皱纹形成抑制剂的制作方法

专利名称：：皱纹形成抑制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及皱纹形成抑制剂，更详细而言，涉及抑制在紫外线照射下皮肤表面皱纹形成的效果优异的铍纹形成抑制剂。
背景技术：
：肌肤受到年龄增长和温度、湿度、紫外线等外力的影响，诱发皱纹和肌肤粗糙等症状。根据迄今为止的研究，认为在产生皱纹等的症状中，原因在于皮肤真皮的成纤维细胞功能下降和基质纤维减少或分解，出于改善这样的症状的目的而提出各种手段。例如，作为这样的手段，可以列举利用枇杷提取物(专利文献l)和氧化型辅酶A(专利文献2)、姬松茸(专利文献3和4)等的方法。但是，这些手段还不是从抑制皱纹形成效果和安全性两方面出发都能够充分满足的手段。另一方面，报告了乳酸菌的培养上清，即在主要以乳作为主要成分的培养基中接种乳酸菌而得到的培养物，具有作为皮肤外用剂的效果。例如，报告了乳酸菌的培养上清具有保湿作用(非专利文献l)、抗氧化作用(非专利文献2)、光防御作用(非专利文献3)、皮肤菌群的控制作用、皮肤pH控制作用(非专利文献4)。另外，近年来，作为在乳酸菌的培养上清中所含的成分，关于由乳酸菌代谢而在细胞外产生的多糖类的研究也蓬勃地开展起来，关于以各种乳酸菌产生的细胞外多糖类作为有效成分利用的皮肤外用剂的技术也有大量报告。作为这样的技术，例如，可以列举以乳链球菌、乳酸乳球菌等产生的磷酸化多糖类作为保湿剂和美白剂利用的方法(专利文献5和6)、以属于乳杆菌属的乳酸菌产生的多糖类作为消炎剂利用的方法(专利文献7)等。但是，这些乳酸菌培养上清(或乳酸菌产生的细胞外多糖类)是作为期待保湿作用和抗氧化作用的皮肤外用剂而被利用的物质，在抑制皱纹形成的效果方面没有发现有优异作用的。专利文献l:日本特公平5—17206号公报专利文献2:日本特开平8—175961号公报专利文献3:日本特开平11—228438号公报专利文献4:日本特开平11—228439号公报专利文献5:日本特开平10—251140号公报专利文献6:日本特开平9一249524号公报专利文献7:日本特开平7—70209号公报非专利文献l:日本香妆品科学会志，6(4)，p238，1982非专利文献2:日本香妆品科学会志第7回学术学会讲演要旨，59，1982非专利文献3:日本香妆品学会第8回学术学会讲演要旨，210，1983非专利文献4:日本香妆品学会第9回学术学会讲演要旨，132，198
发明内容本发明的目的在于提供一种具有特异地抑制在肌肤中形成皱纹，具体而言，具有特异地抑制由紫外线照射引起在皮肤表面形成皱纹的效果、安全性优异的新的皮肤外用剂。本发明的发明人为了解决上述课题而进行了深入研讨，结果发现，在数量众多的乳酸菌中，培养属于嗜热链球菌的乳酸菌而得到的培养上清具有特异地抑制皱纹形成的优异效果，从而完成了本发明。艮口，本发明提供一种皱纹形成抑制剂，该皱纹形成抑制剂含有属于嗜热链球菌的乳酸菌培养上清作为有效成分。另外，本发明提供一种皱纹形成的抑制方法，其特征在于，在皮肤上涂布含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清的组合物。本发明还提供含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清的组合物作为皱纹形成抑制剂的使用。发明的效果本发明的皱纹形成抑制剂以使用天然的乳酸菌得到的培养上清作优异，能够作为各种皮肤外用剂组合物使用。图1是表示实施例1的皱纹面积比率的图。图2是表示不同皱纹深度的面积比率测定的概略图。图3是表示实施例2的不同皱纹深度的面积比率的图图4是实施例2的小鼠背部皮肤复制物的照片。具体实施例方式作为本发明的皱纹形成抑制剂的有效成分的乳酸菌培养上清，通过在以乳为主要成分的培养基中培养属于嗜热链球菌的乳酸菌，从得到的培养物除去固体物而制造。作为在这里所使用的属于嗜热链球菌的乳酸菌，没有特别限定，但从所得的培养上清获得对皱纹形成的充分抑制效果的观点出发，优选使用选自嗜热链球菌YIT2021株(FERMBP-7537,保藏日平成8年C1996年)11月1日)、嗜热链球菌YIT2001株(FERMBP-7538，保藏日平成13年(2001年)1月31日)、嗜热链球菌YIT2085株(FERMBP-10880，保藏日2006年8月18日)、嗜热链球菌YIT2084株(FERMBP-10879，保藏日2006年8月18日)和嗜热链球菌YIT2059株(FERMBP-10878，保藏日2006年8月18日)中的1种或2种以上。另夕卜，这些属于嗜热链球菌的乳酸菌株保藏在独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305—8566))。作为培养属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养基，适合的培养基可以列举人乳、牛乳、羊乳、乳粉等动物乳、脱脂乳、由奶粉或脱脂奶粉得到的还原乳、奶油等乳制品，另外，也能够使用豆乳等大豆加工品。另外，这些可以原样地作为培养基使用，或者也可以根据需要稀释为适当浓度使用。另外，在这些培养基中，出于补充乳酸菌培养中的营养源的目的，也可以另行配合一般所使用的成分。作为这样的成分，可以列举酵母提取物、小球藻提取物、维生素A、维生素B类、维生素C、维生素E等维生素类、和包含各种肽类的蛋白质分解物、氨基酸类、钙、镁等的盐类。在上述培养基中使用的属于嗜热链球菌的乳酸菌培养，可以按照通常方法进行，但如果将培养温度和时间设定在某范围，就能够获得所得培养上清对皱纹形成的显著抑制效果，因此优选。即，如果使培养温度为30。C45。C、更优选为37。C42。C，使培养时间为1小时48小时、更优选为4小时24小时，就能够获得对铍纹形成具有显著抑制效果的培养上清。另外，作为此时的其它培养条件，可以列举静置、搅拌、振荡、通气等，可以从这些之中适当选择适于培养的方法进行。本发明中使用的乳酸菌培养上清，能够通过过滤等通常方法进行处理，从如上述那样得到的乳酸菌培养物中获得。在这里，本发明的发明人等鉴于以往关于皮肤外用剂报告的数量众多的关于各种乳酸菌产生的细胞外多糖类的技术见解，对如上述那样得到的属于嗜热链球菌的特定的乳酸菌的培养上清所含的多糖类也进行了分析，确认包含葡萄糖、半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖和葡糖醛酸，提示是和已知的乳酸菌产生的多糖类不同的特异多糖类。关于乳酸菌产生的多糖类，作为代表性的效果，可以列举保湿效果优异的透明质酸，但尚不知道透明质酸具有特异地抑制皱纹形成的效果，另外，关于其它乳酸菌产生的多糖类，也同样没有这样的见解的报告。本发明的皱纹形成抑制剂，如上所述，含有乳酸菌培养上清作为有效成分，该乳酸菌培养上清含有提示具有与以往报告的乳酸菌产生的多糖类不同的特异结构的多糖类，因此，认为是能够获得对皱纹形成具有特异抑制效果的物质。因此，作为本发明的皱纹形成抑制剂的有效成分的乳酸菌培养上清，是和含有公知的乳酸菌产生多糖类的乳酸菌培养上清具有明确区别的。本发明的皱纹形成抑制剂，如果是含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清作为有效成分的皱纹形成抑制剂，其使用方法、使用形态就不受特别限定。即，可以将属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清原样地或者浓縮或稀释使用，还可以通过喷雾干燥或冷冻干燥等手段制成干燥粉末使用。另外，作为含有该培养上清的成分，也可以将乳酸菌培养物原样地使用。本发明的皱纹形成抑制剂能够配合在化妆品、医药品、疗效性化妆品等皮肤外用剂组合物中，例如，能够制成化妆水、乳液、各种乳齐U、面膜(pack)、美容液等基础化妆材料，香波、护发素、煽油膏、生发液、保发水、发膏、发乳等头发用制品，洗浴剂等浴用化妆品，粉底、口红、染睫毛油、眼睑膏等妆扮化妆品，防晒品等特殊化妆品等。作为本发明的皱纹形成抑制剂的乳酸菌培养上清的配合量，不仅被特别限定，而且可以根据皮肤外用剂组合物的形态等适当设定，优选为0.01重量％100重量％，特别优选为0.1重量％90重量％，更加优选为1重量％30重量％。上述含有本发明的皱纹形成抑制剂的皮肤外用剂组合物能够按照通常方法制造，没有特别限定。例如，可以在精制水或化妆水基剂、乳剂基剂、乳液基剂等中，使本发明的皱纹形成抑制剂适量溶解或分散到能够发挥所希望的作用效果的程度。另外，在皮肤外用剂组合物中，除了作为必须成分的本发明的皱纹形成抑制剂以外，通常能够配合在皮肤外用剂中所配合的辅料。作为这样的辅料，可以列举表面活性剂、油分、醇类、保湿剂、增粘剂、防腐剂、抗氧化剂、螯合剂、pH调整剂、香料、色素、紫外线吸收-散射剂、粉体、维生素类、氨基酸类、水溶性高分子、发泡剂、颜料、植物提取物、来自动物的成分、海藻提取物、各种药剂、添加剂、水等。另外，本发明的皱纹形成抑制剂由于以具有食用经验的乳酸菌产生的多糖类作为有效成分，所以也能够配合在各种饮料食品中。这里所谓的饮料食品，是使上述皱纹形成抑制剂原样地、或包含该皱纹形成抑制剂的乳酸菌培养物、或者上述二者含有在饮料食品中，作为在皱纹形成的预防中有用的功能性食品或者食品原料被食用的饮料食品。例如，在上述皱纹形成抑制剂中添加适当助剂后，既可以使用惯用手段成形为适合于食用的形态，例如颗粒状、粒状、片剂、胶囊、糊剂等供食用，另外，也可以在各种食品，例如火腿、香肠等肉食加工食品，鱼糕、竹轮等水产加工食品，面包、糕点等中添加使用，或者在水、果汁、牛奶、清凉饮料等饮料中添加使用。另外，还能够将含有本发明的皱纹形成抑制剂的乳酸菌培养物直接制成发酵乳制品。实施例以下，列举实施例和试验例对本发明进行更详细的说明，但本发明不受这些实施例的任何制约。制造例1皱纹形成抑制剂的调制在lmL10%Skimmedmilk培养基(Difco公司生产)中植入1%的嗜热链球菌YIT2085株(FERMBP-10880)、嗜热链球菌YIT2021株(FERMBP-7537)、嗜热链球菌YIT2001株(FERMBP-7538)、嗜热链球菌YIT2084株(FERMBP-10879)或嗜热链球菌YIT2059株(FERMBP-10878)，在42。C培养4小时。接着，在冰中冷却后，加入三氯醋酸(TCA)，使最终浓度成为10%w/v，在4'C静置2小时。将其以11000Xg离心30分钟，在上清液中加入等量的99%冷乙醇，再在4。C静置一夜。利用Spectra/PorMembrane(MW3500)将其透析，按照通常方法冷冻干燥，得到5种培养上清(以下，根据使用的菌株，分别称为2085EPS、2021EPS、2001EPS、2084EPS和2059EPS)。将这些培养上清制成为以NaOH将pH调整为7的1%超纯水溶液，供给接着列举的验证。实施例1使用无毛小鼠对皮肤性状的验证1准备9周龄的雌性HOS:HR—1无毛小鼠，如下所示分为8组，每组各6只，按照试验系统涂布在制造例中调制的各种乳酸菌培养上清。在利用UVB照射装置(Vilberlouumat，France)1日照射30mJ/cn^紫外线的小鼠背部，使用棉棒在4日内涂布100pL乳酸菌培养上清(EPS)。另外，取代培养上清，在Cont组中涂布等量的灭菌水，在HA组涂布等量的1%透明质酸溶液。另外，为了不使前一日涂布的试样残留物影响各组的紫外线照射量，在紫外线照射前采用以灭菌水濡湿的脱脂棉擦净小鼠背。试验结束后，为了观察皮肤表面形态，首先将小鼠固定在台上，从背部皮肤涂布不透明的即干性硅橡胶(SILFLO，FIexicoDvelopments)，固定在台纸上而制作复制阴模。接着，按照通常方法，将复制阴模以30度角度入射照明，输入图象，二值化后进行图象解析，求出面积比率。在图1中表示该结果。另夕卜，所谓面积比率，是表示每一定面积中存在百分之多少铍纹。试验体系I:Cont组(UV+、水)II:HA组(UV+、1XHA溶液)III:2059组(UV+、2059EPS)IV:2021组(UV+、2021EPS)V:2084组(UV+、2084EPS)VI:2085组(UV+、2085EPS)vn:2001组(UV+、2001EPS)UV—组(UV—、水)如图1所示的那样，相比于Cont组，在涂布了乳酸菌培养上清(EPS)的组中，能够确认使由紫外线照射所产生的皱纹减少的效果。另外，另一方面，在涂布了对皮肤具有优异的保湿作用、作为乳酸菌产生的多糖类已知的透明质酸的组中，不能确认抑制由紫外线所引起的皱纹形成的效果，所以，提示本发明的皱纹形成抑制剂的有效成分不是透明质酸。实施例2使用无毛小鼠对皮肤性状的验证2为了进一歩验证无毛小鼠的皮肤性状，对实施例1的Cont组、UV一组和2085组求出不同皱纹深度的面积率。另外，如在图2中所示的那样，对于在实施例1的图象处理中被识别为皱纹的部分，将照射入射方向的长度d乘以tan9的结果定义为皱纹深度，不同皱纹深度的面积率即为该不同深度的面积比率。该结果表示在鼠背部的皮肤复制品照片(图4)和图3中。首先，如在图3中所示的那样，在Cont组中确认深皱纹多，与此相对，在2085组中深皱纹形成显著变少。另外，这样的倾向从图4中也明确显示。实施例3化妆水的调制以下述组成调制化妆水。另外，调制方法是在(7)中溶解(6)，在其中加入(1)(5)，充分搅拌而得到化妆水。[表l]<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例4乳液的调制以下述组成调制乳液。另外，调制方法是在(11)中加入(7)、(8)和(10)并加温，在80。C加入(1)(6)乳化，此后，加入(9)搅拌，冷却到室温而得到乳液。[表2]组成<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例5乳剂的调制以下述组成调制乳剂。另外，调制方法是在(14)中加入(9)、(10)、(12)和(13)并加温，在80。C加入(1)(8)乳化，此后，加入(ll)搅拌，冷却到室温而得到乳剂。[表3]组成<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>产业上的可利用性本发明的含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清作为有效成分的皱纹形成抑制剂，抑制皱纹形成的效果优异，而且，由于以使用天然的乳酸菌而得到的培养上清作为有效成分，所以安全性优异，能够作为各种外用剂组合物使用。权利要求1.一种皱纹形成抑制剂，其特征在于含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清作为有效成分。2.如权利要求l所述的皱纹形成抑制剂，其特征在于属于嗜热链球菌的乳酸菌选自嗜热链球菌YIT2021株(FERMBP-7537)、嗜热链球菌YIT2001株(FERMBP-7538)、嗜热链球菌YIT2085株(FERMBP-10880)、嗜热链球菌YIT2084株(FERMBP-10879)和嗜热链球菌YIT2059株(FERMBP-10878)中的1种或2种以上。3.—种皱纹形成的抑制方法，其特征在于在皮肤上涂布含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清的组合物。4.如权利要求3所述的皱纹形成的抑制方法，其特征在于所述属于嗜热链球菌的乳酸菌选自嗜热链球菌YIT2021株(FERMBP-7537)、嗜热链球菌YIT2001株(FERMBP-7538)、嗜热链球菌YIT2085株(FERMBP-10880)、嗜热链球菌YIT2084株(FERMBP-10879)和嗜热链球菌YIT2059株(FERMBP-10878)中的1种或2种以上。5.含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清的组合物作为皱纹形成抑制剂的使用。6.如权利要求5所述的使用，其特征在于所述属于嗜热链球菌的乳酸菌选自嗜热链球菌YIT2021株(FERMBP-7537)、嗜热链球菌YIT2001株(FERMBP-7538)、嗜热链球菌YIT2085株(FERMBP-10880)、嗜热链球菌YIT2084株(FERMBP-10879)和嗜热链球菌YIT2059株(FERMBP-10878)中的1种或2种以上。全文摘要本发明提供一种皱纹形成抑制效果优异、安全性优异的皱纹形成抑制剂。其为一种含有属于嗜热链球菌的乳酸菌的培养上清作为有效成分的皱纹形成抑制剂。文档编号A61K8/96GK101505721SQ20078003170公开日2009年8月12日申请日期2007年8月29日优先权日2006年8月30日发明者伊泽直树,千叶胜由,曾根俊郎,饭塚量子申请人:株式会社益力多本社