后期微充气；
(三)鱼苗的培育
1)前期培育
育苗池经清洗消毒后，加水至1m后投入仔鱼，放养密度5000～1万尾/米3，水温12～13℃，仔鱼经过7天开口摄食，仔鱼开口后投喂轮虫和添加小球藻，轮虫密度5个/ml，日投两次，换水2次/天，每次1/2，投饵在换水后，同时加入“防沉底反流装置”，防止鱼苗下沉而死亡，前期培育时间为15天左右；
2)后期培育
使用规格为前期培育水体10-15倍水泥池进行后期培育，把前期培育的仔鱼移入；后期培育换水量加大，2次/天，每次2/3，第15～35天继续投喂轮虫，每天投喂两次，投饵在换水后，水体轮虫密度保持5个/ml；第20～55天投喂丰年虫幼体，日投1-2次，密度保持在1～2个/ml，此阶段不断提高水温，每天升温0.5℃到16℃为止，使鱼苗快速生长；
第45天以后，每日辅以大型桡足类及人工配合饲料，第20天后，稚鱼摄食较旺盛，粪便较多，开始进行吸底，每天吸底一次；第40天后由于有部分稚鱼开始附底，吸底操作必须非常小心，吸出来的稚鱼集中起来，用5ppm呋喃浸泡20分钟消毒后再放回池内，培育期间池水PH保持在7.8～8之间，溶氧在4mg/L以上，伏底期一般5～7天，此时饵料以配合饵料S3和丰年虫为主，水温16℃，日换水3次，全量，此阶段规格2cm，进入伏底状态后，鱼苗基本稳定，只是在饵料转换时，此时应改为流水，水温16℃，此阶段规格3～5cm；此后进行正常养殖阶段。
2.根据权利要求1所述圆斑星鲽鱼的育苗方法，其特征在于工艺步骤中所述人工挤卵的鱼卵是采取“分子标记辅助家系繁育”技术的标记方法来确定最佳采卵时机选择性腺将要发育的亲鱼，用标记枪把经过消毒的子弹打入背部肌肉，用感应器测出子弹的编码，记下数据，产卵时就可以确定每条亲鱼的产卵时间和产卵量。
3.根据权利要求1所述圆斑星鲽鱼的育苗方法，其特征在于工艺步骤中所述人工采精后进行液氮冷冻保存，其精子与配料之比为
VTS-2∶V精子＝7∶10
VDMSO∶V精子＝2∶10
V小牛血清∶V精子＝1∶10
将精子和配料混合均匀后装入试管，密封，放入液氮罐中液面上8～10分钟，液面内5分钟，然后完全放入；保存时间可达一年。
4.根据权利要求1所述圆斑星鲽鱼的育苗方法，其特征在于工艺步骤中鱼苗前期培育所述防沉底反流装置为一种通过水流的反冲使下沉鱼苗重新上浮或悬浮的装备。
全文摘要
圆斑星鲽鱼的育苗方法，其工艺为(一)亲鱼培育和促熟1.水温调整自然降温6～7℃后升至12℃恒温；2.光照调整采用灯光照明；3.投饵调整以虾、鱼、沙蚕为主，配以维生素、卵磷脂；4.日常管理清污、换水5.采用HCG、LHRH激素促熟。(二)采精、采卵与受精卵的孵化雄鱼早熟取精液氮保存；雌鱼后熟挤卵后与复温精子干法受精得受精卵；采取沉性卵与半浮性卵进行前、后期孵化出仔鱼。(三)育苗经过小池前期培育和大池后期培育出3～5cm鱼苗，总成活率达到28.0～30.0％；育成8～9cm的总成活率达到21％以上。本发明成功地解决了圆斑星鲽雌、雄亲鱼发育不同步，反季节操作鱼苗成活率低等关键技术难题。
文档编号A61K35/56GK1922991SQ20061004788
公开日2007年3月7日 申请日期2006年9月22日 优先权日2006年9月22日
发明者孟雪松, 于庆春, 陈超, 冯剑, 于德强, 姜志强 申请人:大连天正实业有限公司