专利名称：脑缺血障碍治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及脑缺血障碍治疗剂，具体地，涉及含有溶剂溶解性高的L-组氨酸衍生 物作为有效成分的脑缺血障碍治疗剂。
背景技术：
已知由于高热量食品的摄取或饮酒、吸烟、运动不足、压力等不良生活习惯而发病 的肥胖或高血压、高血糖、高脂血病等生活习惯病。生活习惯病被认为是脑梗塞或心肌梗塞 等成人病的原因。现实情况是，在成人病中脑梗塞多在病后残留身体障碍或语言障碍、痴呆 症状这样的后遗症。脑梗塞是指这样的疾病例如，由于脑动脉被血栓堵塞或硬化而变窄，故产生脑 缺血，对脑组织的氧和营养的供给不足，结果脑组织陷入坏死(necrosis)或与其接近的状 态。已知在脑梗塞中，在由脑缺血状态脱离时会产生自由基，其引起周边的脑组织的进一步 坏死，由此脑缺血障碍进一步发展。脑缺血障碍的治疗大体分为2种。一种为，例如通过血栓的溶解和血管的扩张而 使血流恢复，另一种为，阻止自由基或肿胀导致的脑组织的坏死的发展。均是以药物疗法为 主流，但在前者中，例如使用血栓溶解剂或血小板凝集抑制剂，在后者中，例如使用自由基 清除剂或抗浮肿剂。为了使脑梗塞的预后良好，必须将血流的恢复和阻止坏死的发展这两 种的治疗组合进行，尤其重要的是阻止坏死的发展。但是，阻止坏死的发展来抑制脑障碍的药剂有限，且还存在副作用的问题。作为 脑保护剂，已知作为自由基清除剂的依达拉奉(Edaravone) (3_甲基-1-苯基_2_吡唑 啉-5-酮)，但依达拉奉具有以高几率引发肝功能障碍或肾功能障碍这样的副作用的问题。 因此，副作用少的脑缺血障碍治疗剂受到广泛探索。例如，在专利文献1中记载了，作为氨基酸之一的L-组氨酸表现出脑缺血障碍的 抑制效果。但是，在L-组氨酸中，存在游离的L-组氨酸在水(25°C )中的溶解度低，为4. 3g/ dL(0. 28mol/L)的问题。为了使血中的L-组氨酸浓度迅速地上升，理想的是经静脉给药，但 由于L-组氨酸在水中的溶解度低，因此配制以有效浓度含有L-组氨酸的注射剂伴有困难。 为了提高L-组氨酸的溶解度，考虑以盐酸盐等盐的形态使用L-组氨酸，或者在注射剂中加 入酸而使其为酸性，但此时却存在招致酸中毒等的副作用危险。专利文献1 国际公开第2006/025598号
发明内容
因此，本发明的目的在于，提供脑缺血障碍治疗剂，其对于副作用危险少地使血中 的L-组氨酸浓度迅速上升是有用的。本发明人着眼于L-组氨酸，摸索出了副作用危险少 地使血中的L-组氨酸浓度迅速上升的方法。结果发现，作为L-组氨酸衍生物的特定的组 氨酸二肽在水中的溶解度高，具有良好的稳定性，且无副作用，从而完成本发明。即，为达成 上述目的，在本发明的一个方式中，提供脑缺血障碍治疗剂，其含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种作为有效成分。
图1是表示给药了不同的L-组氨酸衍生物的3个给药组中的血中L-组氨酸浓度 的时间变化的图。图2是表示给药甘氨酰-L-组氨酸对于脑缺血再灌流时的脑缺血障碍的影响的 图。
具体实施例方式以下，说明本发明的一个实施方式。本实施方式的脑缺血障碍治疗剂含有选自作为组氨酸衍生物的L-丙氨酰-L-组 氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种作为有效成分。L-丙氨酰-L-组氨酸是L-丙氨酸 和L-组氨酸肽键结合的二肽(H-Ala-His-OH,分子量226. 24，CAS No. 3253-17-6)。甘 氨酰-L-组氨酸是甘氨酸和L-组氨酸肽键结合的二肽(H-Gly-His-OH，分子量212. 21， CASNo. 2489-13-6)。L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸两者对水的溶解度都比L-组 氨酸的要高，为3. 5mol/L以上。L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸可以通过公知的方法得到，例如，可以通 过化学或生物学方法合成，或者还可以使用市售品。利用生物学方法的合成使用例如公知 的酶或微生物来进行。更具体地，这些二肽可以利用二肽酶通过水解已知序列的多肽而制造。脑缺血障碍治疗剂优选具有经静脉给药用注射剂的剂型。在经静脉给药具有注 射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂时，脑缺血障碍治疗剂中的有效成分的血中浓度迅速地上 升，结果迅速且充分地发挥脑缺血障碍治疗剂的效能。具有经静脉给药用注射剂的剂型的 脑缺血障碍治疗剂含有溶剂、溶解于溶剂的选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸 的至少一种。溶剂优选为水或者含有水的溶剂。即，具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺 血障碍治疗剂优选为水性的。溶剂的水优选为灭菌水，更优选不含有热源的注射用水。作 为含有水的溶剂，例如，可以使用生理盐水或葡萄糖溶液、乳酸配合林格液等在医药制剂中 可以使用的公知的溶剂。具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂通过例如将 选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种溶解于溶剂，并根据需要进行过 滤、容器填充和灭菌处理而制造。通过将具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂用例如冻干和减压 干燥等公知的方法进行干燥，可以制为粉末状或颗粒状的剂型。得到的具有粉末状或颗粒 状的剂型的脑缺血障碍治疗剂可以溶解于溶剂制为注射剂的剂型后使用。即，脑缺血障碍 治疗剂可以以在使用时溶解于溶剂的粉末状或颗粒状的剂型提供。具有粉末状或颗粒状的 剂型的脑缺血障碍治疗剂还可以与例如注射用水、生理盐水、葡萄糖溶液等溶剂组合，作为 试剂盒制品而提供。具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂优选pH5 8. 5，更优选 pH6 8. 0。具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂收容于例如输液容器或载药注射器(prefilled syringe)中。作为输液容器的例子，例如可以列举合成树脂制的柔 软的输液袋或玻璃瓶。具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂，虽根据使用目的而异，但 优选以0. 3 3. 5mol/L，更优选以0. 6 2. lmol/L，进一步优选以1 1. 7mol/L，特别优选 以1 1. 5mol/L的浓度含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种。脑缺血障碍治疗剂除了选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一 种以外，还可以进一步含有缓冲剂或抗氧化剂、去痛剂(soothing agent)、pH调节剂等公知 的添加剂。作为缓冲剂的例子，例如可以列举磷酸缓冲剂或柠檬酸缓冲剂、酒石酸缓冲剂、 醋酸缓冲剂。作为抗氧化剂的例子，例如可以列举亚硫酸钠或亚硫酸氢钠、抗坏血酸钠、硫 代硫酸钠。作为去痛剂的例子，例如除了甘油和丙二醇等多元醇以外，还可以列举利多卡因 盐酸盐或苄醇。用作PH调节剂的酸可以是有机酸或无机酸的任一种，例如可以是抗坏血 酸、盐酸、葡萄糖酸、醋酸、乳酸、硼酸、磷酸、硫酸、酒石酸或柠檬酸。用作PH调节剂的碱例 如可以是氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化镁。在制造具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂时，首先，将选自 L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种与根据需要的添加剂一起溶解于溶 剂。选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种可以与添加剂同时在溶剂中 混合，或者也可以在将添加剂混合于溶剂之前或混合之后混合于溶剂中。接着，将这样得到 的溶剂供于例如利用膜过滤器的过滤灭菌、或利用高压釜的加压热灭菌、利用间歇灭菌法 的热灭菌等的灭菌处理。由于不存在热变性的危险，因此优选的灭菌处理为过滤灭菌。优 选灭菌处理后的溶液的pH为5 8. 5的范围。脑缺血障碍治疗剂的给药方法没有特别限定，但根据例如剂型、患者的年龄、性别 和疾病的程度而进行适当地选择。脑缺血障碍治疗剂可以是在输液中混合选自L-丙氨 酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种而制为静脉给药用。所使用的输液没有特别 限定，可以使用例如葡萄糖注射液或者木糖醇注射液、D-甘露醇注射液、果糖注射液、生理 盐水、葡聚糖40注射液(血流改善剂)、葡聚糖70注射液(血浆增量剂)、氨基酸注射液、 林格液、乳酸林格液。脑缺血障碍治疗剂的给药量根据例如给药方法、剂型、患者的年龄、性别和疾病的 程度而进行适当地选择，但优选以L-组氨酸换算计为0. 1 3g/kg/日左右。具有经静脉 给药用的注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂可以以单次或1日数次的经静脉给药、以及持 续点滴静注的任一种的方法给药。脑缺血障碍治疗剂优选用于脑缺血障碍的治疗。更具体地，优选脑缺血障碍治疗 剂在伴随脑缺血的脑组织损伤时，即在脑细胞不断陷入坏死(necrosis)或与其接近的状 态时给药。或者优选脑缺血障碍治疗剂在由脑缺血状态脱离时给药，以防止脱离脑缺血状 态所引起的再灌流时产生的自由基或炎症性反应破坏周边的脑组织。或者，也可以在脑缺 血障碍的回复期给药脑缺血障碍治疗剂，以防止脑细胞坏死的进一步发展。根据本实施方式，可以得到以下的效果。(1)本实施方式的脑缺血障碍治疗剂含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨 酰-L-组氨酸的至少一种的L-组氨酸衍生物作为有效成分。这些L-组氨酸衍生物与L-组 氨酸相比，对于水等的溶剂的溶解度高，因此容易以高浓度给药至生物体内。
(2)脑缺血障碍治疗剂具有副作用危险少地有效改善脑缺血障碍的作用。(3)具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂对于通过经静脉给药来 迅速提高血中的L-组氨酸浓度有效。另外，具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍 治疗剂对于持续地给药L-组氨酸也有效。(4)在具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂以0. 3 3. 5mol/L, 进而以0. 6 2. lmol/L，更进而以1 1. 5mol/L的浓度含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和 甘氨酰-L-组氨酸的至少一种时，除了可以进一步减少副作用危险，还可以通过较少量的 脑缺血障碍治疗剂的给药即使血中的L-组氨酸浓度迅速上升到有效水平。(5)由于L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的溶解度比较高，因此可以减 少在具有经静脉给药用注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂中使用的溶剂的量。这对于防止 因脑缺血障碍治疗剂的给药，由脑缺血障碍治疗剂中的溶剂引起生物体内的水电解质平衡 崩溃或血压一过性上升是有利的。应予说明，上述实施方式还可以进行如下变化。·代替具有经静脉给药用注射剂的剂型，脑缺血障碍治疗剂例如可以具有动脉内 注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、肌肉内注射剂、脊髓腔内注射剂、腹腔内注射剂或口服给 药剂的剂型。此时，也期待脑缺血障碍治疗剂对于提高血中的L-组氨酸浓度是有用的。·脑缺血障碍治疗剂不限于对人给药，对于家畜(例如马或牛、猪)或家禽(例如 鸡)等饲养动物也可以给药，对于狗、猫、大鼠、小鼠等宠物也可以给药。其次，列举本发明的脑缺血障碍治疗剂的制造例、以及使用在该制造例得到的脑 缺血障碍治疗剂的试验例，更具体地说明本发明。制造例1将L-丙氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)29. 2g溶解于注射用水，配制总量IOOmL 的溶液，将其无菌过滤后，分别填充于IOmL玻璃小瓶并密封，而制造具有注射液的剂型的 脑缺血障碍治疗剂。该脑缺血障碍治疗剂中的L-丙氨酰-L-组氨酸的浓度为1. 29mol/ L (以L-组氨酸浓度计为20% (W/V))。制造例2除了代替L-丙氨酰-L-组氨酸29. 2g，使用甘氨酰-L-组氨酸(Bachem公司 制)27. 4g以外，与制造例1相同地制造具有注射液的剂型的脑缺血障碍治疗剂。该脑缺血 障碍治疗剂中的甘氨酰-L-组氨酸浓度为1. 29mol/L(以L-组氨酸浓度计为20% (W/V))。制造例3除了代替L-丙氨酰-L-组氨酸29. 2g，使用L-丙氨酰-L-组氨酸(Bachem公司 制)14. 6g和甘氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)13. 7g以外，与制造例1相同地制造具有 注射液的剂型的脑缺血障碍治疗剂。该脑缺血障碍治疗剂中的L-丙氨酰-L-组氨酸和甘 氨酰-L-组氨酸的合计浓度为1. 29mol/L(以L-组氨酸浓度计为20% (W/V))。制造例4将甘氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)16. 41g溶解于注射用水，配制总量120mL的 溶液，将其无菌过滤后，分别填充于IOmL玻璃小瓶并密封，而制造具有注射液的剂型的脑 缺血障碍治疗剂。该脑缺血障碍治疗剂中的甘氨酰-L-组氨酸浓度为0. 64mol/L(以L-组 氨酸浓度计为10% (W/V))。
制造例5将L-丙氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)3. 39g溶解于注射用水，配制总量IOmL 的溶液，将其无菌过滤后，分别填充于ImL玻璃制注射筒并密封，制造具有注射液的剂型的 脑缺血障碍治疗剂。该脑缺血障碍治疗剂中的L-丙氨酰-L-组氨酸浓度为1. 5mol/L(以 L-组氨酸浓度计为23. 3% (W/V))。制造例6将甘氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)3. 61g溶解于注射用水，配制总量IOmL的溶 液，将其无菌过滤后，分别填充于ImL玻璃制注射筒并密封，而制造具有注射液的剂型的脑 缺血障碍治疗剂。该脑缺血障碍治疗剂中的甘氨酰-L-组氨酸浓度为1. 7mol/L(以L-组 氨酸浓度计为26.4% (W/V))。制造例7将L-丙氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)4. 75g溶解于注射用水，配制总量IOmL 的溶液，将其无菌过滤后，分别填充于ImL玻璃制注射筒并密封，而制造具有注射液的剂型 的脑缺血障碍治疗剂。该脑缺血障碍治疗剂中的L-丙氨酰-L-组氨酸浓度为2. lmol/L(以 L-组氨酸浓度计为32. 6% (W/V))。制造例8在塑料制的2室袋的一个室中封入甘氨酰-L-组氨酸(Bachem公司制)3. 18g，在 另外一室中封入注射用蒸馏水50mL，制造具有用时溶解型的注射剂的剂型的脑缺血障碍 治疗剂。通过使两室连通、混合两室的内容物而得到的溶液中的甘氨酰-L-组氨酸浓度为 0. 3mol/L(以L-组氨酸浓度计为4. 7% (W/V))。试验例1 脑缺血再灌流时的脑缺血障碍的抑制效果的确认<中脑动脉闭塞再通模型的制作>使用约9周龄的Wistar系雄性大鼠，在氟烷麻醉下，依据小泉等的方法(脳卒中， 第8卷，第1-8页，1986年)，制作中脑动脉闭塞再通模型。即，在气体麻醉下(初期麻醉: 在含有3%氟烷的室内空气下实施，持续麻醉在含有氟烷的室内空气下实施)固定自 然呼吸状的大鼠，将颈部正中切开。接着，将左总颈和外颈动脉从周围结缔组织剥离，系上 线进行结扎。接着，将内颈动脉从周围结缔组织剥离，系上线进行结扎。进一步地，用剪刀 在左外颈动脉和内颈动脉的分岔点附近开孔，将尼龙塞子的硅涂布部插入内颈动脉15 16mm。由此，插入的尼龙塞子的前端越过中脑动脉部分到达前脑动脉内，中脑动脉的入口被 塞子的硅涂布部闭塞。之后，在血管外少量残留尼龙线端并结扎，缝合颈部。在术后约15分钟和中脑动脉再通前进行神经症状的确认，选出发现神经症状的 动物，进一步选择术后90分钟后的直肠温度显示为高值的动物，作为试验动物。<药剂的给药>闭塞中脑动脉90分钟后进行中脑动脉的再通，在刚再通后和再通6小时后，对试 验动物给药上述实施例1中得到的具有注射液的剂型的脑缺血障碍治疗剂(实验组)。再 通通过拔掉闭塞中脑动脉的尼龙塞子来进行。脑缺血障碍治疗剂的给药通过使用在静注留 置针安装了 50mL容量的聚丙烯制一次性注射筒的注射泵，以60mL/kg/hr的速度尾静脉内 给药10分钟来进行。使试验动物自由摄食(个体数η = 10)。另外，代替制造例1的脑缺 血障碍治疗剂，以3mg/kg的用量在刚再通后和再通30分钟后推注给药依达拉奉(商品名，夕力^卜，田边三菱制药公司制)而准备比较组。<脑梗塞巢的体积测定>在给药的第二天，用乙醚麻醉试验动物，摘出脑，将左脑分割为约2mm厚度的6片 的切片。将氯化2，3，5_三苯基四氮唑(TTC)溶解于磷酸缓冲生理盐水而配制2% TTC溶液， 在用该溶液装满的12孔板的各孔中，将测定面朝下分别放入一片脑切片，于暗处在室温下 进行染色。用数码相机拍摄染色后的各脑切片的测定面，将拍摄的图像载入图像解析软件， 测定各脑切片的测定面中的梗塞巢(脑组织坏死被确认的部位)的面积，将其乘以脑切片 的厚度，由此求出各脑切片中梗塞巢的体积。作为梗塞率，计算梗塞巢的合计体积相对于左 脑总体积的比例(百分比)，求出各组的平均的结果如表1所示。[表 1]
权利要求
脑缺血障碍治疗剂，其特征在于，含有选自L 丙氨酰 L 组氨酸和甘氨酰 L 组氨酸的至少一种作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的脑缺血障碍治疗剂，其具有经静脉给药用注射剂的剂型。
3.根据权利要求2所述的脑缺血障碍治疗剂，其是水性的，且以0.3 3. 5mol/L的浓 度含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种。
4.根据权利要求3所述的脑缺血障碍治疗剂，其以0.6 2. lmol/L的浓度含有选自 L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种。
全文摘要
脑缺血障碍治疗剂，其含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种作为有效成分。优选该脑缺血障碍治疗剂具有经静脉给药用的注射剂的剂型。具有水性注射剂的剂型的脑缺血障碍治疗剂优选以0.3～3.5mol/L，更优选以0.6～2.1mol/L的浓度含有选自L-丙氨酰-L-组氨酸和甘氨酰-L-组氨酸的至少一种。
文档编号A61K47/48GK101951935SQ20088012743
公开日2011年1月19日 申请日期2008年12月25日 优先权日2007年12月26日
发明者二井卓哉, 土居和久, 河野裕一 申请人:株式会社大塚制药工场