专利名称：从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷有效部位及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药及提取加工领域，具体是从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷有效部位及其制备方法。该有效部位是人参皂苷Rg1以下组分含有的六种人参皂苷单体人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd。
背景技术：
目前各学者从人参、西洋参中提取人参皂苷二醇组、三醇组和齐墩果酸以及拟人参皂苷F11，人参皂苷各单体分离转化等项研究。
就目前技术研究现状，对人参皂苷及有效部位分离研究中，对方法的设计原则，指标确定，依据和意义缺少创新性，特别是在人参组分皂苷和单体皂苷的分离研究中，对药效作用特点，副作用和不良反应，没有在方法的设计中考虑，往往单纯在化学角度上进行，因此现有的某些工艺技术方法很难对其进行客观的综合评价。目前提取的人参皂苷包括Rg1以下组份和Rg1以上组份。人参皂苷Rg1药效研究结果人参皂苷包括Rg1以下组份副作用小，适合广泛人群服用。Rg1以上组份的作用对于快速型心脏病人是很不适宜的药物，长期服用可引起鼻衄血、烦燥、心率加速、血压升高等副作用，这是目前临床应用人参皂苷类制剂的不良反应，其服用人群受到了一定的限制。所以如何有效提取分离纯化人参皂苷包括Rg1以下组份提取物是研究的课题，经检索，未见报道。
发明内容
本发明的目的在于针对上述不足而提供一种以西洋参叶、人参叶共同为原料，有针对性地提取一种副作用小，适用人群广的人参皂苷有效部位。
本发明的另一目的是提供一种以西洋参叶、人参叶共同为原料，有针对性提取人参皂苷有效部位的制备方法。
本发明的技术解决方案是从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷的有效部位是人参皂苷Rg1以下组份由Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd组成。即人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd。
选用以西洋参叶、人参叶为共同原料，是因为人参叶含人参皂苷Re成分多，含人参皂苷Rb少，人参叶原料又充足，而西洋参叶含人参皂苷Rb成分多，两者共同提取，实现互补，达到设计效果。
该有效部位剂型是速溶片或医药上其它常规剂型。如按上述有效部位与制药上常用的药用载体、添加剂或辅料可以混合制成速溶片、胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、蜜丸、滴丸或其它常规制剂。优选速溶片。
功能主治本品补气养阴，活血化瘀，益肺生津，用于气虚阴亏，虚热烦倦，心肌缺血，心悸失眠，清除体内超氮化物及自由基，冠心病，心梗各种症侯治疗和保健。
本发明设计的最终目标根据上述研究结果，为此我们在工艺技术研究中把人参皂苷Rg以上组分(包括Rg1)去掉，这不仅以克服由此产生的不良反应，而且得到Rg以下组分皂苷和Rg以上组皂苷。这是本发明在技术工艺设计中的基本出发点。我们主要对双参叶人参皂苷Rg以下组分进行系统研究，该组分，包括6种人参皂苷单体即Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd，在临床前药效研究中取得较好的试验效果，使其达到更好的补气养阴，活血化瘀，益肺生津的功效。用于气虚阴亏，虚热烦倦，心肌缺血，清除体内的超氧化物，自由基，及冠心病，心梗的各种症侯的治疗。
从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷有效部位的制备方法，包括以下步骤(1)原料西洋参叶、人参叶按1∶0.2-0.6比例备料；(2)水提取原料煎煮3次，第一次加水为原料量的16倍，时间90分钟，药液过滤；第二次、第三次药渣加水10倍量，煎煮时间60分钟，药液过滤，合并过滤，静置6小时；(3)大孔吸附树脂柱吸附经处理后的水提取液上大孔吸附树脂柱吸附，药液返复上柱两次吸附；(4)大孔吸附树脂柱洗脱将吸附饱和的药液上大孔树脂柱进行洗脱，先用50-60℃的热水自吸附方向洗柱，然后用离子水同法洗柱，至柱底流出液近于澄明为止，停止上水，待柱内树脂自然下沉再用新配制的30％、70％乙醇同法洗柱，分别收集洗脱液。大孔树脂优选为AB-8，还可以是D101或D4020等。
(5)脱色将洗脱液抽入脱色罐，加入药液量1-4％的氧化镁，煮沸后加热回流50-70分钟，冷却3-5小时，倒入沉降罐中自然冷却沉降24小时；(6)浓缩将沉淀后药液取上清液过滤，二次过滤，浓缩，回收乙醇，减压浓缩至密度1.1-1.4放出；(7)精制分批将浓缩液以离子水配制成44-60mg/ml浓度上柱吸附，以洗脱剂梯度洗脱分别收集洗脱液，并回收乙醇；(8)纯化精制工序获得的总固物经缓冲溶液系统进行处理，处理液分别再上柱吸附、洗脱，分别收集洗脱液，浓缩、干燥即得。
技术指标控制(1)在制备方法上对工艺技术参数、质量控制参数和树脂残留物控制指标检测与评价方法，进行了系统研究，获得了准确数据；在原料质量控制方面按法定标准进行，药材来源于西洋参、人参GAP基地。
(2)质量控制采用HPLC色谱法TLC检识控制纯度，采用红外特征光谱控制关键半成品质量。
(3)工艺技术路线选用大孔吸附树脂多柱联梯度洗脱再纯化的工艺路线，，双参叶人参皂苷有效部位的制备方法工艺简便、成本低、纯品收率高，纯度达63.45％，回收率99.88％，工艺稳定，可供工业化生产应用。
(4)经查新未提及与本项研究的工艺条件、工艺路线、有效部位组成、配方和用途相同的研制报导。在主治功能，用法用量、剂型选择方面都有创新点。
(5)功能与主治上充分体现祖国中医药特点，在服用剂量上是传统用量的千分之一，剂型上选用速溶片。加快起效速度。
主要质量控制指标(1)采用高效液相气相色谱法测含量，只出现人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd的波峰，证明含有Rg1以下组份，六种人参皂苷单体总量63.45％。
(2)采用薄层色谱法检视，在同一薄板上，本品与人参皂苷对照品在相应位置上显相同的颜色斑点，不得与人参皂苷对照品Rg1在相应位置上显相同颜色斑点。
(3)红外光谱检测，应与双参叶(西洋参叶和人参叶)人参皂苷对照品显相同的红外特征光谱图。
根据胸痹心痛证中药药效学三项基本试验研究结果表明犬心肌缺血试验梗塞和缺血区面积明显小于对照组，心电图及生化指标优于对照组。
心脏功能及血流动力学试验本品能明显增加冠脉流量，增加心输出量降低肺动脉压。
心肌耗氧量试验犬在位心脏的心肌耗氧量测定，明显优于对照组。明显改善心肌营养代谢作用。
本发明的优点是1、在中医理论指导下结合临床应用现状，紧紧围绕补气养阴，活血化瘀，益肺生津的功能，并依据方中各药味化学结构特点、理化性质、设计研究方案进行分离方中的有效成分。在临床前药效研究中取得较好的试验效果，使其达到更好的补气养阴，活血化瘀，益肺生津的功效。用于气虚阴亏，虚热烦倦，心肌缺血，清除体内的超氧化物，自由基，及冠心病，心梗的各种症侯的治疗。2、副作用小，适用人群广泛，特别适用于复方药物制剂、功能食品及分离人参皂苷单体上的应用。3、制备方法上工艺的主要工艺参数和质量参数较为稳定，相对标准偏差符合技术要求，工艺技术成熟、简便易行、成本低廉，对环境无污染，纯品收率高，纯度达63.45％，回收率99.88％，可做为工业化生产应用。
下面将结合实施例对本发明作进一步详细描述。
具体实施例方式
实施例1人参皂苷速溶片西洋参叶、人参叶按1∶0.3比例投料提取双参叶人参皂苷再与制药常用辅料配伍制成速溶片。
实施例2从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷有效部位的制备方法，包括以下步骤(1)药材鉴定工序药材来源、药材标准、含量测定。
(2)前处理工序中药前处理经含量测定质检合格的清洗、晾晒、筛选后原料，按处方量称量。
(3)药材水提取工序按处方量称量西洋参叶100kg、人参叶30kg其称取三份，每份为一个批次，分别装入多能提取罐中(3m3)煎煮3次，第一次加水为原料量的16倍，通直汽加热至沸后，保持5分钟，关闭直汽，通夹层汽保持微沸90分钟，关闭夹层汽，煎煮液通过120目绢布，导入液泵过滤，再导入贮液罐中，药渣加水10倍量，同法煎煮60分钟，药液过滤，合并过滤，静置6小时。
(4)吸附工序将静置6小时后的药液分次通过装有已处理好的AB-8大孔吸附树柱进行吸附，药液返复上柱两次吸附。
(5)洗脱工序将吸附饱和的大孔树脂柱进行洗脱，先用50℃的热水3BV自吸附方向洗柱，流3BV/h通过树脂层，然后用离子水同法洗柱，至柱底流出液近于澄明为止，停止上水。待柱内树脂自然下沉再用新配制的30％、70％乙醇同法洗柱，流速为1BV/h，分别收集洗脱液。
(6)脱色工序将洗柱液抽入脱色罐，加入药液量3％的氧化镁，通过蒸汽加热煮沸后，加热回流60分钟，冷却4小时，倒入沉降罐中，自然冷却沉降24小时。
(7)浓缩工序将沉淀后药液取上清液一次性抽出用过滤棒过滤，然后再经扳框过滤机二次过滤，分次抽入减压浓缩罐中，回收乙醇，减压浓缩至密度1.3以上放出。
(8)精制工序分批将浓缩液以离子水配制成44-60mg/ml浓度上柱吸附，以洗脱剂梯度洗脱分别收集洗脱液，并回收乙醇。
(9)纯化工序精制工序获得的总固物经缓冲溶液系统进行处理，处理液分别再上柱吸附、洗脱，分别收集洗脱液，浓缩、干燥即得。纯度达63.45％，纯品收率达17.88％，回收率99.88％。
权利要求
1.一种从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷的有效部位，其特征在于该有效部位是人参皂苷Rg1以下组份由人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd组成。
2.按照权利要求1所述的从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷的有效部位，其特征在于有效部位提取物的含量大于50％。
3.按照权利要求1或2所述的从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷的有效部位，其特征在于剂型是速溶片或胶囊剂。
4.按照权利要求1或2所述的从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷有效部位的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1)原料西洋参叶、人参叶按1∶0.2-0.6比例备料；(2)水提取原料煎煮3次，第一次加水为原料量的16倍，时间90分钟，药液过滤；第二次、第三次药渣加水10倍量，煎煮时间60分钟，药液过滤，合并过滤，静置6小时；(3)大孔吸附树脂柱吸附经处理后的水提取液上大孔吸附树脂柱吸附，药液返复上柱两次吸附；(4)大孔吸附树脂柱洗脱将吸附饱和的药液上大孔树脂柱进行洗脱，先用50-60℃的热水自吸附方向洗柱，然后用离子水同法洗柱，至柱底流出液近于澄明为止，停止上水，待柱内树脂自然下沉再用新配制的30％、70％乙醇同法洗柱，分别收集洗脱液；(5)脱色将洗脱液抽入脱色罐，加入药液量1-4％的氧化镁，煮沸后加热回流50-70分钟，冷却3-5小时，倒入沉降罐中自然冷却沉降24小时；(6)浓缩将沉淀后药液取上清液过滤，二次过滤，浓缩，回收乙醇，减压浓缩至密度1.1-1.4放出；(7)精制分批将浓缩液以离子水配制成44-60mg/ml浓度上柱吸附，以洗脱剂梯度洗脱分别收集洗脱液，并回收乙醇；(8)纯化精制工序获得的总固物经缓冲溶液系统进行处理，处理液分别再上柱吸附洗脱，分别收集洗脱液，浓缩、干燥即得。
全文摘要
本发明涉及一种中药及提取加工领域，具体是从西洋参叶、人参叶中共同提取分离纯化人参皂苷有效部位及其制备方法。该有效部位是人参皂苷Rg
文档编号A61K31/7028GK101032535SQ20061020136
公开日2007年9月12日 申请日期2006年12月22日 优先权日2006年12月22日
发明者宿武林, 金慧, 睢大员, 宿延英, 宿艳霞, 宿延丽 申请人:吉林人参研究院