专利名称：：糖尿病患者内皮机能不良的治疗的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种糖尿病患者内皮机能不良的治疗方法。具^^地i兌，本发明涉;^一种在治疗糖尿病患者的涉及内皮才几能不良的病症(巨型血管和孩吏型血管)时用于改善内皮才几能的方法。技术背景在lt性疾病糖尿病中，身体丧失适当产生或响应激素胰岛素的能力，因此外周组织细^iL法^UL液中主动摄取葡萄糖,以便使用或^。4^尿病个体中，外周血中的葡萄糖水平能够升高(高M症)并且一^##在升高水平，除非采用一些介入形式(例如，外源',岛素的施用)，以便4^jk液中的葡萄糖返回到正常水平。如影殳有检查出来的话，糖尿病W的高i4t症能够导致休克、器官退^isl衰竭(例如肾衰竭、失明、神经病、心血管疾病)、组织坏死(例如需要实^A)、甚至死亡。两种主要的糖尿病形Ui型糖尿病和n型糖尿病。i型糖尿病，以前被称作胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)或幼年发作的糖尿病，是一种自身免疫疾病，其中身体损坏了旨的胰岛素生成P细胞(胰岛细胞)，从而导致绝对需要每日施用外源胰岛素，以维持正常的M水平。I型糖尿病经常在儿童和年^A中诊断出来，但是能够出现在^f可^^段。I型糖尿病在诊断出的糖尿病病例中占5-10%。迄今为止，更^f亍的糖尿病形^II型糖尿病，这种病以前被称作非胰岛素^lf负型糖尿病(NIDDM)。n型糖尿病以前^U皮称作^A^作的糖尿病，然而，这种糖尿病形式在日益增加的超重和临彭C^胖的儿童和年^AA群中jt^变得^口^f亍。II型糖尿病在所有诊断出的糖尿病病例中占90-95%。II型糖尿病"""^:首itjL现为胰岛素耐受性，即身体细^^殳有适当响应胰岛素、it^^y^部分iW丧失产生和分泌胰岛素的能力。II型糖尿病与树因素有关，这些因素包括嗜长的#、月辦、糖尿病史、^#尿病史、葡萄糖代谢损伤、身体不活动以及多人种^t族。患有II型糖尿病的*必须尝^1逸晴心节食、4^东和^巴以及辅助药物来拴制其il^水平。素包括血脂质异常、高j6i4I症、高m、内鹏e^f和胰岛素耐受性(1，2)。^L^f究已经清楚地证实，糖尿病'fiik脂质异常对导致糖尿病动脉粥样硬化形成的重要性，4见出的事实是，低密y^旨蛋白(LDL)以及高密^旨蛋白(HDL)与心血管辨之间的相关性超过空腹血装葡萄糖(3)。抑制素(statin)介入研究已经揭示，抑制素治疗对减少DM2中的心血管辨明显有益(4,5);然而，尽管取得了这样惊人的i^，大部分DM2患者甚"^f^]抑制素时仍然遭受心血管事件(6)。在最i^十年中，内皮机能不良已l錄露出为动脉粥^f匕形成的早期阶段之一。内皮机能不良，^/斤有糖尿病患者(即I型和II型)的特点，已I^L出对a心血管^ft具有预测价值(7-9)。与糖尿病诱发的血管疾病的多因素发病才;U^目符的是(10,11),许多治疗介入已经被"i^H古出具有改善DM2患者的内皮机能的潜能(9，12)。令人惊奇的是，尽管通iW血脂质异常患者进行抑制素治疗而使内皮机能可育將到完全随(13),但;I^L项研究已经证实，甚至强烈的抑制素介入治疗也不能使DM2的血管机能不良'1^1正常(14，15)。后者强调在此高;l^中iit^外治疗形式的可能性。高密^旨蛋白(HDL)^R^—^iai要为對l^^形的血刻旨蛋白，其大小、载脂蛋白(apo)和脂质的组合表现出相当大的差异性。HDL粒子具有1.063-1.21g/ml的密度范围(16)，并且由于比其它脂蛋白小，因此HDL能够在内皮细I^L间渗透，从而更容易以相当高的^l^积vjyiLi口、流体中(17)。几乎所有血浆HDL的主要粉旨蛋白都是apoA-I，其与磷脂和胆固醇相联，围绕一个胆固醇酯核(16)。由肝和肠分泌的初生(即新合成的)HDL不含有胆固醇酯，并且形状AJ:状的(16)。血浆HDL就与職动步械病的负相关在J^亍病学研究中已经得到纽的证明(18)。虽然动物实验已经证实HDL的抗动脉粥樹匕活性(19)，但是还不知itii种防护作用是与脂蛋白的反向胆固S^:作用有关，还是与不同的4^S有关。HDL提供的这些心脏防护作用的才這/多重4;i^不清楚，但是可能包括HDL将胆固醇W卜周组织反向^J'J肝脏的作用、低密^旨蛋白的氧4W中制、或通过环前列腺素生成中的变化而介导的血管舒血小板活化的调节(20)。HDL在与清除剂受体-B1(SR-B1)相互作用^还能够激活内皮一氧化氮(NO)*。考虑到有关HDL的NO启动效应的显Mt据，具有HDL增加能力的化^尤^4"人感M(21-24)。的确，在DM2患者中，HDL与内皮^'l"ij6L管^药^W目关(8)。在导lt^发明的工作中，发明人已经^H古出，外源重组HDL(rHDL)输注后HDL的增长是否轻变^管机能的改善以;S^L善程度。考察了在对DM2以;M目匹配的对照^ii行rHDL3^i^急性期(3^主后4小时)以及)^i^7天的ApoA-I水平和内皮机能。在本说明书中提到的出版物的著录项细节列在说明书的结尾。说明书中任常识部分。
发明内容在本说明书和所附的权利要求书中，除非上下文另夕卜要求，否则词汇"包括(comprise)'，和/或诸如"包括(comprises)"或"包括(comprising)，，这些变型将被理解成，tM包括所^:的^t或步Wil者Miail步^^且，但是不排BH^其它^t或步^l者^da4步Wi且。一方面，本发明提^"种糖尿病患者内皮机能不良的治疗方法，其包4#^患者施用(伊^胃外给药)有效量的高密^旨蛋白(HDL)。另一方面，本发明提供高密JLI旨蛋白(HDL)在制备施用(^M胃外给药)^t尿病患者以治疗患者的内皮机能不良的药物中的用途。又一方面，本发明提^"种^l尿病患者内皮机能不良治疗中的用于施用(^^i^M胃外给药)的制剂，其包括高密^旨蛋白(HDL)。图1表示出在^^愿者和DM2患者中以剂量,性方式动脉内3^主的内皮絲'ltiL管舒张剂5-羟色胺增大的前臂血流(FBF)。在基线，FBF对5-羟色胺的反应相比于对照組在DM2中得以削弱(p<0.001)。在输注rHDL之后，FBF对5-羟色胺的^^增大，但是没有达到可与对照i財目比的水平(p<0.01)。在输注rHDL后内皮^小仏管舒张性的改>##续7天(p<0.01)。rHDL输注不影响对照组的5-羟色胺反应。图2表示出，在J^ii管Jl姊药对L-醒的^(反映了JJf出一氧化氮(N0)的活性)，相比于对照組在DM2患者中是嫩匕的(p〈0.0Ql)。在输注rHDL之后，L-NMMA收缩剂的反应得以改善，并iL^^主后7天仍然显现(p<0.01)。相应于5-羟色胺数据，rHDL输注不影响对照iBLXt象的L-NMMA0。图3表示出响应硝"f4内的不絲内皮的血管舒张性，与对照^^目比，在DM2中更低(p<0.01)，并且rHDL^Hi^患者和对照组中都没有显示出对SNP血管舒张剂的响应有影响。M实施方式患有糖尿病的患者、尤其是患有II型糖尿病(DM2)的患者，其特征是心血管的危险絲增大。系统性内皮机能不良，是DM2的一个标志，预示将来具有^jl心血管事件的危险。考虑到HDL与NO途径之间的关系，本发明人已经^H古了rHDL输注对DM2的内皮机能的影响。具体地说，在7个DM2患者和7个血脂正常(norma1ipidemic)的对照者中，利用静脉闭塞体积扫描法(venousocclusionplethysmography)评4古内皮才几能。t^^血5充(FBF)分别响应内皮^'1"沐不，内皮的血管舒张剂5-羟色胺(5HT);SJ^^4内的动脉内^T^主，并且在rHDL(以蛋白质计，为80mg/kg)输注之前、之后4小时以及之后1个星期测定一氧化氮^SlNG-单曱基-H^氨酸(L-NMMA)的抑制剂。在絲，HDL在DM2和对照组中是一样的(1.1±0.2vs.1,2±0.3咖ol/L，ns)。5-HTi秀发的血管舒张性(max17±10%)和L-NMMA诱发的血管4姊性(max-17士15%)相比于对照纟驢DM2中是下IW;(5-HT114±22和L一NMMA-48±5%，二者都是P<0.05)。rHDL^Ji主分别提高了DM2和对照组的apoA-I水平(1.2士0.2至2.8±0.4vs.1.2±0.2至2.7±0.4g/L，p<0.01),并JL^DM2中'1^1了FBF对5HT(86±22%，p<0.05)和L一NMMA(-45±9%,p<0.01)的M。iH^t^在^ii^機7天(5HT;80±25%,p<0.05以及L-NMMA-37士7%，p<0.01,相比于基线)。rHDL输5i^对照组中没有影响。因此，此工作证实，HDL的急剧增大改善了DM2的内皮机能，并JLil种改善至少持续7天，尽管HDL^!返回到基线。一方面，本发明提^""种糖尿病患者内皮机能不良的治疗方法，其包括给患者施用有效量的高密J^旨蛋白(HDL)。优选的是，给药方i(^胃外给药。本文提到的"治疗"，被认为是具有其最广泛含义。术语"治疗"不一U指，受條^'台疗直到完全^U^止。因此，治疗包4沐定状;减病症症状的改善以及特定状况或病症严重程度的减轻，或者消除了特定状况或病症。正如本i^斤用的，所提到的"内皮机能不良的治疗"应净皮i/^是指M关内皮机能不良的病症的治疗中内皮机能的改善。这样的病症包括巨型血管病症(有关大血管的)诸如短暂性^jk发作(transientischemicattack)、中风(stroke)、绞痛、心M^t塞、心脏衰竭和外周血管疾病，以及微型血管病症(有关小血管的)诸:Ht尿病导致的视网膜病(非增生的、增生的、黄sa7jC肺)、微白蛋白尿、巨白蛋白尿(macroalbuminuria)、'^f末期疾病、|^_机能障碍、自主'^f申经病、夕卜周神经病、骨髓炎和下肢壯。本文提到的"糖尿病"患者应,^li旨I型糖尿病(DM1)或II型糖尿病(DM2)患者。按照本发明，^t尿病患者施用HDL。在此所用的术语"HDL"，是指所有形式的高密^l旨蛋白，并包括成熟HDL、初生HDL或重组HDL(rHDL)或它们的任何^^、以及由重组IU旨蛋白或重组翻旨蛋白功能M其其它类似物制成的rHDL。这样的类似物包括由每旨蛋白(Apo)结构衍生的功能肽，诸如国际专利申请W099/16459和W099/16408中描述的那些,这两篇文献的内容作为参考在此高密>^旨蛋白包括蛋白质成#脂质。蛋白质^AA^旨蛋白例如翻旨蛋白如载脂蛋白A-I(apoA-I)、载脂蛋白A-II(apoA-II)或载脂蛋白A-IV(apoA-IV)或重组每旨蛋白、或具有翻以'l^t的功能性同源肽。合适的脂质有磷脂，^it磷脂Sfc^，其^i^与其它脂质(胆固醇、胆固醇酯、甘油三酯、鞘脂或其它脂质)^^。月旨质可以是合^J旨质、天然出现的脂质或者它们的组合。HDL是重组HDL。重组HDL的生成例如在US5652339中和由Matz和Jonas(25)以及Lerch等人(26)进行了描述。带有重组糊旨蛋白的rHDL的生成例如在EP469017(在酵母中)、US6559284(在中)和国际专利乂/HfW087/02062(在五co//.、酵#Cho细胞中)以及W088/03166(在丑co//中)中进行了描述。这些文献^"篇的内^ft为^^考在此并A^^文。HDL以有效量扭用。"有效量，，是指iiJ'J以下^^斤必需的量至少部分获得所需的^,或者^^斤治疗的特定状况或病症的发作或抑制其ic^完全中止。此量随着以下因素的不同而不同幹治疗个本的tt^生理状况、挣治疗个沐的种族背景、所需的防护禾級、组^的配方、医疗状况的评估以及其它相关因素。期望此量M过常规试验能够确定的相当宽的范围内。toHDL的剂量范围是O.1-200mg、更舰10-80mgHDL(基于^J旨蛋白的重量)a^克体重/每次治疗。例如，所施用的HDL剂量可以是约0.2-100mgHDL/每千克体重(基于^旨蛋白的重量)，是在临^Ji必要的时间段(例如;l^钟至几小时，诸如高达24小时)以介入注脉/或^r^主的方狄药的。如果必要，hdl给药可以重复一次或m,所施用的实际量将由所治疗的状;;iil病症'^t和HDL的给药速率来决定。伊逸地，患者是人类，然而，本发明可以扩展到其它哺乳动物患者的治疗和/或预防，包括灵长类、牲畜动物(例如羊、猪、牛、马、驴)、实验室的实验动物(例如小鼠、兔、大鼠、豚鼠)、倂吕动物(例如狗、猫)^4皮捕获的野生动物。按照本发明，HDL^it过胃肠外给药途^^用给患者。胃肠夕卜给药包括不通过消^il(即非肠的)的^f可给药途径，诸如包才S主射、％^主等给药方式。注射给药方式例如包括在静脉(静脉内)、在动脉内(动脉内)、在肌肉内(肌肉内)和在M下面(皮下)注射。HDL也可用足以获得所需药^L果的剂量、以储存或li鄉己方的方式、通itj^下、皮内或肌肉内注射;iMfe用。适^f更利舰胃夕卜给药的组*包括与受体的血液舰等渗的活'l"ii且分的无菌水性制剂。此7W生制剂可以是按照^^方法^^合适的^lfc或润湿剂以及混悬剂调配的。无菌注射制剂也可以是在无毒、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射絲混悬液，稀释剂或溶剂例如聚乙二醇以及乳^^液。可糾的能够接受的载#溶剂包括水、胁^^液、^dt的碳水4^^(例如蔗糖、麦芽糖、脊藻糖、葡萄糖)以及等i^t/R^内溶lW卜，无菌不挥发性油(fixedoil)可便利地用作溶剂或混悬介质，出于此目的，可iMHi^r刺激性少的;f^发性油，包括合成的单-或二4油酯。jtb^卜，发細旨肪酸(例如油酸)可用于注射剂。这些治疗组合物的配方是^^页域内的技^A员众所周知的。^^适的药物可接受的载#/或稀释剂包^^以>^斤有的常^^剂、^t介质、填充剂、固体载体、水性溶液、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗和吸"t^i4剂等。药物活性物质的这些介质和试剂的^^1，在^4页域内AX^斤周知的，并ibft助实例在以下文献中有所描述化迈//^。/7，5户Asr咖cei/"ca/5We/7ces，第18版，MackublishingCompany,Pennsylvania,USA。除非^"f可常M/^质或试剂与活'hy且分不相容，否则应该认为其可用于本发明的药物组杨。辅助活'魁且分也可并入其它传送系统可包^^释传送系统。M的緩释传送系统是那些用于緩释孩汰舰嚢剂型的本发明活'^且分的秋的系统。许多类型的緩释传送系^PT^fM。这些系统包括(但不限于)(a)活'魁且分包含在M内的腐蚀系统，以及(b)活'^且分以受控的速率透过聚#的棘系统。本发明还提供了高密^旨蛋白(HDL)在制4^施用(^M胃夕卜给药)絲尿病患者以治疗患者的内皮机能不良的药物中的用途。又一方面，本发明提#—种^t尿病患者内皮机能不良治疗中用于施用(优选肠胃外给药)的药剂，其包括高密JL^旨蛋白(HDL)。通过以下非限定性实施例进一步阐述本发明。实施例I.方法招收7名不吸烟的无并发症的DM2患者(4男，3女)和7名不吸烟的*及性别相匹配的血脂质正常的对照对象(4男，3女)。DM2患者的包含标准如下(1)空腹j&4t〉7.Ommol/L，(2)在节^二曱g的治疗下；(3)不用外源胰岛素；(4)^别具有小于2.0和3.5咖ol/L的血浆甘油三酉旨和LDL胆固醇水平的^JL血脂质异常。^jk管疾病的存在其定义为ECG异常、异常踝臂指数或外周血管辨的心脏、脑史、以及自主神经病的存在是患者或对照对象的排除标准。所有女性患者是绝^的并J^i^^:素^^治疗。糖尿病的中值持续期间是5.2±1.2[平均值士则年。扯管活性药物(例如ACE抑制剂、血管紧受体阻断剂、钾通道阻断剂、阿司匹林、NSAID和维生素4h^)停用后至少4个星期进fr^H古。没有一个病A^M1抑制素治疗。酒精、##因和二甲^究前的12小时之内停用。所有对*出书面的知情同意书，并jjym于荷兰阿^t斯特丹的阿姆斯特丹大学的Academic医学中心(AMC)内部审查委员会的批准。按照赫尔辛基声明的原^完M究。研究方案利用静脉闭S^立紧计体积扫描法(如以前出版的(EC-4;HokansonInc，Bellevue，USA))评估絲处以及rHDL输註后的血管机能。测定是在恒温(22。C-24。C)的絲室内进行的，并JL^早晨8:OO开始。对棘整个研究中##仰卧位置。将20離的柔性聚氨酯导管(ArrowInc，Reading,USA)插入4械势臂的肱动脉。插A^进行30^4中的盐7K^主，以重新紅絲糾。其后，以毫升/分绅/100mL前臂组织体积(FAV)表达的前臂血流(FBF)，在双臂上同时进行测量。利用基于微型计#^的R^!i发系纟Aii行在M:测。在每次测量过程中，利用'tfei套充^i/li^上臂周围的M套袖充气(40咖Hg)。同时，将两边手^^充气到以上心脏收缩的M，以排除手循环(200mmHg)。连续监测动脉内M和心率。其次，测定FBF对累积剂量的内皮，'^iL管扩张剂5-幾色胺(5HT，Sigma;0.6,1.8，和6ng.l00raLFAV"1min—1)、不依赖内皮的血管扩张剂硝"f4内(SNP，SpruytHillen;6,60，180和600ng.100mLFAV"1.miiT1)和内皮NOM(eNOS)的竟争性抑制剂N^单甲基-L^t氨酸(L-NMMA，Kordia;50，100,200和400/ag400mLFAT1,min—的反应。以随才;U',施用5-羟色胺和硝"f^内输注，然后是L-NMMA输注。所有^^主物是按照药品生产质量管皿范(GMP)指导方针在AMC的药房中制备的。利用'|^4#^主泵，药剂M^f'j量分别动脉内给药6、4和8^4中。将在每个ij^主絲2^4中内获得的6个测定值平均化，以确定平均FBF。在15分钟的休息期后或者直到FBF返回到基线为止，进4谅3个不同的^^主。，#^脉导管插^",'潸中，以<纽4个小时以每千克体重80mg的剂量施用rHDL(CSL，Behring，Bern,Switzerland)(26,27)。其后，重复^i主过程。然后请求病A^重新开始施用药物(除了二曱^J^卜)，并JL^rHDL^^^7天得返回，以便重复内皮机能的测定。实验室刑古在12小时过夜禁食之后rHDL^T^主后，4小时后和7天后立刻>^#4^^样。在ijUt后的1小时内进行离心^，将^^份扣紧冷冻在液氮中，并在-80。C下贮存，直到实施测定为止。所有测定是在阿姆斯特丹大学医院，Academic医学中心，血管与临床实验室实施的。利用吡喷輔酸酯活化测定法(罗式诊断，巴塞尔，瑞士)测定ALAT和ASAT。利用HPLC(ReagensBio-RadLaboratoriesB.V.，荷兰)测定变种II(Bio-RadLaboratories)的HbAlc。利用己^"激酶法(Gluco-quant，于日立917;日立)双次评估血瞎。利用标准S^方法(罗式诊断，巴塞尔，瑞士)确定血浆"feH由三酯、总胆固醇、LDL和HDL水平。利用速率浊度法评估l&存血浆的apoA-I和apoB的血浆水平。统计分析所有临^l^:结果，包括^p43描数据，都表狄平均值土SD。借助双去尾(2-tailed)独立Studentt检验，t匕较两个组之间的描舰计。在每个3^H主步骤的^2^4中内将6个连续记录的FBF平均化。在手^L^充^的第一个30秒内进行的FBF记录不用于分析。利用2路(2-way)AN0VA实施两个组之间的各个对象的FBF测定、HDL质量和炎^#志物的统计分析，以便重复测定。概賴户<0.05^Ci人为;l^的，户<0.01^皮i人为^i非常絲的。II.结果对象特4iE^1中列出。患者与对照对^间的J^FBF没有M差异(表1)。正如所预料的，服2患者的空^_血瞎的血浆水平(戶<0，01)、血红蛋白Alc的血浆水平(户<0.01)、甘油三酯的血浆水平(？<0.01)和apoB的血浆水平(户<0.05)更高些。DM2患者与对照者之间的HDL"C和apoA-I水平相当。rHDL^^主4个小时^DM2和对照组的血浆apoA-I增加(分别为，1.2±0.2至2.8±0.4vs.1.2士0.2至2.7±0.4g/L,p<0,01)，而^I^主^7WDM2患者中^##'稍增大(为1.5士0.3g/L，相比于絲，p<0.05)。与对照纟^目比，DM2患者中的血浆apoB水平更高些，并且不受rHDL输注的影响(分别为，1.0±0.3至0.9±0.3vs.0.7±0.2至0.7±0.2g/L，ns)。r朋Z^^^M^參W^^的J^和长欢参祷内皮絲,ltiL管舒张剂5-羟色胺的动脉内％^^两个组中均以剂量，性方式使FBF增加。在基线处，FBF对5-羟色胺的响应相比于对照组在面2中得以削弱(p<0.001，图1)。rHDL输注之后，FBF对5-羟色胺的响应明显增强，但是^Mi^与对照纟射目当的水平(P<0.01，图1)。4v^感兴趣的是，内皮^H4jk管舒张性的改善在rHDL输注^维持了7天(p〈0.01，图1)。rHDL输注不影响对照组中的5-羟色胺反应(图1)。在基线处，血管收缩剂对L-NMMA的反应(反tt础NO的活性)，与对照组相tb^DM2患者中被削弱(p<0.001，图2)。rHDL^j^主^，L-NMMA歸剂的X^得以改善，在^^主后仍醋续7天(p〈0.01，图2)。与5-轻色胺数据相符，rHDL输注不影响对照组对象中的L-NMMA反应(图2)。i^，响应SNP的不,于内皮的血管舒张性，与对照^^目tb^DM2患者中更低(p<0.01，图3)，并且rHDL^jii^患者和对照组中都没有显示出对SNP血管舒张剂反应有影响。III.讨论辆究表明，与4^性别相匹配的对照^E4目比,！^出及受激NODM2患者中受到严重威胁。令人感兴趣的是，尽管DM2患者的HDL接近正常，rHDLi^主仍然明显改善内皮机能。此改善在rHDL^i主^持续高达7天，扭匕期间，HDL水平已经返回JJ^^值。这些数据暗示，HDL增加的策略在DM2中可提贿效，即l吏这些患者的HDL-C水平没有明显斷氐。賴，錄农雜与前面的研究相符(8，9,12)，在受体介导的刺激之后在DM2中基础NO的活性受损以及NO的释放削弱得到证实。有关糖尿病内皮机能不良，已经显示出；Ut才;US。必需的辅因子四lL^物喋呤(BH4)的生物有效性的减小，与内皮NO*的斷,目关，因为这可导致由eNOS直接生成氧自由基，而不生成NO(28-30)。其它才艮源也可以4吏自由》&生，力口，包括NADPH氧化酶以;SJ^立体糾^:(10)。若干项介入研究已经强调了R0S在糖尿病血管机能不良中的主要作用，报告内皮机ft^动脉内trJ主高^的^IU匕剂^得以完4H^1(9,12)。r舰餘浙嫂稀沐参祷rHDL输注与Jof出N0活性以及受体刺激的NO活'li^^i^数小时之内的快速改善相关。第一种解释是，rHDL增加了N0的生成。一氧化氮(N0)是由eN0S通过将L^t氨酸转化成L-錄酸而合成的。其活性由复杂的信号转导i^f圣来调节，包括改变eNOS磷酸化的激酶的活化，即MAP激酶和akt-激酶的信号化，或者增加胞内Ca2+的^f:，然后是eN0S的钙~4丐调蛋白絲性活化(33)。Yuhanna表明，apoA-I与内皮清除剂受体B-1的结合，伴M"主动脉中内皮,'I^t反应的增强(24),这主要是由于akt和MAP-激酶的活化(32)。此外，HDL还具有通过^M^eN0S蛋白的稳定性以;5Ut过P^eN0S从细^^到胞内细胞器的^il而正调节内皮细胞中的eN0S膜^i:的能力(23)。所有这些作用都是由于rHDL输注后基础N0有效性增大导致的，被评估肚管收缩剂对竟争1"生N0抑制剂L-NMMA的反应增大。相反，前i^几理不能完全解释5-羟色g赖性、受体刺激的N0有效性增大的原因，后者M于eN0S的4丐"4丐调蛋白的活化(31)。由于与内皮5HT—2a受体(33)结合的5-幾色胺不可育yLrHDL#r^#;^tt，而氧自由基导致的NO降解的减小提供了能够使NO生物有效性增大的第二条主要5^f圣。的确，HDL具有有效的抗氧化性，丝毫不是由于诸如二乙基对硝^^磷酸酯酶(paraoxonase)和血小皿活因子水解酶之类的酶在HDL颗粒上的存在而产生的(23)。r舰班#批艇长痴與令AJI目的是，内皮絲寸她管舒张'錄rHDL^i^1周仍然明显改善。相反，apoAI以及HDL水平已经几乎返回到^r^主前的水平。引人注意的是，在基线处，DM2的HDL水平与对照纟树象^;殳有明显区另iJ。相反，rHDL^;主无"^m可对对照组的血管机育^5没有影响。这些数据暗示，不管正常的HDL浓度，DM2中的HDL质量可被削弱。事实上，在DM2中HDL防护作用的丧失，部分是由于HDL中的主要亮氨酸链非S^I4^致的。ApoAI-HDL的糖化由于其中通过P0N-1活性的丧失而危及HDL避免LDL遭受氧化损失的能力(34)。jH^卜，糖化的HDL^f吏内皮中的eN0S表iil^f氐，导致N0生成能力的斷氐(35)。的确，DM2患者的HDL^!U匕活性水平与氧化应激水平以及糖化控制密切相联(36)。鄉麟雜由于M照组中rHDL在^T^i^4个小时其^i^殳有显现出来，因jtbk管机肯讽究在对照组中于7天^没有重复。据此，DM2患者第7天的血管机能数据与M以財照组第1天的M^t据进行比较'然而，由于对血管机能的主要结论涉;M目比于M处的DM2患者具有M改善，因jW^J叶照组中第7天研究的缺乏不影响在4^f究中得出的结论。其次，虽然仅仅研究了相当小一組的DM2患者，但是絲PM且患者中已^JL^有明显改善并iLit种改善在4小时以及1周后仍然重现的事实，有力支持了HDL对DM2患者的血管机冑沐^J1一明显结论，尽管样本量小。亂悉賴财賴抑制素是心血管防护策略的中心范例。然而，鉴于在抑制素治疗期间没有遮免的大量麥f牛，对最^la合治疗的搜索是一个全面进步。HDL增加策略的认可JMMfci2ii4扩展。HDL-C与心血管辨之间的强,!l^比关系在非糖尿病^t尿病患者中得到的结果是一致的。不幸的是，提供在HDL增加介入^心血管危险减小的证悟的可靠数据不足，it^要是由于缺^it棒性的和有效的增加HDL的化合物(37)。最近的数据已^4明，用变种勤旨蛋白(apoA-IMilano)生成的rHDL输注5周，食&够^^i^Ll心M^的患者的^^动脉粥^fM^p、的;^^f呈，甚至诸导其退化(38)。与这种'fel作用相符，实验室以及体内研究都已錄明，内皮机能不良的急'I^N^^1的，膝，进一步支持了HDL在其^固^t作用之上的效果。这支持了DM2中HDL增强的作用，即使HDL水平没有明显降低。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*p<0，05，#p<0.01参考文献1.HaffnerSM."Coronaryheartdiseaseinpatientswithdiabetes".^f/^//(2000);342(14):1040—2.2.RohrerL，HersbergerM，vonEckardsteinA."Highdensitylipoproteinsintheintersectionofdiabetesmellitus,inflammationandcardiovasculardisease."OwrO;7//7Z/p油/.(2004);15(3):269-78.3.TurnerRC，Mi11nsH，NeilHAa/."Riskfactorsforcoronaryarterydiseaseinnon-insulindependentdiabetesmellitus:UnitedKingdomProspectiveDiabetesStudy(UKPDS:23)".iil//(1998);316:823-828.4.PyoralaK，PedersenTR，KjekshusJ，Faergeman0，01ssonAG，ThorgeirssonG."Cholesterolloweringwithsimvastatinimprovesprognosisofdiabeticpatientswithcoronaryheartdisease.AsubgroupanalysisoftheScandinavianSimvastatinSurvivalStudy(4S)".//a6e^yCare(1997);20(4):614-20.5.ColhounHM，BetteridgeDJ，DurringtonPN，HitmanGA，NeilHA，LivingstoneSJ，ThomasonMJ，Mackn'essMl,Charlton-MenysV,FullerJH;CARDSinvestigators.Primarypreventionofcardiovasculardiseasewithatorvastatinintype2diabetesntheCollaborativeAtorvastatinDiabetesStudy(CARDS):multicentrerandomisedplacebo-controlledtrial,tocef(2004);364(9435):685-96.6.CheungBM，LauderIJ，UuCP，KumanaCR."Meta-analysisoflargerandomizedcontrolledtrialstoevaluatetheimpactofstatinsoncardiovascularoutcomes."/户力ar咖co厶(2004);57(5):640~51.7.SchachingerV，BrittenMB,Zeiher復"Prognosticimpactofcoronaryvasodilatordysfunctiononadverselong-termoutcomeofcoronaryheartdisease."C/rcw/a"'ra(2000);101:1899—1906.8.WoodmanRJ，PlayfordDA，WattsGF."Basalproductionofnitricoxide(NO)andnon-NOvasodilatorsintheforearnrmicrocirculationinType2diabetes:associationswithbloodpressureandHDLcholesterol.，，ZVa6"esbC7/"户ra".(2006);71(1):59-67.9.vanEttenRW，deKoningEJ，VerhaarMC，GaillardCA，RabelinkTJ."ImpairedNO~dependentvasodilationinpatientswithTypeII(non-insulin-dependeiit)diabetesmellitusisrestoredbyacuteadministrationoffolate."2/a6e"A^/<3(2002);45(7):1004-10.10.BrownleeM"Biochemistryandmolecularcellbiologyofdiabeticcomplications."组ure(2001);414(6865):813-20.11.DuX,EdelsteinD，ObiciS，HighamN，ZouMH，BrownleeNL"InsulinresistancereducesarterialprostacyclinsynthaseandeNOSactivitiesbyincreasingendothelialfattyacidoxidation."i^e"(2006);116(4):1071-80，12.Ting朋，TimimiFK，BolesKS，CreagerSJ，GanzP，CreagerMA."VitaminCimprovesendothelium-dependentvasodilationinpatientswithnon-insulin-dependentdiabetesmellitus."(1996);97(1):22-8.13.StroesES，KoomansHA，deBruinTW，RabelinkTJ."Vascularfunctionintheforearmofhypercholesterolaemicpatientsoffandonlipid—loweringmedication.""iicer(1995);346(8973):467-71.14.vanEttenRW，deKoningEJ，HoningML,StroesES，GaillardCA，RabelinkTJ."Intensivelipidloweringbystatintherapydoesnotimprovevasoreactivityinpatientswithtype2diabetes."Ar^r/osc/er7ftr咖6^"/oA(2002);22(5):799-804.15.BalletshoferBM，GoebbelS，RittigK，EnderleM，SchmolzerI，WascherTCetal."IntensecholesterolloweringtherapywithaHMG~CoAreductaseinhibitordoesnotimprovenitricoxidedependentendothelialfunctionintype-2-diabetes—amulticenter,randomised,double-blind,three—armplacebo-controlledclinicaltrial.，，五a^C7i"五/w/ocr/io7Z她^(2005);113(6):324-30.16.CockerillGW，ReedS:High-densitylipoprotein:Multipotenteffectsoncellsofthe'vasculature./"L0^c>7.(1999);■188:257-297.17.NanjeeMN，DoranJE,LerchPG，MillerNE:AcuteeffectsofintravenousinfusionofapolipoproteinA-I/phosphatidylcholinediscsonplasmalipoproteinsinhuman.Jrfer2'cw/e二7%rGfl7&^c,"/o厶(1999);19:979-989.18.GordonDJ，Probsfield几,GarrisonRJ:High-densitylipoproteincholesterolandcardiovasculardisease:fourprospectiveAmericanstudies,。.rcw緒。/7(1989);79:8-15.19，PasztyC,MaedaN,VerstuyftJ:ApolipoproteinAItransgenecorrectsapolipoproteinE-deficiency-inducedatherosclerosisinmice./'//^eW.(1998);94:899-903.20.TangiralaRK，TsukamotoK，ChunSH，UsherD，PureE，RaderDJ:Regressionofatherosclerosisinducedbyliver-directedgenetransferofapolipoproteinA-linmice.C/m//"/o/3(1999);100:1816-1822.21.BisoendialRJ，HovinghGK，ElHarchaouiK，LevelsJH，TsimikasS，PuK，ZwindermanAE，KuivenhovenJA，KasteleinJJ，StroesES."Consequencesofcholesterylestertransferproteininhibitioninpatientswithfamilialhypoalphalipoproteinemia.，，"er/'osc/err力ro迈6「縱历'。人(2005);25(9);el33-34.22.BrousseauME,SchaeferEJ，WolfeML,BloedonLT，DigenioAG,ClarkRW，MancusoJP，RaderDJ."EffectsofaninhibitorofcholesterylestertransferproteinonHDLcholesterol,"yEag/(2004);350(15):1505-1515.23.MineoC，DeguchiH，GriffinJH，ShaulPW."EndothelialandantithromboticactionsofHDL."C/rc(2006);98(11):1352—64.24.YuhannaIS，ZhuY，CoxBE，HahnerLD，Osborne-LawrenceS，LuP,MarcelYL，AndersonRG，MendelsohnME,HobbsHH，ShaulPW."High-densitylipoproteinbindingtoscavengerreceptor—Blactivatesendothelialnitricoxidesynthase.")Vat(2001);7(7):853—7.25.MatzCE，JonasA.,icellarcomplexesofhuj腿napolipoproteinA-lwithphosphatidylcholines,andcholesterolpreparedfromcholate—lipiddispersion."/Oe迈(1982);257:4535—4540,26，LerchPG，FortschV，HodlerG，BolliR."Productionandcharacterizationofareconstitutedhighdensitylipoproteinfortherapeuticapplications."Pfer5^多(1996);71(3):155-64.27.BisoendialRJ，HovinghGK,LevelsJH，LerchPG,AndresenI，HaydenMR，KasteleinJJ，StroesES."Restorationofendothelialfunctionbyincreasing,high—densitylipoproteininsubjectswithisolatedlowhigh-densitylipoprotein."C7irw/s"o"(2003);107(23):2944—8.28.StroesE,KasteleinJ，CosentinoF，ErkelensW，WeverR，KoomansH，LuscherT，RabelinkT."Tetrahydrobiopterinrestoresendothelialfunctioninhypercholesterolemia.，，/Zarei^.1997;99(1):41-6.29.AlpNJ，MussaS，KhooJ，CaiS，GuzikT，JeffersonA，GohN，RockettKA，Channon亂"Tetrahydrobiopterin-dependentpreservationofnitricoxideiediatedendothelialfunctionindiabetesbytargetedtransgenicGTP-cyclohydrolaseIoverexpression.，，/./"Fe"(2003);112(5):725-235.30.HeitzerT，KrohnK，AlversS，MeinertzT."Tetrahydrobiopterinimprovesendothelium-dependentvasodilationbyincreasingnitricoxideactivityinpatientswithtypeIIdiabetesmellitus.，，//a6"o/og/s(2000);43(11):1435-8.31.GoversR，RabelinkT丄"Cellularregulationofendothelialnitricoxidesynthase."血/Ae加/7%"/o/.(2001);280(2):簡-206.32.MineoC，YuhannaIS,QuonMJ,ShaulPW."Highdensityliporotein-inducedendothelialnitric-oxidesynthaseactivationismediatedbyAktandMAPkinases."C/e迈(2003);278(11):9142-9.33.TakanoS，HoshinoY，LiL，MatsuokaI，0noT，KimuraJ."Dualrolesof5-hydroxytryptamineinischemia-reperfusioninjuryinisolatedrathearts."/CarcT/ora"尸力ar咖co/TAer.(2004);9(1):43—50.34.HedrickCC，ThorpeSR，FuMX，HarperCM，YooJ，KimSM，WongH，PetersAL."Glycationimpairshigh-densitylipoproteinfunction."/VfltefWog/a.(2000);43(3):312—20.35.MatsunagaT，NakajimaT，MiyazakiT，KoyamaI，HokariS，InoueI，KawaiS，ShimomuraH，KatayamaS，HaraA，KomodaT."Glycatedhigh-densitylipoproteinregulatesreactiveoxygenspeciesandreactivenitrogenspeciesinendothelialcells."(2003);52(1):42-9.36.NobecourtE，JacqueminetS,HanselB，ChantepieS，GrimaldiA，ChapmanMJ，KontushA."DefectiveantioxidativeactivityofsmalldenseHDL3particlesintype2diabetes:relationshiptoelevatedoxidativestressandhyperglycaemia.，，ZVateto/og/a.(2005);48(3):529-38.37.KeechA，SimesRJ，BarterP，BestJ，ScottR，TaskinenMRetal;FIELDstudyinvestigators."Effectsoflong-termfenofibratetherapyoncardiovasculareventsin9795peoplewithtype2diabetesmellitus(theFIELDstudy):randomisedcontrolledtrial.，，Za/zcet(2005);366(9500):1849-61.38.NissenSe，TsunodaT，TuzcuEM,SchoenhagenP，CooperCJ，YasinM，EatonGM，LauerMA，SheldonWS，GrinesCL，HalpernS，CroweT，BlankenshipJC，KerenskyR."EffectofrecombinantApoA-IMilanooncoronaryatherosclerosisinpatientswithacutecoronarysyndromes:arandomizedcontrolledtrial."/■(2003):290(17):2292-300.权利要求1、一种糖尿病患者内皮机能不良的治疗方法，包括给患者施用有效量的高密度脂蛋白(HDL)。2、力4又利要求1所述的方法，其中所述患者是II型糖尿病患者。3、如权矛漆求l所述的方法，^#4球于，所必台疗是对糖尿病诱发的巨型血管病症的治疗，所述巨型血管病絲自短暂性^ii发作、中风、绞痛、心^Ltt、心M竭和外周血管疾病。4、H又利要求1所述的方法，其中，所必台疗是对糖尿病诱发的微型血管病症的治疗，所述微型血管病痂&自糖尿病导致的视网膜病(非增生的、增生的、黄JiM^肿)、微白蛋白尿、巨白蛋白尿、肾终末期疾病、勃起机能障碍、自主寸勤申经病、外周神经病、骨髓炎和下肢缺血。5、如权利要求l所述的方法，其中，所述HDL选自成熟HDL、初生HDL、重组HDL、由重组翻旨蛋白或重组,旨蛋白功能M其其它类似物制成的rHDL。6、H又利要求5所述的方法，其中，所述HDL是重组HDL。7、^H5UiJ要求1所述的方法，其中，所述HDL的给药剂量范围是每次治疗0.1-200mg/kg患者体重，伊CJt每次治疗10-80mg/kg体重。8、如权利要求l所述的方法，其中，所舰用颜胃夕卜给药。9、如WJ要求8所述的方法，其中，所舰胃夕卜给药选自静脉内、动脉内、肌内和皮下注射iUi^主。10、如权利要求9所述的方法，其中，所，胃夕卜给药是静脉内注射或输注。11、高密^J旨蛋白(HDL)在制备用于施用^t尿病患者以治疗该患者的内皮机能不良的药物的用途。12、NM，J要求11所述的用途，其中，所述患者是II型糖尿病患者。13、^4又利要求11所述的用途，其中，所iii台疗是对糖尿病诱发的巨型血管病症的治疗，所述巨型血管病症选自短暂性^it发作、中风、绞痛、心旨塞、心tt竭和外周血管疾病。14、如权利要求ll所述的用途，其中，所i^台疗是对糖尿病诱发的微型血管病症的治疗，所述微型血管病症选自糖尿病导致的视网膜病(非增生的、增生的、黄斑水肿)、微白蛋白尿、巨白蛋白尿、肾终末期疾病、勃起机能障碍、自主性神经病、外周神经病、骨髓炎和下麟部缺血。15、如权利要求11所述的用途，其中，所述HDL选自成熟HDL、初生HDL、重建HDL、由重组^J旨蛋白或重组^旨蛋白功能M其其它类似物制成的rHDL。16、如权利要求15所述的用途，其中，所述HDL是重组HDL。17、如权利要求11所述的用途，其中，所述HDL的给药剂量范围是每次治疗0.1-200mg/kg患者体重，伏选每次治疗10-80mg/kg体重。18、如权利要求11所述的用途，其中，所g用AM胃外给药。19、如权利要求18所述的用途，其中，所舰胃夕卜给药选自静脉内、动#>内、肌内和皮下注射或^ii主。20、如权利要求18所述的用途，其中，所舰胃夕卜给药是静脉内注射或输注。21、一种在糖尿病患者内皮机能不良治疗中施用的制剂，其包括高密度脂蛋白(HDL)。全文摘要本发明涉及一种糖尿病患者内皮机能不良的治疗方法，这种机能不良包括糖尿病诱发的巨型血管病症和糖尿病诱发的微型血管病症，该治疗方法包括给患者施用有效量的高密度脂蛋白(HDL)，优选是肠胃外给药。文档编号A61K38/17GK101254299SQ20071018219公开日2008年9月3日申请日期2007年3月1日优先权日2007年3月1日发明者E·S·G·斯托斯申请人:Csl有限公司