专利名称：：具镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽及制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及三肽，尤其涉及具镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽及制备方法，本发明还涉及该氨基酰酪氨酰色氨酸三肽在制备镇痛药物中的用途，属于生物医药领域。
背景技术：
：疼痛不仅是许多疾病的并合症，而且自身已经被看作是一类疾病。从疾病层面上讲，由各种各样的疼痛造成的生活质量下降波及了最大量的人群。由于有效的镇痛剂往往与依赖性相联系，所以发明新的无依赖性的镇痛剂具有重要价值。发明人在多肽研究中偶然发现发现，含色氨酸的寡肽通常具有镇痛活性。按照这种线索，本发明披露一类氨基酰酪氨酰色氨酸三肽镇痛剂。
发明内容本发明的目的之一是提供一类具有镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。本发明的目的之二是提供一种制备上述氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的方法。本发明的目的之三是提供一种能够镇痛的药物组合物。本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的—类具有镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽，其结构为通式I所示AA-Tyr-TrpI其中，AA选自丙氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、苯丙氨酸残基、甘氨酸残基、组氨酸残基、异亮氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、精氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、缬氨酸残基、色氨酸残基或酪氨酸残基。—种制备上述具有镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的方法，包括(1)将叔丁氧羰基保护的酪氨酸和色氨酸苄酯耦联，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸节酯；(2)脱去叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯的叔丁氧羰基，得到酪氨酰色氨酸苄酯；(3)将酪氨酰色氨酸苄酯与叔丁氧羰基保护的氨基酸进行耦联，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯；(4)将叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯氢解脱苄基，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸；(5)将叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脱去叔丁氧羰基，即得通式I的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。其中，步骤(1)中优选在二环己基羰二亚胺J-羟基苯并三唑J-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将叔丁氧羰基保护的酪氨酸和色氨酸苄酯耦联，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯；步骤(2)中优选在氯化氢/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯，脱去叔丁氧羰基，制备得到酪氨酰色氨酸苄酯；步骤(3)中优选在二环己基羰二亚胺、^羟基苯并三唑、^甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将酪氨酰色氨酸苄酯与叔丁氧羰基保护的氨基酸进行耦联，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯；所述的叔丁氧羰基保护的氨基酸优选为叔丁氧羰基保护的丙氨酸、叔丁氧羰基保护的天冬氨酸单苄酯、叔丁氧羰基保护的谷氨酸单苄酯、叔丁氧羰基保护的苯丙氨酸、叔丁氧羰基保护的甘氨酸、叔丁氧羰基保护的组氨酸、叔丁氧羰基保护的异亮氨酸、叔丁氧羰基保护的二叔丁氧羰基保护的赖氨酸、叔丁氧羰基保护的亮氨酸、叔丁氧羰基保护的蛋氨酸、叔丁氧羰基保护的天冬酰胺、叔丁氧羰基保护的谷氨酰胺、叔丁氧羰基保护的硝基精氨酸、叔丁氧羰基保护的丝氨酸、叔丁氧羰基保护的苏氨酸、叔丁氧羰基保护的缬氨酸、叔丁氧羰基保护的色氨酸或叔丁氧羰基保护的酪氨酸；步骤(4)中优选在钯碳存在下将叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯氢解脱苄基，制备得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸；步骤(5)中优选在氯化氢/乙酸乙酯溶液中叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脱去叔丁氧羰基，制备得到通式I的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。在小鼠甩尾模型上评价本发明化合物的镇痛活性，实验结果表明，本发明通式I化合物具有优秀的镇痛活性，临床上可作为镇痛剂应用。在此基础上，本发明的又一目的是提供一种具有镇痛活性的药用组合物，该药用组合物由治疗上有效剂量的本发明通式I化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂组成，即将有效量的本发明化合物与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法。该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等液体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有O.1%_99%重量，优选10_60%重量的本发明化合物。图1为本发明化合物的合成路线图；(i)DCC，H0Bt，匪，THF;(ii)4NHCl/EtOAc，(TC，30min;(iii)H2/Pd;Boc-AA选自叔丁氧羰基保护的丙氨酸、天冬氨酸单苄酯、谷氨酸单苄酯、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、二叔丁氧羰基保护的赖氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、硝基精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸。具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1制备Ala-Tyr-Trp(AYW)1)制备Boc-Tyr-Trp-OBzl室温将Boc-Tyr-0H(20.00g，71.17mmol)和H0Bt(9.60g，71.17mmol)溶解于无水THF中，冰浴下用NMM调节pH值到8_9，加入用无水THF溶解的DCC(14.66g，71.17mmol)，0。C搅拌析出大量二环己基脲(DCU)，15-20分钟后，反应液中加入H3P04'Trp-0Bzl(23.25g，59.31mmol)。半小时后撤去冰浴，室温搅拌。12小时后停止搅拌，过滤DCU，THF尽量旋干制得黄色粘稠液体。用300ml乙酸乙酯溶解后依次用饱和碳酸氢钠(200mlX3)，饱和食盐水(200mlX2)，5%KHS04(200mlX3)，饱和食盐水(200mlX2)洗涤，无水硫酸钠干燥。减压浓縮除去溶剂制得黄色粘稠液体，加入乙醚减压抽干，反复多次制得淡黄色固体36.473g(92%)，不经过柱层析分离直接用于下步反应。ESI+-MS(m/e)558[M+H]+.2)制备HC1Tyr-Trp-OBzl将Boc-Tyr-Trp-OBzl(10.OOg，17.95,1)溶解于无水乙酸乙酯，0°C下加入100mlHCl/EtOAc(4N)。0.5小时后反应完毕。加入石油醚，析出大量粉白色固体。过滤，滤渣用乙醚(50mlX3)洗涤。滤液减压浓縮至干，得到8.42g(95X)固体，投入下一步反应。ESI+-MS(m/e)458[M+H]+.3)制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl将Boc-Ala(403mg，2.13mmol)，HOBt(280mg，2.07mmol)溶于无水二甲基甲酰胺(DMF)中，(TC下，用NMM调节pH值至8-9，加入用无水DMF溶解的DCC(483mg，2.13,1)，反应20分钟。然后加入化合物HC1Tyr-Trp-OBzl(1.Og，2.07,1)。0.5小时后撤去冰浴，室温搅拌。12小时后停止搅拌，过滤DCU，滤液减压浓縮得黄色粘稠液体。残留物用50ml乙酸乙酯溶解后依次用饱和碳酸氢钠(30mlX3)，饱和食盐水(30mlX2)，5%KHS04水溶液(30mlX3)，饱和食盐水(30mlX2)洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤、滤液减压浓縮得973mg(80%)标题化合物，为黄色固体。ESI+-MS(m/e)629[M+H]+.4)制备Ala-Tyr-Trp将Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl(500mg)溶解于甲醇，加入15%Pd/C，通氢气48小时、滤除钯碳、滤液减压浓縮。残留物加入5ml4NHCl/EtOAc、(TC搅拌0.5小时、过滤、滤液减压浓縮。残留物用无水乙醚洗涤(30mlX3)。得到240mg(79X)标题化合物，为无色粉末。Mp.122-123C;[a]d25=16.6(c=1.23，CH3OH)，ESI+-MS(m/e)439[M+H]+;工HNMR(朋SC-300Hz，DMS0_d6)，10.82(s，1H)，8.37(d，J=8.0Hz，lH)，8.08(d，J=7.5Hz，1H)，7.58(d，J=7.5Hz，1H)，7.31(d，J=7.5Hz，1H)，6.98(m，5H)，6.64(d，J=8.4，2H)，3.55(q，J=6.9Hz，J=14.1Hz，1H)，3.10(m，4H)，2.09(s，1H)，1.20(d，J=7.5Hz，3H)。实施例2制备Cys-Tyr-Trp(CYW)1)制备Boc-Asp(OBzl)-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到870mg(79X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)763[M+H]+。2)制备Asp-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到100mg(60%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:189-191C;[a]d25=38.7(c=1.08，CH3OH);ESI+-MS(m/e)483[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.83(s，1H)，8.35(d，J=8.OHz，1H)，7.98(d，J=7.5Hz，1H)，7.56(d，J=7.5Hz，1H)，7.32(d，J=7.5Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.03(m，4H)，6.62(d，J=8.4Hz，2H)，4.34(m，2H)，3.72(m，1H)，3.22(m，4H)，2.77(d，J=6.5Hz，2H)，2.09(s，1H)。实施例3制备Glu-Tyr-Trp(EYW)1)制备Boc-Glu(OBzl)-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到760mg(79%)标题化合物，为无色固5体。ESI+-MS(m/e)777[M+H]+。2)制备Glu-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到242mg(88%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:154-155C;[a]D25=52.6(c=1.21，CH30H);ESI+_MS(m/e)497[M+H]+一HNMR(BHSC-300Hz，DMS0-d6)，10.87(s，1H)，9.24(s，2H)，8.57(d，J=8Hz，1H)，8.47(d，J=7.5Hz，lH)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.35(d，J=7.5Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.08(m，4H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.74(m，1H)，2.98(m，2H)，2.75(m，2H)，2.40(d，J=7Hz，2H)，2.10(s，1H)，1.98(m，2H)。实施例4制备Phe-Tyr-Trp(FYW)1)制备Boc-Phe-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到580mg(47%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)727[M+Na]+。2)制备Phe-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到308mg(69%)标题化合物，为无色粉末。Mp:148-149C;[a]D25=l.3(c=1.08，CH30H);ESI+_MS(m/e)514.9[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，12.68(s，1H)，10.93(s，1H)，9.25(s，1H)，8.83(d，J=8Hz，1H)，8.81(d，J=7.5Hz，lH)，8.11(s，2H)，7.57(d，J=7.5Hz，1H)，7.36(d，J=7.5Hz，1H)，7.21(m，8H)，7.08(d，J=8.4Hz，2H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，4.OO(s，1H)，3.35(d，J=7Hz，2H)，3.15(m，4H)。实施例5制备Gly-Tyr-Trp(GYW)1)制备Boc-Gly-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到990mg(88X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)634[M+Na]+。2)制备Gly-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到320mg(89%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:164-167C;[a]D25=19.6(c=1，CH3OH);ESI+_MS(m/e)425.3[M+H]+一HNMR(BHSC-300Hz，DMS0-d6)，12.68(s，1H)，10.94(s，1H)，9.24(s，2H)，8.57(d，J=8.7Hz，1H)，8.51(d，J=7.5Hz，1H)，8.05(s，2H)，7.56(d，J=7.5Hz，1H)，7.35(d，J=7.5Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.02(m，2H)，6.95(d，J=8.4Hz，2H)，6.63(d，J=8.4Hz，2H)，4.53(m，2H)，3.74(m，1H)，3.57(s，2H)，3.20(s，2H)，3.00(m，4H)，2.08(s，1H)。实施例6制备His-Tyr-Trp(HYW)1)制备Boc-His(Boc)-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到433mg(26X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)795[M+H]+。2)制备His-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到430mg(80%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:118-120C;[a]D25=32.6(c=1.04，CH30H);ESI+_MS(m/e)505[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，11.01(s，1H)，9.40(s，1H)，8.99(d，J=8Hz，1H)，8.93(s，1H)，8.31(d，J=8.OHz，1H)，7.58(d，J=7.5Hz，1H)，7.41(s，1H)，7.32(d，J=7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.14(d，J=8.4Hz，2H)，7.04(t，J=7.4Hz，1H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.42(m，2H)，3.30(m，1H)，3.07(m，1H)，2.95(m，2H)，2.78(m，2H)，2.08(s，1H)。实施例7制备Ile-Tyr-Trp(IYW)1)制备Boc-Ile-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到806mg(84%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)691[M+Na]+。2)制备Ile-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到290mg(88%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:168-169C;[a]D25=37.l(c=0.97，CH30H);ESI+_MS(m/e)481[M+H]+;'HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.88(s，1H)，9.24(s，1H)，8.53(d，J=8.lHz，1H)，8.43(d，J=7.5Hz，1H)，7.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.34(d，J=7.5Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.08(t，J=7.4Hz，1H)，7.06(d，J=8.4Hz，2H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.17(m，2H)，2.92(m，2H)，2.68(m，1H)，2.10(s，1H)，1.09(m，2H)，0.89(d，J=7.0Hz，3H)，0.8(t，J=7.3Hz，3H)。实施例8制备Lys-Tyr-Trp(KYW)1)制备Boc-Lys(Z)-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到640mg(40X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)787[M+H]+。2)制备Lys-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到280mg(79%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:131-132C;[a]d25=30.4(c=1.24，CH3OH);ESI+-MS(m/e)496[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，12.68(s，1H)，10.96(s，1H)，9.25(s，1H)，8.73(d，J=8.2Hz，1H)，8.46(d，J=7.5Hz，1H)，8.23(s，2H)，8.03(s，2H)，7.54(d，J=7.5Hz，1H)，7.36(d，J=7.5Hz，lH)，7.23(s，1H)，7.09(t，J=7.4Hz，1H)，7.06(d，J=8.4Hz，2H)，7.00(t，J=7.4Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.45(m，1H)，3.15(m，2H)，2.90(m，2H)，2.09(s，3H)，1.75(m，2H)，1.56(m，2H)，1.47(m，2H)。实施例9制备Leu-Tyr-Trp(LYW)1)制备Boc-Leu-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到1002mg(83%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)671[M+H]+。2)制备Leu-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到190mg(50%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:147-149C;[a]d25=44.0(c=1.07，CH3OH);ESI+-MS(m/e)481.3[M+H]+;工HNMR(朋SC-300Hz，DMS0-d6)，10.84(s，1H)，9.20(s，1H)，8.63(d，J=8Hz，1H)，8.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.38(d，J=7.5Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.08(t，J=7.4Hz，1H)，7.OO(d，J=8.4Hz，2H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.45(m，1H)，3.20(m，4H)，2.09(s，1H)，2.00(m，1H)，1.64(m，2H)。实施例10制备Met-Tyr-Trp(MYW)1)制备Boc-Met-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到780mg(80%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)711[M+Na]+。2)制备Met-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到480mg(80%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:151-152C;[a]D25=20.7(c=1.05，CH30H);ESI+_MS(m/e)499[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.78(s，lH)，9.21(s，2H)，8.03(d，J=7.5Hz，2H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.32(d，J=7.5Hz，lH)，7.13(s，1H)，7.04(t，J=7.4Hz，1H)，6.97(m，3H)，6.61(d，J=8.4Hz，2H)，4.45(m，1H)，4.35(m，1H)，3.56(m，1H)，3.23(m，2H)，3.06(m，2H)，2.39(t，J=6.7Hz，2H)，2.05(m，2H)，1.98(s，3H)。实施例11制备Asn-Tyr-Trp(NYW)1)制备Boc-Asn-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到876mg(78X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)672[M+H]+。2)制备Asn-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到403mg(82%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:122-123C;[a]D25=22.4(c=1.04，CH30H);ESI+_MS(m/e)483[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.88(s，1H)，9.44(s，1H)，8.65(d，J=8.0Hz，1H)，8.50(d，J=7.5Hz，lH)，8.25(s，2H)，7.60(d，J=7.5Hz，1H)，7.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.20(s，2H)，7.12(d，J=8.4Hz，2H)，7.00(m，3H)，6.69(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.00(m，6H)，2.09(s，1H)。实施例12制备Pro-Tyr-Trp(PYW)1)制备Boc-Pro-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到1321mg(92%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)655[M+H]+。2)制备Pro-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到300mg(82%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:160-161C;[a]D25=-12.5(c=1.12，CH30H);ESI+_MS(m/e)466[M+H]+一HNMR(BHSC-300Hz，DMS0-d6)，10.91(s，lH)，9.21(s，lH)，8.72(d，J=8.lHz，1H)，8.40(d，J=7.8Hz，1H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.35(d，J=7.5Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.03(d，J=8.4Hz，2H)，6.99(m，2H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，4(m，1H)，3.12(m，4H)，2.95(m，1H)，2.68(m，1H)，2.09(s，1H)，1.78(m，4H)。实施例13制备Gln-Tyr-Trp(QYW)1)制备Boc-Gln-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到730mg(72%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)706[M+Na]+。2)制备Gln-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到322mg(83%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:128-130C;[a]D25=31.5(c=1.08，CH30H);ESI+_MS(m/e)496[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.88(s，1H)，9.18(s，1H)，8.26(d，J=7.7Hz，1H)，7.95(d，J=8.8Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.17(s，2H)，7.08(t，J=7.4Hz，2H)，7.00(m，3H)，6.58(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.20(dd，J=5.0Hz，J=15.0Hz，2H)，3.09(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.92(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，2.68(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.02(m，1H)。实施例14制备Arg-Tyr-Trp(RYW)1)制备Boc-Arg(N02)-Tyr-Trp_OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到988mg(86X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)759[M+H]+。2)制备Arg-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到530mg(50%)标题化合物，为淡黄色粉末。Mp:174-176C;[a]d25=45.2(c=1.05，CH3OH);ESI+-MS(m/e)524[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.90(s，1H)，9.28(s，1H)，8.85(d，J=8.1Hz，1H)，8.52(s，2H)，8.04(d，J=7.5Hz，1H)，7.60(d，J=7.5Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.36(d，J=7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.06(m，3H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.62(d，J=8.4Hz，2H)，4.35(m，2H)，3.73(t，J=6.OHz，1H)，3.15(m，2H)，2.90(m，2H)，2.65(m，2H)，1.91(s，1H)，1.85(m，2H)，1.55(m，2H)。实施例15制备Ser-Tyr-Trp(SYW)1)制备Boc-Ser(-OBzl)-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到654mg(34%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)645[M+H]+。2)制备Ser-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到290mg(85%)标题化合物，为无黄色粉末。Mp:121-122C;[a]d25=9.8(c=1.09，CH3OH);ESI+-MS(m/e)455[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，12.78(s，lH)，10.91(s，lH)，9.22(s，lH)，8.60(d，J=8.lHz，1H)，8.42(d，J=7.5Hz，1H)，8.13(s，2H)，7.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.34(d，J=7.5Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.05(d，J=8.4Hz，1H)，6.98(m，4H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，5.50(s，1H)，4.50(m，2H)，3.78(m，2H)，3.09(m，2H)，2.09(s，1H)。实施例16制备Thr-Tyr-Trp(TYW)1)制备Boc-Thr-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到876mg(87X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)651[M+H]+。2)制备Thr-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到400mg(90%)标题化合物，为无黄色粉末。Mp:114-115C;[a]d25=4.7(c=1.04，CH3OH);ESI+-MS(m/e)469[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.96(s，1H)，8.66(d，=8.1Hz，1H)，8.52(d，J=7.5Hz，1H)，8.18(s，2H)，7.54(d，J=7.8Hz，1H)，7.35(d，J=7.8Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.06(m，3H)，6.98(t，J=7.4Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，3H)，3.91(m，1H)，3.65(m，1H)，3.21(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，3.08(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.95(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，2.72(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.10(s，1H)，1.10(d，J=6.3Hz，3H)。实施例17制备Val-Tyr-Trp(VYW)1)带[J备Boc-Val-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到789mg(82%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)657[M+H]+。2)制备Val-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到288mg(89%)标题化合物，为无黄色粉末。Mp:153-155C;[a]D25=7.3(c=0.96，CH30H);ESI+_MS(m/e)467[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.89(s，1H)，9.24(s，2H)，8.55(d，J=7.5Hz，1H)，8.43(d，J=7.5Hz，1H)，8.08(s，2H)，7.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.06(m，3H)，6.97(t，J=7.4Hz，lH)，6.61(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，3.21(dd，J=5.5Hz，J=15.OHz，1H)，3.10(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.92(dd，J=5.5Hz，J=15.OHz，1H)，2.75(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.13(m，1H)，2.10(s，1H)，1.07(d，J=7.0Hz，6H)。实施例18制备Trp-Tyr-Trp(WYW)1)制备Boc-Trp-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到1098mg(91%)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)745[M+H]+。Boc-Trp-Tyr-Trp-OBzl(3s)2)制备Trp-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到340mg(88%)标题化合物，为无黄色粉末。Mp:171-172C;[a]D25=6.2(c=1.03，CH30H);ESI+_MS(m/e)554[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，11.OO(s，1H)，10.95(s，1H)，9.24(s，1H)，8.85(d，J=7.9Hz，1H)，8.51(d，J=7.5Hz，1H)，8.00(s，2H)，7.57(d，J=7.5Hz，2H)，7.35(d，J=7.5Hz，2H)，7.24(s，1H)，7.22(s，1H)，7.08(d，J=8.4Hz，2H)，7.00(t，J=7.4Hz，2H)，6.93(t，J=7.4Hz，2H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，4.OO(s，1H)，3.25(dd，J=5.OHz，J=15.0Hz，2H)，3.15(dd，J=7.8Hz，J=15.0Hz，1H)，2.97(dd，J=5.OHz，J=15.0Hz，2H)，2.75(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)。实施例19制备Tyr-Tyr-Trp(YYW)1)制备Boc-Tyr-Tyr-Trp-OBzl按照制备Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到694mg(80X)标题化合物，为无色固体。ESI+-MS(m/e)722[M+H]+。2)制备Tyr-Tyr-Trp按照制备Ala-Tyr-Trp的操作得到548mg(88%)标题化合物，为无黄色粉末。Mp:126-127C;[a]D25=10.5(c=1.06，CH30H);ESI+_MS(m/e)531[M+H]+;'HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.92(s，1H)，9.35(s，1H)，9.30(s，1H)，8.78(d，J=8.0Hz，1H)，8.48(d，J=8.5Hz，1H)，7.97(s，2H)，7.57(d，J=7.5Hz，2H)，7.35(d，J=7.5Hz，2H)，7.21(s，1H)，7.06(m，6H)，6.99(t，J=7.4Hz，2H)，6.69(d，J=8.4Hz，2H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，3.15(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，3.00(dd，J=7.8Hz，J=15.0Hz，2H)，2.92(dd，J=5.OHz，J=15.0Hz，1H)，2.68(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，2H)。实验例1本发明化合物的镇痛作用评价实验1、受试化合物本发明实施例1-19制备的19个化合物；2、实验方法雄性ICR小鼠，体重在(22士2g)，每日光照12小时，室内温度为20_24°〇，湿度保持在45-65%，充足的食物和水。实验前一天开始禁食饲养，并将老鼠放入实验操作间适应环境，每只老鼠只参与一次实验。实验时将小鼠装入特制的固定筒内，尾部暴露于外，75%酒精进行消毒，测痛阈时以特制聚光灯产生的光束照射鼠尾下三分之一处，用秒表计时，计从照射开始到甩尾反应的潜伏期(tailflicklatency,TFL)作为痛阈。调节聚光灯与鼠尾距离使剌激强度较为灵敏TFL为2-6s。实验开始时先测3次，每次间隔5min，取均值作为基础痛阈。将受试化合物分别悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液中，灌胃给药，按每次灌胃剂量为0.2ml以及0.13mmol/kg剂量调节悬浮浓度。每次试验设0.5%CMC-Na组作平行对照。为防止皮肤烫伤，光照截止时间10s，间隔30min复测TFL以观察药物镇痛时效关系。以痛阈提高率评定药物镇痛强度痛阈提高率=(给药后痛阈值_基础痛阈值)+基础痛阈值。得到的结果列入表l，结果表明本发明化合物具有明确的镇痛作用。表1本发明化合物的镇痛活性实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注痛阈提高率用均数士SDX表示，n=IO，给药剂量O.13mmol/kg;a)与CMC-Na组比较P<0.05;b)与CMC-Na组比较P<0.01;c)与CMC-Na组比较P<0.001。实验例2不同剂量AYW和KYW的镇痛活性1)受试化合物本发明实施例所制备的化合物AYW和KYW;2)实验方法采用实验例1的小鼠光辐射热甩尾模型评价了受试化合物在0.13mmol/kg、0.08mmolmol/kg和0.05mmol/kg三种剂量下的镇痛作用。结果列入表2。实验结果表明受试化合物都剂量依赖地显示镇痛作用。表2不同给药剂量AYW和KYW的镇痛作用<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注痛阈提高率用5c士SDo/。表示，n=10;a)与0.08mmol/kg组比较P<0.05;b)与0.05,1/kg组比较P<0.05。权利要求具有镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽，其结构式为通式I所示AA-Tyr-TrpI其中，AA选自丙氨酸残基、天冬氨酸残基、谷氨酸残基、苯丙氨酸残基、甘氨酸残基、组氨酸残基、异亮氨酸残基、赖氨酸残基、亮氨酸残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、脯氨酸残基、谷氨酰胺残基、精氨酸残基、丝氨酸残基、苏氨酸残基、缬氨酸残基、色氨酸残基或酪氨酸残基。2.—种制备权利要求1所述具有镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的方法，包括(1)将叔丁氧羰基保护的酪氨酸和色氨酸苄酯耦联，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯；(2)脱去叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯的叔丁氧羰基，得到酪氨酰色氨酸苄酯；(3)将酪氨酰色氨酸苄酯与叔丁氧羰基保护的氨基酸进行耦联，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯；(4)将叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯氢解脱苄基，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸；(5)将叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脱去叔丁氧羰基，即得通式I的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(1)中在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三唑J-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将叔丁氧羰基保护的酪氨酸和色氨酸苄酯耦联，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯。4.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(2)中在氯化氢/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸苄酯，脱去叔丁氧羰基，制备得到酪氨酰色氨酸苄酯。5.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(3)中在二环己基羰二亚胺、N-羟基苯并三唑J-甲基吗啉和无水四氢呋喃存在下将酪氨酰色氨酸苄酯与叔丁氧羰基保护的氨基酸进行耦联，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯。6.按照权利要求2所述的方法，其特征在于；步骤(3)中所述的叔丁氧羰基保护的氨基酸选自叔丁氧羰基保护的丙氨酸、叔丁氧羰基保护的天冬氨酸单苄酯、叔丁氧羰基保护的谷氨酸单苄酯、叔丁氧羰基保护的苯丙氨酸、叔丁氧羰基保护的甘氨酸、叔丁氧羰基保护的组氨酸、叔丁氧羰基保护的异亮氨酸、叔丁氧羰基保护的二叔丁氧羰基保护的赖氨酸、叔丁氧羰基保护的亮氨酸、叔丁氧羰基保护的蛋氨酸、叔丁氧羰基保护的天冬酰胺、叔丁氧羰基保护的谷氨酰胺、叔丁氧羰基保护的硝基精氨酸、叔丁氧羰基保护的丝氨酸、叔丁氧羰基保护的苏氨酸、叔丁氧羰基保护的缬氨酸、叔丁氧羰基保护的色氨酸或叔丁氧羰基保护的酪氨酸中的任意一种。7.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(4)中在钯碳存在下将叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸苄酯氢解脱苄基，制备得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸。8.按照权利要求2所述的方法，其特征在于步骤(5)中在氯化氢/乙酸乙酯溶液中叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脱去叔丁氧羰基。9.一种治疗疼痛的药物组合物，由有效量的权利要求1所述的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽和药学上可接受的载体或辅料组成。10.权利要求1所述的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽在制备镇痛药物中的用途。全文摘要本发明公开了具镇痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽及制备方法和应用。本发明氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的结构式为AA-Tyr-Trp，其中，AA选自丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸残基。动物实验表明本发明化合物具有优秀的镇痛活性，是临床潜在的镇痛剂。文档编号A61P29/00GK101747410SQ20081022752公开日2010年6月23日申请日期2008年11月28日优先权日2008年11月28日发明者彭师奇,谭栎,赵明申请人:北京大学