专利名称：一种枇杷核水提取物的制备方法与用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物中提取药用活性成分的绿色化工制备方法，更具体涉及一种枇杷核水提取物的制备方法与用途。
背景技术：
枇杷为蔷薇科枇杷属[Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.]植物，是我国亚热带地区的珍稀特产水果。中国是世界上最主要的枇杷生产国，栽培面积和产量约占全球2/3，其主产区为福建莆田、浙江塘栖和江苏洞庭山，现有枇杷栽培品种354个，主要高产品种为早钟6号、解放钟、长红3号和太城4号等。
福建莆田的枇杷为“三大兴化名果”，为福建省重要的“名、优、特”水果。全市现有枇杷种植面积16万亩，约占全球枇杷种植面积的1/6、全国的1/4和福建省的1/2。福建莆田常太镇的枇杷种植面积达7万亩，被农业部评为“亚热带作物名优基地”，并被授予“中国枇杷第一乡”的称号，生产的枇杷被授予“绿色食品”、“福建省名牌农产品”和“原产地标记产品”等称号。
作为“山区林业综合开发”项目重点发展的树种，枇杷是近年来发展最快的经济树种之一，全国枇杷果年总产量已达16～20万吨。枇杷全身皆宝，枇杷核、花、果、核等部位含有丰富的挥发油、苦杏仁苷、皂苷、水溶性多糖、三萜酸、水溶性多糖和有机酸等成分，目前主要是以鲜食为主，除鲜食外，还部分加工成糖水罐头、果脯、果酱等，但尚未进行枇杷核、花、果、核等部位的深度开发和综合利用。枇杷果实营养丰富，有润喉、止咳、健胃、清热等作用，被誉为保健水果，深受国内外消费者的欢迎。
枇杷核系蔷薇科植物枇杷的果仁部分，具有很高的药用价值，富含苦杏仁苷、游离氢氰酸、皂苷、绿原酸、多糖、咖啡酸、小儿茶酸、小桔儿茶酸、蜡醇、4-亚甲基-DL-脯氨酸、反-4-羟甲基脯氨酸、顺-4-羟甲基脯氨酸等药用活性成分，苦杏仁苷含量为1.64％，约为杏仁的39％，具有明显的防癌、镇痛等功效，氢氰酸具有止咳、平喘等功能[柴振林等，浙江林业科技，2003，23(3)30-32]。
枇杷核皂苷主要以齐墩果烷型和乌苏烷型五环三萜类为主，易溶于热水、乙醇等极性溶剂。除淀粉外，枇杷核多糖主要以水溶性多糖为主，枇杷核苦杏仁苷(Amygdalin，C20H27O11)则是由苯甲醛、氢氰酸和葡萄糖组成的氰苷，在沸水中溶解度很大，可溶于乙醇、水等极性溶剂中，在25℃水中的溶解度约为8％，与沸乙醇中的溶解度相当，但在冷乙醇中的溶解度很小，几乎不溶于乙醚、正己烷等脂溶性有机溶剂。正因如此，中医临床用药时，常采用水提法提取枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖等。
1996年日本曾报导，枇杷核含有的苦杏仁苷成分，具有抗炎、抗肿瘤及免疫赋活作用[森下敬一，日本自然医学，1996，676-77]。
中国传统医学认为，枇杷核作为扶正固本中药，其所具有的抗炎、抗肿瘤、免疫赋活作用是以正向调节抗体免疫功能为基础的。现代药理药效学研究表明，枇杷核提取物具有增强抗体的非特异性吞噬功能、B细胞产生抗体的能力、T淋巴细胞转化率及NK细胞杀伤活性[李鹰等，中医药信息，1999，(1)51-52]。
中医药的精髓“正气存内，邪不可干”，即包含了正常菌群(双歧杆菌、乳酸菌、肠球菌、肠杆菌和类杆菌)和免疫功能对机体的保护作用，也包括了正常菌群对机体免疫功能的促进作用。枇杷核提取物对小鼠免疫功能及肠道正常菌群具有双重调节作用[李鹰等，中国微生态学杂志，2005，17(4)247-248]。
枇杷核的营养价值也较高，富含蛋白质、脂肪、维生素、膳食纤维、碳水化合物和微量元素等成分，枇杷核碳水化合物总量为杏仁的1.91倍，维生素含量和杏仁接近。但由于枇杷核直链淀粉含量很高，加工的食品口感差、易“返生”、食后易腹胀、难消化，不宜作炒食用；枇杷核中还原糖含量也较高，易在加工过程中产生褐变，不适宜加工饮料产品。
需特别值得注意的是，枇杷核中含有含有高达0.04％的剧毒物质氢氰酸，毒性比杏仁的要大，氢氰酸对人的致死量约为0.05g。根据枇杷核中苦杏仁苷及游离氢氰酸的总量推算，成人服食枇杷核10～15个、小儿5～7个即可致死，但成人服用杏仁达55个、小儿达12～15个才可致死。因此，将枇杷核作为直接的食品原料进行开发利用必须非常慎重。
在中国，枇杷资源丰富，价廉易得，药效明确，民间广泛用于食物和药物中，为不可多得的大宗天然药用植物资源。通常，干果仁约占果重的10％。但每年全国有数以万吨的枇杷核悉数舍弃而不加利用，不仅污染了环境，也浪费了宝贵的资源。随着枇杷产业化不断向纵深层次推进，作为产业化重要组成部分的枇杷核的综合开发利用越来越显得重要。为切实实现资源的高效利用和生产的可持续发展，研究以枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖为主要药用成分的提取物的制备方法与用途，对于枇杷核的综合利用和系列产品开发具有一定的指导意义。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种枇杷核水提取物的制备方法，该制备方法不仅工艺简单、提取效率高、生产成本低，而且提取的枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖的收率高，能适应和满足现代中医临床用药需求。
本发明的目的之二在于提取枇杷核仁的主要药用活性成分制成国际通行的中药提取物，具有疗效高、毒副作用小、使用方便、易于保存和携带的特点，达到变废为宝的目的。
本发明的目的之三在于提供一种将制备的枇杷核水提取物用于制备临床上具有止咳、化痰、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服药剂的用途，所述的口服药剂可以是胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
本发明枇杷核水提取物的制备方法的特征在于，以枇杷核为原料，以水为溶剂，提取以枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。
本发明制备方法的主要优点于采用单味药入药形式，充分考虑了传统中医临床用药习惯，利用了枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖等活性成分与蛋白质、多糖、蜡质、酯类、挥发油、树胶等杂质成分在热水溶液中溶解度的明显差异，达到了枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖等药用活性成分与杂质成分的高效分离，能达到变废为宝的目的。
本发明利用枇杷叶水提取物制备口服药剂的用途具有以下优点提取中国大宗特色水果枇杷的核仁中主要药用成分制成国际通行的中药提取物，不仅疗效高、毒副作用小、使用方便，而且易于保存和携带、能适应和满足现代中医临床用药需求，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策。
具体实施例方式
本发明实施例的制备方法为以鲜枇杷核或枇杷核粉末为原料，采用10～30倍枇杷核干果重量(W/W)的水，于50～85℃条件下提取1～3次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。
上述方法中采用50～85℃的温水，利用高温产生的溶解扩散效应，提高了溶剂对枇杷核植物细胞的穿透能力，使温水更容易渗透到枇杷核内部组织结构中，大大提高了枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖等药用活性成分的溶出速率和提取效率。
本发明所述的枇杷核水提取物具有用于制备止咳、化痰、消炎、平喘、降血糖或抗病毒作用的口服药剂的用途，所述的口服药剂可以是胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
本发明各制备物的理化参数测定方法如下(1)枇杷核苦杏仁苷含量的测定采用高效液相色谱法，以苦杏仁苷为对照。色谱条件色谱柱选用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，预柱C18(3.9mm×15mm)，紫外检测器，流动相为甲醇0.01％磷酸水溶液(20∶80)，流速1.0mL/min，柱温34℃，检测波长215nm，进样量20μL。
(2)枇杷核皂苷含量的测定采用香兰素-浓硫酸比色法，以齐墩果酸为对照。取已经稀释适当倍数的样品液1ml，加入0.5ml香兰素，再加2.5ml浓硫酸，反应10min后，于580nm波长下测定其吸光度值，以水作为空白。
(3)枇杷核水溶性多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖或D-半乳糖为对照。将试样溶液稀释到一定的倍数，取1mL到试管中，补水至2.0mL，再加入1mL 6％苯酚，立即加入5mL浓硫酸，静置10min，摇匀，室温放置20min，721分光光度计于490nm处测光密度值，以水作为空白。
(4)枇杷核总蛋白质采用FoLin-酚法测定，以小牛血清白蛋白为对照。含水量采用快速水分测定仪测定。
经测定，实验所用的莆田产枇杷核干果(含水量2.3％)中苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖等主要药用活性成分的含量分别为16.8～22.3g/kg、11.2～15.8g/kg和102.7～176.2g/kg。
本发明口服药剂制备方法如下(1)喷雾干燥条件为进料液浓度10～20波美度(60℃)，PG-5型喷雾干燥机进口温度160～250℃，出口温度60～110℃，离心转头工作压力1.6～3.0kgf/cm2。
(2)胶囊剂制备按照常规的制剂方法，选择1号硬胶囊，每粒内容物装填量约0.30g，于NJP-1000B型全自动硬胶囊充填机上进行药粉充填，于JPB-25IIB型平板式自动泡罩包装机上进行铝箔泡罩包装，可制成临床适用的枇杷叶提取物口服胶囊剂。
(3)滴丸剂制备按照常规的制剂方法，调整TZDW-1型通用滴丸机的温度控制系统，使滴头温度保持在50～85℃，液体石蜡等冷却剂的温度保持在-4～40℃；取枇杷叶提取物及其1～9倍重量的甘油明胶，置于加热器中，在搅拌条件下加热制成混悬液，将其置于滴丸机的滴头罐内，通过滴头滴入冷却剂中，由滴丸机出口将收缩成型的滴丸取出，去掉表面的冷却剂，干燥成枇杷叶提取物口服滴丸剂。
(4)颗粒剂制备按照常规的制剂方法，于SHK-220型高效湿法混合制粒机上造粒，于JXD-30A型颗粒自动包装机上进行包装，可制成临床适用的枇杷叶提取物口服颗粒剂。
本发明制备方法的实施例陈述如下实施例1以福建省莆田产枇杷核为原料，将鲜枇杷核水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷核粉末，将3.6kg枇杷核粉末放入提取罐中，用枇杷核粉末10倍重量(W/W)的水，于73℃提取3次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为82.7％，枇杷核皂苷的提取率为44.9％，枇杷核水溶性多糖的提取率为82.0％。
实施例2将20～30目枇杷核粉末1.8kg放入提取罐中，用枇杷核粉末30倍重量(W/W)的水，于50℃条件下提取2次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为81.6％，枇杷核皂苷的提取率为40.6％，枇杷核水溶性多糖的提取率为80.1％。
实施例3将20～30目枇杷核粉末2.5kg放入提取罐中，用枇杷核粉末22倍重量(W/W)的水，于85℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为80.6％，枇杷核皂苷的提取率为44.5％，枇杷核水溶性多糖的提取率为79.6％。
实施例4以福建省莆田产枇杷核为原料，将鲜枇杷核水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷核粉末，将1.7kg枇杷核粉末放入提取罐中，用枇杷核粉末30倍重量(W/W)的水，于66℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为80.9％，枇杷核皂苷的提取率为44.2％，枇杷核水溶性多糖的提取率为78.9％。
实施例5将20～30目枇杷核粉末2.3kg放入提取罐中，用枇杷核粉末24倍重量(W/W)的水，于85℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核皂苷的提取率为42.7％，枇杷核水溶性多糖的提取率为81.9％，枇杷核苦杏仁苷的提取率为81.2％。
实施例6将20～30目枇杷核粉末3.5kg放入提取罐中，用枇杷核粉末10倍重量(W/W)的水，于50℃条件下提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为83.4％，枇杷核皂苷的提取率为41.6％，枇杷核水溶性多糖的提取率为82.6％。
实施例7以福建省莆田产枇杷核为原料，将鲜枇杷核水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20～30目筛得枇杷核粉末，将2.1kg枇杷核粉末放入提取罐中，用枇杷核粉末18倍重量(W/W)的水，于50℃条件下提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为82.9％，枇杷核皂苷的提取率为41.8％，枇杷核水溶性多糖的提取率为83.7％。
实施例8将20～30目枇杷核粉末3.6kg放入提取罐中，用枇杷核粉末10倍重量(W/W)的水，于85℃条件下提取2次，每次2小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为81.5％，枇杷核皂苷的提取率为43.7％，枇杷核水溶性多糖的提取率为79.5％。
实施例9将20～30目枇杷核粉末1.8kg放入提取罐中，用枇杷核粉末30倍重量(W/W)的水，于58℃条件下提取2小时，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。经测定，制备的枇杷核水提取物中，枇杷核苦杏仁苷的提取率为80.7％，枇杷核皂苷的提取率为42.9％，枇杷核水溶性多糖的提取率为78.4％。
关于本发明枇杷核水提取物用途的说明将前述实施例1制备的枇杷核水提取物进行喷雾干燥，然后制成具有化痰、止咳、平喘、消炎功能的口服滴丸。
化痰、止咳、平喘、消炎等动物药效学评价实验说明如下。
1材料清洁级雄性小鼠(体重22±2g)和基础饲料，购自福建医科大学动物中心。数据用SPSS软件进行，采用Independent-Sample T Test方法对各组数据进行均值、标准误计算以及显著性检验。
2方法(1)止咳实验采用浓氨水喷雾引咳法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。阴性对照组给生理盐水，阳性对照组给可待因溶液(0.125g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·day，灌胃给药1h后，将小鼠放入实验装置内，用超声波医用雾化器喷入浓氨水溶液的雾化气体，喷雾40s，记录5min内每只小鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数，组间比较t检验。
(2)祛痰实验采用腹腔注射酚红祛痰法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。阴性对照组给生理盐水，阳性对照组给氯化铵溶液(5.0g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，灌胃给药1h后，0.6ml/只腹腔注射0.25％酚红溶液，30min后拉颈椎处死小鼠，分离气管，插入7号针头，5％碳酸氢钠冲洗3次，每次0.5mL，合并冲洗液，以酚红标准管比色，组间比较t检验，计算增加率。
(3)平喘实验采用组胺喷雾致喘法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。阴性对照组给生理盐水，阳性对照组给氨茶碱溶液(0.5g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，灌胃给药l h后，将小鼠放入实验装置内，用超声波医用雾化器喷入2％氯化乙酰胆碱和0.1％磷酸组胺等量混合溶液的雾化气体，喷雾15s，记录6min内每只小鼠的自喷雾开始至动物发生抽搐、翻滚反应的潜伏期，组间比较t检验，计算延长率。
(4)抗炎实验采用二甲苯致肿法，将小鼠以基础饲料适应饲养3天后随机分组，每组10只，小鼠自由进食和饮水。对照组给生理盐水，阳性对照组给氢化可的松溶液(0.375g/ml)，给药组灌服药液(相当于人用剂量的50倍)，各组给药量均为0.4ml/只·天，各组每日灌胃给药1次，连续3次，于末次给药1h后，分别以二甲苯棉球接触小鼠右耳5s，15min后拉颈椎处死小鼠。以直径8mm打孔器将小鼠双耳同部位切下，测定左右耳重量差，组间比较t检验，计算抑肿率。
3化痰、止咳、平喘、消炎等动物药效学实验结果枇杷核水提取物的化痰、止咳、平喘、消炎等动物药效学实验结果分别示于表1～表4。从结果可见，所制备的枇杷核水提取物能延长小鼠氨水致咳潜伏期和减少小鼠的咳嗽次数、促进酚红排泄量、延长动物翻滚反应的潜伏期、抑制二甲苯所致耳肿胀。
研究结果表明，本发明制备的枇杷核提取物具有一定的止咳、化痰、平喘、消炎功能。可进一步开发成高效低毒的治疗呼吸道炎症性疾病的新型中成药或天然保健食品。
表1枇杷核水提取物止咳动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10
与生理盐水阴性对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
表2枇杷核水提取物化痰动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10
与生理盐水阴性对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
表3枇杷核水提取物平喘动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10
与生理盐水阴性对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
表4枇杷核水提取物消炎动物药效学实验结果(X±SD)的影响n＝10
与生理盐水阴性对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
以上实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
本发明构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，而且利用中国大宗特色水果枇杷的核仁，提取其药用活性成分制成中药提取物，能达到变废为宝的目的，所制提取物具有疗效高、毒副作用小、使用方便、易于保存和携带，能适应和满足临床用药需求的特点，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广意义。
权利要求
1.一种枇杷核水提取物的制备方法，其特征在于以枇杷核为原料，以水为溶剂，提取以枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。
2.根据权利要求1所述的枇杷核水提取物的制备方法，其特征在于以枇杷核为原料，采用10～30倍枇杷核干重(W/W)的水，于50～85℃条件下提取1～3次，每次2～4小时，合并提取液，过滤，滤液在-0.05～-0.095MPa、50～80℃条件下，经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物。
3.一种如权利要求1或2所述的枇杷核水提取物用于制备具有止咳、化痰、消炎、平喘、降血糖或抗病毒作用口服药剂的用途。
4.根据权利要求3所述的枇杷核水提取物用于制备具有止咳、化痰、消炎、平喘、降血糖或抗病毒作用口服药剂的用途，其特征在于所述的口服药剂为胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液、糖浆剂、微囊剂、散剂、滴丸剂或丸剂等。
全文摘要
本发明提供一种枇杷核水提取物的制备方法与用途。该制备方法的特征在于以枇杷核为原料，以水为溶剂，提取以枇杷核苦杏仁苷、皂苷和水溶性多糖为主要药用成分的提取物，合并提取液，过滤，滤液经减压回收溶剂、真空浓缩成枇杷核水提取物；该方法所制的枇杷核水提取物具有制备止咳、化痰、消炎、平喘、降血糖或抗病毒作用的口服药剂的用途。本发明不仅构思新颖，工艺简单，提取效率高，生产成本低，而且利用中国大宗特色水果枇杷的核仁，提取其药用活性成分制成中药提取物，具有疗效高、毒副作用小、使用方便、易于保存和携带，能适应和满足临床用药需求的特点，符合国家倡导的中药现代化及国际化的产业政策，具有较大的推广意义。
文档编号A61P11/06GK1939444SQ20061006904
公开日2007年4月4日 申请日期2006年9月21日 优先权日2006年9月21日
发明者陈剑锋, 陈浩, 郭养浩 申请人:福州大学