专利名称：小叶黄杨总生物碱在制备防治结核杆菌感染性疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药制药组成，具体地说是小叶黄杨总生物碱在防治结核杆菌 感染性疾病上的应用。
背景技术：
目前结核病又死灰复燃，呈现上升趋势。据WH02003年估计，全球现有20亿 人患有结核病。随着全球结核病疫情的回升，近10多年来一些发达国家和发展 中国家结核病耐药性病例急剧增多。我国近5亿人感染结核分枝杆菌，其中耐药 结核病人约5， OOO万人。开发低毒、高效的抗耐药结核新药是结核病防治的重 要任务。
小叶黄杨系黄杨科属(BuxusL)植物，产于秦岭以南各省区。黄杨属(Buxus) 植物在我国产17种及几个亚种和变种，富含生物碱，被称为黄杨生物碱(Buxus Alkaloids)，国外学者一般将这类化合物的综述放在甾体生物碱(steroidal alkaloids)部分。据中药大辞典记载中药黄杨性平，味苦，无毒。功用主治 祛风湿.理气，止痛.治风湿疼痛，胸腹胀气.牙痛.疼痛.跌打损伤。目前， 已从黄杨属植物开发出了黄杨宁(环维黄杨星D)和冠安片，主要用于心血管疾 病。但到目前为止，在国内外尚未见到用小叶黄杨总生物碱防治结核杆菌感染 性疾病的相关报道。
发明内容
本发明的目的是公开小叶黄杨总生物碱在防治结核杆菌感染性疾病上的应用。
本发明的技术方案是 一种小叶黄杨总生物碱的新用途，它是将从小叶黄
杨中分离提取出的小叶黄杨总生物碱，制成用于防治结核杆菌感染性疾病的药 物。
本发明所述的小叶黄杨总生物碱通过下述工艺流程制备
小叶黄杨(根、茎、叶)用1%冰醋酸、乙醇提取3次一浸膏经水溶后用活 性碳脱色，氨水调整PH二10 —异戊醇(或氯仿)萃取一产物用无水硫酸钠干燥后 减压回收一回收产物一用丙酮重结晶一总生物碱
本发明的化学结构属孕甾烷的衍生物，分子式C26H46N 0。
将小叶黄杨总生物碱体外应用到结核杆菌上，试验结果证明
小叶黄杨总生物碱对结核分枝杆菌有明显的抑制作用，在改良罗氏培养基
中，其MIC为2.5mg/ml。可以用小叶黄杨总生物碱开发成防治人类结核病的新 药。其剂型可以制成注射剂、片剂、胶囊、颗粒或口服液。
小叶黄杨性平、无毒、富含生物碱，具有行气活血、祛湿通络之功效，原 来易得，高效低毒，副作用小，具有开发成抗结核病新药的优越性。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作进一步的阐述 小叶黄杨总生物碱对结核分枝杆菌的体外抑菌作用的试验 结核分枝杆菌试验菌株分离来自桂林市结核病院住院病人的标本；试验药
物小叶黄杨总生物碱。
一、试验方法
1. 小叶黄杨总生物碱溶解取样品0.5g用适量99X二甲基亚砜溶解，再
加蒸馏水至2ml，对倍稀释三个浓度备用。
2. 试验菌及其在培养基中的菌量将在改良罗氏培养基斜面上生长良好的
培养物，用玛瑙乳钵磨成菌悬液，在改良罗氏培养基斜面上接种10—3mg/ml的菌 悬液O. lml。
3. 含药培养基的制备按《药理实验方法学》提供的配方制备改良罗氏培
养基，各培养管在灭菌前加入不同浓度小叶黄杨总生物碱各0.2ml，改良罗氏培 养基三管，使其终浓度为IO. Omg/ml、 5. Omg/ml、 2. 5mg/ml、 1.25mg/ml。 同时，留出改良罗氏培养基用作空白对照各三管。然后，将各培养基平放在血 清凝固器内90。C灭菌90 min， 一天一次，连续三天，制成斜面。冷却后取出置 37'C恒温箱内孵育24h，无菌生长即成。
4. 菌悬液的制备将2 3周菌龄的结核分枝杆菌(方法2试验菌)用接种 环小心取出，置于含0.5%吐温_80溶液的无菌试管内，用无菌玻棒小心研磨成 乳酪状，用无菌生理盐水稀释，并与麦氏比浊管比浊，配成湿重为l.O g/L的菌 悬液备用。
5. 接种方法将制备好的1.0g/L菌悬液经两次10倍稀释后，以灭菌滴管 准确吸取菌液O. lml分别接种于每支培养管，各管中的接种量为O. Olmg，接种完 毕后，置于37'C恒温孵箱内培养，4周观察结果。
6. 判定标准以对照管生长为有效结果，即对照管生长，如含药培养基上 生长菌落少于20个，视为不生长。
二、试验结果，如表
小叶黄杨总生物碱体外抗结核分枝杆菌作用结果 药物 终浓度(n=3)
_10. 0mg/ml 5. 0mg/ml 2. 5 mg/ml 1. 25 mg/ml
小叶黄杨总生 _ _ 一 +
物碱
二甲基亚砜 +
+蒸馏水_
注(_)表示无菌落生长，(+ )表示有菌落生长
三、结论
由表可见，小叶黄杨总生物碱对结核分枝杆菌的生长繁殖有一定的抑制作
用，在改良罗氏培养基中，其MIC为2.5 mg/ml。
权利要求
1.小叶黄杨总生物碱在制备防治结核杆菌感染性疾病药物中的应用，其特征是将小叶黄杨总生物碱应用到制备防治结核杆菌感染性疾病药物中。
2. 根据权利要求1所述的小叶黄杨总生物碱在制备防治结核杆菌感染性疾 病药物中的应用，其特征是所述的小叶黄杨总生物碱可制成片剂、颗粒剂、 胶囊剂、口服液或注射剂。
全文摘要
本发明公开了小叶黄杨总生物碱在制备防治结核杆菌感染性疾病药物中的应用，新药可以开发做成针剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等剂型。本发明的优点在于又找到了一种高效低毒的防治结核病的新药，而且是一种抗耐药性的新药，对保护人类健康有积极意义；本药高效低毒，副作用小，药源广，开发成本低。
文档编号A61K36/185GK101199561SQ20071004955
公开日2008年6月18日 申请日期2007年7月12日 优先权日2007年7月12日
发明者庆 徐, 徐雅娟, 李利亚, 梁荣感 申请人:桂林医学院