专利名称：龙晶粉及其制备工艺和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中医药领域，涉及一种龙晶粉及其制备工艺和应用。
背景技术：
人体的五脏六肺由各种功能细胞所构成，其存活和维持正常生理状态都需要血液 供其营养和氧气，要做到这一点的先决条件是保持全身血脉畅通，使带着各种养料和新鲜 氧气的血能在全身顺畅运行。保持全身血液畅通，必须保持正常平衡的血粘度。人的血管中流通的血液粘度是 以血小板为主的凝血因子和血管内皮细胞分泌的ATP抗凝因子平衡的结果，一般三十岁左 右健康人其正常血粘度为2. 5左右，但随着年龄增长血管内皮细胞破损不易恢复，血液中 ATP越来越少，血液中多余的脂肪、胶元物质和纤维蛋白逐渐凝成粥样物附着在血管壁上减 少血管弹性，影响舒张、压缩，形成高血压。当粥样物布满血管壁时游离的血栓形成，微血栓 的进一步发展可进一步堵塞各脏器赖以生存的微血管(微循环系统)代谢通道，导致冠心 病、脑血管相关病变等。地龙作为药用在我国已有4000多年的悠久历史。我国有关地龙的最早记载见于 《诗经》、《礼记，月令》，有孟夏之月“蚯蚓出”、仲夏之月“蚯蚓结”之观察记录。最早的药学 专著《神农本草经》中，收载67种动物药物，其中就有蚯蚓。《本草经集注》、《别录》、《本草 拾遗》等书，对蚯蚓皆有不少描述。李时珍所著《本草纲目》一书中，在蚯蚓条下列出40条 处方。其中记载地龙可治疗小儿热病、癫痫、耳聋、中风、痢疾、喉瘅等。在治疗中风的方药 “补阳还五汤”中，地龙是主要药物之一。说明我国古代对地龙的临床应用已积累了丰富的 经验。近50年来，国内对蚯蚓的应用较为广泛，从传统的散膏药及煎剂，到精制成针剂， 临床验证已对20余种疾病具有不同疗效。目前，已知蚯蚓具有降压、溶栓、抗凝、镇静和抗 惊厥作用。国外也有类似的研究报道，。日本的类原恒教授发现蚯蚓体内含有一种酶与尿 激酶一样能溶解纤维蛋白形成的血栓，国内许多学者用蚯蚓制品防治心血管疾病，并取得 一定的疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有溶栓作用的龙晶粉及其制备方法和在制备改善微 循环及溶栓药物中的应用。本发明中所提到的龙晶粉是特指从爱森赤子鲜活蚯蚓中按照本发明所述制备方 法提取、分离、浓缩、干燥而制得的天然活性蛋白混合物。本发明的技术方案是一种龙晶粉，其特征在于该龙晶粉是通过以下步骤制得的取爱森赤子活蚯蚓漂洗干净后在-20°C 士3°C温度下冻成冰块，使蚯蚓活细胞冻 松；
将上述蚯蚓冰块取出放置在0-50°C的生理盐水中溶解，然后自溶搅拌成浆；将蚯蚓浆液至少进行一次离心处理；离心后的上清液过3-4次400目筛；过滤后得到的蚯蚓上清液用灭菌膜进行预过滤灭菌；灭菌后的上清液先用孔径为2000道尔顿的膜进行超滤，收集滤出液；再用孔径为 1000道尔顿的膜对前次超滤的滤出液进行二次超滤浓缩，两次超滤的压力维持在1. 8个大 气压士 0. 1个大气压；浓缩后的蚯蚓浓缩液干燥成粉。干燥工序中，将蚯蚓浓缩液冷冻干燥成粉。本发明的制备方法中，其离心工序最好分两次完成，第一次先将蚯蚓勻浆液 在IOOOrpm 3000rpm的速度下进行预离心，去掉蚯蚓体内大部分粪便和残渣，然后在 2000rpm SOOOrpm的速度下进行再离心，以充分去除蚯蚓勻浆后未溶解完的杂质。龙晶粉的制备工艺，其特征在于该工艺由以下步骤组成取爱森赤子活蚯蚓漂洗干净后在-20°C 士3°C温度温度下冻成冰块，使蚯蚓活细 胞冻松；将上述蚯蚓冰块取出放置在0-50°C的生理盐水中溶解，然后自溶搅拌成浆；将蚯蚓浆液至少进行一次离心处理；离心后的上清液过3-4次400目筛；过滤后得到的蚯蚓上清液用灭菌膜进行预过滤灭菌；灭菌后的上清液先用孔径为2000道尔顿的膜进行超滤，收集滤出液；再用孔径为 1000道尔顿的膜对前次超滤的滤出液进行二次超滤浓缩，两次超滤的压力维持在1. 8个大 气压士 0. 1个大气压；浓缩后的蚯蚓浓缩液干燥成粉。干燥工序中，将蚯蚓浓缩液冷冻干燥成粉。本发明的制备方法中，其离心工序最好分两次完成，第一次先将蚯蚓勻浆液在小 于IOOOrpm 3000rpm的速度下进行预离心，去掉蚯蚓体内大部分粪便和残渣，然后在 2000rpm SOOOrpm的速度下进行再离心，以充分去除蚯蚓勻浆后未溶解完的杂质。龙晶粉可单独灌入胶囊制成单方，也可与其他中药如黄芪、川芎等配成复方制成 胶囊剂。本发明的有益效果1、本发明采用冻融、勻浆、离心、灭菌、超滤浓缩和干燥等工序制得的龙晶粉，其活 性物质成分保存下来，彻底去除了蚯蚓体内的粪便，并使铅、砷等有害元素大幅降低，使其 安全性得到可靠保证。本发明由于采用离心后直接预过滤灭菌和超滤浓缩，故既可有效控 制微生物指标，又可充分表现出蚯蚓的价值，且本发明产品配以生物多糖(如甲壳素等)可 制成健康食品，用于改善人体血管微循环，促使血液畅通，延缓衰老，还可配以其他辅料或 中药制成药品，用于治疗脑血栓、中风等老年疾病，社会效益和经济效益十分显著。2、龙晶粉能不依赖于血浆抗凝血酶III(AT-III)直接溶解血栓，具有抗凝和激活 纤溶的双重作用，从而抑制血栓形成，促进血栓溶解。3、龙晶粉与普通中药材店出售的地龙干对全血凝块和纤维蛋白凝块的体外溶解 作用比较，龙晶粉体外溶解全血凝块和纤维蛋白凝块的能力明显优于后者。4、龙晶粉对血管内皮细胞破损有修复作用，从而有利於血粘度的正常平衡，血管内粥样物和血栓产生的机率降低。长服龙晶粉有利于恢复血粘度平衡，有利于治疗各种因 血脉不通而引发的老年病；有利于延缓衰老延年益寿。
具体实施例方式下面结合附图
和实施例对本发明作进一步的说明。实施例1.龙晶粉的制备(以生产10公斤龙晶粉为例)取约500公斤的鲜活蚯蚓漂洗干净后放在_20°C的冷库中冻成若干冰块，这样可 将蚯蚓活细胞冻松破裂。将上述蚯蚓冰块取出后放在37°C的生理盐水中溶解，约1小时可 溶解完。(溶解温度越低所需时间越长)，由于蚯蚓活细胞已冻松破裂，溶解后细胞内的活 性物质很容易释放出来，得到蚯蚓勻浆液。生理盐水的作用是用来保护蚯蚓活性物质不受 破坏。将蚯蚓勻浆液用离心机以IlOOrpm的速度进行预离心，是蚯蚓体内的粪便被沉淀排 除掉，得到的上清液再用离心机以5000rpm的速度再进行离心处理，使得蚯蚓勻浆液中未 溶解的杂质被充分沉淀，离心后的上清液过4次400目筛。将上述两次离心处理后的上清 液经0. 22 μ m灭菌膜预过滤灭菌处理，得到灭菌上清液。透过液再用孔径为2000D的超过 滤膜进行超过滤，滤出液经孔径为1000D的超滤膜进行二次超滤浓缩，两次超滤的压力维 持在1. 8士0. 1个大气压，使所需要的物质截留下来，而将水分和蚯蚓体内的有害元素(如 铅、砷等元素)。预过滤灭菌和两次超滤浓缩是在密闭管道内完成的，这样就可控制最终产 品的微生物指标，同时去除了对人体有害元素。超滤浓缩后的浓缩液，最后用真空冻干机冻 干成粉。即得约10公斤的龙晶粉。用它配以不同辅料，即可制得不同的蚯蚓类制品。实施例2.龙晶粉对大鼠体外血栓形成的影响参照Chandler法改良[1]，自行设计装置cast-Ι模拟血栓仪。硅化的聚乙烯管直 径5mm，长245mm，圆环形。旋转半径为47mm，与水平面夹角为75°，钟摆式摆动，血液在环 内流动速度为61.57mm/S。实验时仪器和管子温度为38士0. 1°C。旋转观察时间8分钟。 Wistar大鼠42只，用一次性塑料注射器及涂硅针头取血1ml。龙晶粉溶于用蒸馏水配制成 22. 4mg/ml的水溶液，灌胃剂量为0. 2ml/100gB. W，灌胃1小时后取血。DIC大鼠实验前经阴 茎背静脉注射大鼠脑粉浸出液，剂量0. 5ml/100g B. W.。注射脑粉浸出液后立即灌服龙晶粉 溶液，1小时后取血。体外加龙晶粉(或生理盐水)组正常大鼠取血Iml后体外加0. 2ml 龙晶粉(22.4mg/ml)或生理盐水，然后在体外血栓形成仪上转8分钟，测量血栓长度，称血 栓湿重。另取结果如表1和表2。表1龙晶粉对正常大鼠体外血栓形成的影响 *P < 0. 05表2 口服龙晶粉对DIC大鼠体外血栓形成的影响 *P < 0. 05实施例3.龙晶粉对全血凝块和纤维蛋白凝块的体外溶解作用取正常大鼠的全血lml，15分钟后在此凝固的全血中加入0.5ml龙晶粉溶液 (22. 4mg/ml)。4°C放置24小时后称重。领取0. 5ml血浆加0. 5mlCaCl2，形成白色纤维蛋白 凝块后，再加0. 5ml龙晶粉溶液，放置24小时后称重。对照组一律以同容量生理盐水代替， 结果如表3。表3龙晶粉对全血凝块和纤维蛋白凝块的影响(体外24h后) *P < 0. 01上述实验结果说明，龙晶粉能不依赖于AT-III直接溶解血栓。实施例4.龙晶粉对家兔凝血、纤溶的作用正常家兔22只，DIC家兔12只。DIC模型是用静脉注射兔脑粉方法复制，剂量 60mg/3ml/Kg[2]。正常家兔及DIC家兔均于灌胃龙晶粉溶液(或生理盐水，剂量22. 4mg/ ml/Kg) Ih后取血，每次6ml，用常规方法分别测定一下指标[3]白陶土部分凝血活酶时间 (KPTT)、凝血酶原时间(PT)、优球蛋白溶解时间(ELT)、纤维蛋白含量以及3P试验(定性)。 结果3P试验(全部介于- +之间)、纤维蛋白原含量及PT与生理盐水组比差异均不显 著，但龙晶粉组KPTT明显延长，ELT明显缩短，差异显著(P <0.05).具体结果见表4。表4 口服龙晶粉溶液对正常及DIC家兔凝血与纤溶的作用 氺P < 0. 05 氺*P < 0. 01实施例5.龙晶粉对正常及DIC大鼠血浆t-PA活性的影响Wiatar大鼠38只(正常组20只，DIC组18只)，雄性。DIC模型的复制用静脉注 射鼠脑粉的方法，剂量10mg/0.5ml/100g B.W. [2]。正常大鼠分为灌胃龙晶粉组及生理盐水 组，剂量同上，服药Ih后取血1ml。用发色底物检测法检测t-PA的活性[3]。结果为龙晶粉 t-PA活性较对照组有非常明显的升高(见表5，P < 0. 05). DIC大鼠分为预防组、治疗组和 盐水对照组。结果预防组、治疗组的t-PA活性显著增高(见表6，P <0.05).表5龙晶粉对正常大鼠血浆t-PA活性的影响 *P < 0. 05 表6龙晶粉对DIC大鼠血浆t-PA活性的影响
*Ρ < 0. 05 (与对照组比)实施例6.龙晶粉与普通中药材店出售的地龙干对全血凝块和纤维蛋白凝块的体 外溶解作用比较取正常大鼠的全血lml，15分钟后在此凝固的全血中加入0.5ml龙晶粉溶液 (22. 4mg/ml)。4°C放置24小时后称重。领取0. 5ml血浆加0. 5mlCaCl2，形成白色纤维蛋白 凝块后，再加0. 5ml龙晶粉溶液，放置24小时后称重。地龙干组将从普通中药店购买的地 龙干打磨成粉过80目筛，用蒸馏水溶解，制成22.4mg/ml的水溶液，其余操作同龙晶粉组， 结果如表7。
表7龙晶粉与地龙干对全血凝块和纤维蛋白凝块的体外溶解作用比较(体外24h
后) *P < 0. 01实施例7.龙晶粉的制备(以生产10公斤龙晶粉为例)取约500公斤的鲜活蚯蚓漂洗干净后放在-20°C的冷库中冻成若干冰块，这样可 将蚯蚓活细胞冻松破裂。将上述蚯蚓冰块取出后放在37°C的生理盐水中溶解，约1小时可 溶解完。(溶解温度越低所需时间越长)，由于蚯蚓活细胞已冻松破裂，溶解后细胞内的活 性物质很容易释放出来，得到蚯蚓勻浆液。生理盐水的作用是用来保护蚯蚓活性物质不受 破坏。将蚯蚓勻浆液用离心机以ISOOrpm的速度进行预离心，是蚯蚓体内的粪便被沉淀排 除掉，得到的上清液再用离心机以4500rpm的速度再进行离心处理，使得蚯蚓勻浆液中未 溶解的杂质被充分沉淀去除，离心后的上清液过3次400目筛。将上述两次离心处理后的 上清液经0. 22 μ m灭菌膜预过滤灭菌处理，得到灭菌上清液。透过液再用孔径为2000D的 超过滤膜进行超过滤，滤出液经孔径为1000D的超滤膜进行二次超滤浓缩，两次超滤的压 力均约为1.8个大气压，使所需要的物质截留下来，而将水分和蚯蚓体内的有害元素(如 铅、砷等元素)。预过滤灭菌和两次超滤浓缩是在密闭管道内完成的，这样就可控制最终产 品的微生物指标，同时去除了对人体有害元素。超滤浓缩后的浓缩液，最后用真空冻干机冻 干成粉。即得约10公斤的龙晶粉。用它配以不同辅料，即可制得不同的蚯蚓类制品。参考文献
[2]朱益栋主编.弥散性血管内凝血.人民卫生出版社，1982，279 293[3]王振义主编.血栓与止血.上海科技出版社，1988，368 393本发明未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现。
权利要求
一种龙晶粉，其特征在于该龙晶粉是通过以下步骤制得的1)取爱森赤子活蚯蚓漂洗干净后在 20℃±3℃温度下冻成冰块，使蚯蚓活细胞冻松；2)将上述蚯蚓冰块取出放置在0 50℃的生理盐水中溶解，然后自溶搅拌成浆；3)将蚯蚓浆液至少进行一次离心处理；4)离心后的上清液过3 4次400目筛；5)过滤后得到的蚯蚓上清液用灭菌膜进行预过滤灭菌；6)灭菌后的上清液先用孔径为2000D的膜进行超滤，收集滤出液；再用孔径为1000D的膜对前次超滤的滤出液进行二次超滤浓缩；7)浓缩后的蚯蚓匀浆浓缩液干燥成粉。
2.按权利要求1所述的龙晶粉，其特征在于其中的离心工序分两次完成，第一次先将 蚯蚓勻浆液在IOOOrpm 3000rpm的速度下进行预离心，然后再在2000rpm 8000rpm的速度下进行再离心。
3.按权利要求1所述的龙晶粉，其特征在于干燥工序中，将蚯蚓浓缩液冷冻干燥成粉。
4.权利要求1所述的龙晶粉的制备工艺，其特征在于该工艺由以下步骤组成1)取爱森赤子活蚯蚓漂洗干净后在_20°C士3°C温度下冻成冰块，使蚯蚓活细胞冻松；2)将上述蚯蚓冰块取出放置在0-50°C的生理盐水中溶解，然后自溶搅拌成浆；3)将蚯蚓浆液至少进行一次离心处理；4)离心后的上清液过3-4次400目筛；5)过滤后得到的蚯蚓上清液用灭菌膜进行预过滤灭菌；6)灭菌后的上清液先用孔径为2000D的膜进行超滤，收集滤出液；再用孔径为1000D 的膜对前次超滤的滤出液进行二次超滤浓缩；7)浓缩后的蚯蚓勻浆浓缩液干燥成粉。
5.按权利要求4所述的制备工艺，其特征在于其中的离心工序分两次完成，第一次先 将蚯蚓勻浆液在IOOOrpm 3000rpm的速度下进行预离心，然后再在2000rpm 8000rpm 的速度下进行再离心。
6.按权利要求4所述的制备工艺，其特征在于干燥工序中，将蚯蚓浓缩液冷冻干燥成粉。
7.权利要求1所述的龙晶粉在制备改善微循环或溶栓药物中的应用。
全文摘要
本发明属于中医药领域，涉及一种龙晶粉及其制备工艺和应用。龙晶粉是特指从爱森赤子鲜活蚯蚓中按照本发明所述制备方法提取、分离、浓缩、干燥而制得的天然活性蛋白混合物。其制作工艺是将鲜活的爱森赤子蚯蚓洗净后冻成冰块，然后放在盐的水溶液中溶解，并自溶搅拌成浆，得到的匀浆液至少进行一次离心处理，离心后的上清液先经3-4次400目筛过滤，再进行预过滤灭菌和连续两次超浓缩，最后干燥成粉制得。龙晶粉具有抗凝和激活纤溶的双重作用，从而抑制血栓形成，促进血栓溶解，可用于制备改善微循环和溶栓药物。
文档编号A61K35/64GK101890052SQ20091002779
公开日2010年11月24日 申请日期2009年5月21日 优先权日2009年5月21日
发明者龚之森 申请人:龚之森