专利名称：：一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物及其口服液的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药组合物及其制备方法，具体设计一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物及其口服液的制备方法。
背景技术：
：鸽毛滴虫病是鸽最常见的一种传染性原虫病，它主要寄生在鸽的消化道上，任何地方、品种、龄期的鸽子均会发病，是养鸽业威胁最大的常见病之一。该病于1878年由Rirolta首次在鹆的小肠中发现。根据国外资料和国内调査显示，约有80%的鸽带虫，成年鹆的症状不明显，青年鸽和幼鸽症状表现突出。青年鸽在育成过程中其死亡的鸽中70%以上是由此病引起。幼鸽通常因首次尝食成年鸽嗉囊中"鸽乳"而被感染，并保持终生带虫。在形成足够保护力的免疫之前，受强毒虫株感染时，死亡率可高达50%。带虫乳鸽即使发病轻微也影响营养吸收，品质下降。此病虽然可用甲硝唑等药物进行治疗，但易出现药物残留，导致出品受阻、效益下降。鸽毛滴虫病的病原是属鞭毛亚门，动鞭毛纲，多鞭毛目，毛滴虫科。毛滴虫属的禽毛滴虫(Trichmonasgallinae)。禽毛滴虫虫体呈瓜子形或梨形，大小为59pmx29^m。虫体前端有毛基体伸出4根鞭毛，使虫体可迅速移动。虫体中央有一根细长的轴柱自前向后伸延至虫体后缘之外。在虫体的一侧有波动膜，其起始于虫体的前端，终止于虫体稍后方虫体前部有l椭圆形的核。虫体前部与波动膜相对，一侧有胞口。在姬姆萨染色标本中，虫体原生质呈淡蓝色，细胞核和毛基体呈红色。鞭毛呈暗红色或黑色，轴柱颜色浅于原生质。禽毛滴虫寄生于肉鸽口腔、鼻腔、咽、食道和嗉囊的粘膜表层，以二分裂的方式进行繁殖，以粘液、粘膜碎片、微生物、红细胞等为食物,经胞口摄人体内，或以内渗方式吸收营养。虫体在外界环境中抵抗力不强，2025°〇条件下，在采集的病料中可存活37d。虫体对高温和消毒药抵抗力很弱，在48"C冰箱中可存活1418d，在55'C时经2min死亡；常用消毒药，如35%火碱液、石灰乳、来苏儿等均能很快杀死虫体。鸽毛滴虫病的主要感染途径是经口感染。虫体最常寄生和损害的部位是消化道。毛滴虫首先感染上消化道，引起其溃疡，然后从溃疡处进入循环系统，引起肝脏等器官的病变。可以通过直接涂片镜检、人工培养检査等病原的诊断方法对该病进行确认。患鹆的口腔溃疡灶是毛滴虫的聚居点。唾液中也有大量的活虫体，患鸽和带虫鸽都是感染源。虫体通过饮水、词料、伤口及未闭合的脐环等途径都可感染鸽只。成鸽可通过互相接吻或通过"鸽乳"哺育幼鸽时，把虫体直接传递给同伴或自己的后代。其他疾病的感染和应激因素可成为本病的诱因。鸽毛滴虫病的潜伏期414d，常感染15周龄的幼鸽。病程一般320d不等。在生产中常见的类型主要有以下三种1、以咽型为主的表现吞咽与呼吸困难、精神不振、食欲减退，但饮欲增加，排黄绿色粪便，常因呼吸困难而急性死亡。剖检可见口腔粘膜上有黄色干酪样积聚物，鼻咽粘膜上形成一层平坦的针头大小的病灶。2、以内脏型为主的表现精神不振、羽毛松乱无光，排黄绿色或淡黄色粘液性、糊状粪便，进行性消瘦，最后衰竭死亡(据报道死亡率可达30%以上)。剖检可见内脏器官有干酪样坏死灶。3、以脐型为主的表现精神呆滞、食欲减少、消瘦、脐部发炎，不愿伏卧，严重者很快死亡。剖检可见脐部皮下有干酪样或溃疡性病变。鸽毛滴虫对硝唑类药物敏感，但极易造成药物在体内的残留，且有致癌性，属于在养殖业禁用的药品。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物。本发明还要解决的一个技术问题是提供上述中药组合物的口服液的制备方法。本发明还要解决的一个技术问题是提供上述中药组合物在制备抗鸽毛滴虫病药物中的应用。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物，包含如下重量份数的组份鱼腥草30-50份，炒黄荟30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荆芥15-30份，柴胡15-30份。上述抗鸽毛滴虫病的中药组合物，优选包含如下重量份数的组份鱼腥草40-45份，炒黄芩40-45份，茜草30-35份，紫草30-35份，荆芥20-25份，柴胡20-25份。上述抗鸽毛滴虫病的中药组合物，其剂型为口服液。一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物的口服液的制备方法，包括如下步骤(1)鱼腥草30-50份，炒黄芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荆芥15-30份，柴胡15-30份混合；(2)向步骤(1)得到的混合物料中，加入混合物重量的8~15倍的水，先武火加热至沸腾，再文火煮沸2060min，滤出药液；剩余药渣加入药渣重量的5~10倍量的水再煎2次；合并3次药液；(3)将步骤(2)得到的药液离心取上清，再文火煎煮浓縮至每毫升含生药2g，离心取上清；(4)上清液经100'C高压灭菌2040min，4'C保存。上述抗鸽毛滴虫病的中药组合物在制备抗鸽毛滴虫病的药物中的应用。有益效果本发明的中药方剂可替代西药用于鸽子毛滴虫感染可以减少或消除禽肉、蛋中药物的残留，从而有利于畜产品的无公害生产。具体实施例方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例1:按组方鱼腥草30份，炒黄芩30份，茜草25份，紫草25份，荆芥15份，柴胡15份将中药饮片配成方剂，加10倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸30min，滤出药液，药渣加8倍量水再煎2次，合并3次药液，离心，文火煎煮浓縮至每毫升含生药2g，离心取上清，分装。各药液均10(TC高压灭菌30min，4'C保存。实施例2:将鱼腥草40份，炒黄芩40份，茜草35份，紫草35份，荆芥25份，柴胡20份配成方剂，加8倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸20min，滤出药液，药渣加6倍量水再煎2次。合并3次药液，离心，文火煎煮浓缩至每毫升含生药2g，离心取上清，分装。各药液均10(TC高压灭菌30min，4'C保存。实施例3:将鱼腥草50份，炒黄芩50份，茜草40份，紫草40份，荆芥30份，柴胡30份配成方剂，加12倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸50min，滤出药液，药渣加10倍量水再煎2次。合并3次药液，离心，文火煎煮浓缩至每毫升含生药2g，离心取上清，分装。各药液均10(TC高压灭菌40min，4'C保存。实施例4:1、鹆毛滴虫培养基的制备与鸽毛滴虫的培养-取鹆肝脏15g，切碎呈小米粒大小，浸泡入100mL蒸馏水中，置4"C冰箱中过夜，隔天取出后，加热煮沸30min，经纱布过滤，补充蒸馏水至100mL。将蛋白胨2g，麦芽糖lg，氯化钠0.5g，L一半胱氨酸盐酸盐0.2g与其混合，加热促溶，经细滤纸过滤，调节pH至5.65.8，分装入试管，每管3.5mL，121。C高压灭菌30min，冷却后置37。C恒温箱中24h，证明无菌后一4"C保存备用。用一次性针管对白羽王鸽(鸽子取自南京市六5合区东沟镇养鸽场)进行翅静脉采血，将采得的鸽血置于37。C恒温箱中，放置23h后取出，用吸管吸取上层血清。将鸽血清置于5556X:水浴中加热30min灭活，分装后，冷冻保存备用。抗生素选用青霉素80万u/支，链霉素100万u/支各一支，用8ml肝浸汤溶解稀释，O'C以下保存备用。每管培养液5mL，其组成是3.5mL肝浸汤+含有抗生素的肝浸汤0.5mL+无菌灭活鹆血清lmL。供试虫株取自南京市某鸽场的1月龄确诊为毛滴虫感染的患鸽，品种为白羽王鸽，用消毒棉签在口腔咽喉部取分泌物做生理盐水涂片镜检，毛滴虫呈梨形，有3-4根鞭毛。确诊后，供分离、培养毛滴虫用。取患鸽口腔咽喉部分泌物，接种于培养基中，置于37'C恒温箱中培养，每3d传代一次，经过体外连续培养34代以后，然后从中取样转接于另外一瓶20ml的培养液中，待其大量繁殖之后，用于本实验。鸽毛滴虫培养、观察结果鸽毛滴虫在培养基内运动活跃，其形态结构均接近生理盐水涂片的自然状态，虫体呈梨形、椭圆形或圆形，大小为610umx29um，体前端有4根前鞭毛，其中一根鞭毛向体后端折回附于波动膜上，末端有似尾巴样的轴刺，在液体中作螺旋状运动。肝浸汤培养毛滴虫从第ld开始数量迅速增加，第3d达到生长高峰，在第4d后虫体数量逐渐下降，一般在第5d时多数虫体死亡。在体外进行盲传时，第34代虫体最为稳定，传至第6代时虫体死亡。在虫体繁殖的第三天开始计数，将培养管摇匀后，无菌条件下用吸管吸出20ul用血细胞计数板计数。本实验培养液中的活虫数约为2xl05个/ml。2、本发明的中药组合物抗毛滴虫效果测定(1)单味中药对鸽毛滴虫抑制试验17种中药均购买于南京市国盛连锁药店，分别是柴胡、蒙花、茜草、荆芥、蛇草、炒黄芩、一枝黄花、古精草、仙鹤草、徐长卿、刘寄奴、鹿衔草、升麻、蜀羊泉、叶下珠、鱼腥草、紫草。对17种中草药分别进行熬制，熬制的具体方法是用100mL水浸泡中药30min，然后进行水煎，水煎lh后过滤药渣取一次药液，再将剩余药渣加水进行熬制，lh后过滤取二次药液，将两次药液混合后，加热浓缩成10ml，置于4'C冰箱备用o取上述培养了3天的鸽毛滴虫培养液，轻轻摇匀，分别取lmL加入到18支培养管中，前17管分别加入受试药物，最后l管为对照管，加入药物后，各培养管置37"C恒6温箱中培养，于加药后2h、6h分别计算各管活虫数，并与不加药物培养管的活虫数做比较。结果在17味中药的6小时抗虫观察试验中，有13味具有抗虫功效，有4味没有抗虫效果，分别是蒙花、古精草、仙鹤草、仙鹤草和徐长卿；蛇草、升麻、蜀羊泉在6小时之内尚不能完全杀死毛滴虫；其余药物均可在6小时内完全杀死毛滴虫，结果详见表l。表117种常见的中药体外杀灭鹆毛滴虫的药敏实验结果药物中药浓度药物作用后2h药物作用后6h(g/ml)活虫数/xl()S个活虫数/x105个柴胡0.500蒙花0.511茜草0.500荆芥0.500蛇草0.510炒黄芩0.500一枝黄花0.500古精草0.511仙鹤草0.50.50.5徐长卿0.50.50.5刘寄奴0.500鹿衔草0.500升麻0.510蜀羊泉0.521叶下珠0.500鱼腥草0.500紫草0.500对照22根据表1的数据，可以看出柴胡、茜草、荆芥、炒黄芩、一枝黄花、紫草有明显的杀灭鸽毛滴虫的作用，在加药2h后，绝大多数虫体已经崩解死亡，尚有个别的虫体有很弱的活动能力，但鞭毛运动力己经丧失，在加药6h后，虫体全部死亡崩解。鱼腥草、蛇草等对鸽毛滴虫有一定的作用，并且作用效果随着时间的延长而变得显著，在加药2h后，虫体的运动能力减弱，鞭毛几乎丧失运动能力，部分虫体崩解死亡。在加药6h后，虫体全部崩解死亡。而对照组的虫体，在2h6h的时间段内，虫体活动正常，鞭毛有很强的运动能力，形态正常。综合上述的实验结果，对17种中药进行筛选，组成中药复方。(2)本发明的复方中药对鸽毛滴虫抑制试验将鱼腥草50份，炒黄芩50份，茜草40份，紫草40份，荆芥30份，柴胡30份配成方剂，加10倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸30min，滤出药液，药渣加8倍量水再煎2次。合并3次药液，离心，文火煎煮浓縮至每毫升含生药2g，离心取上清，分装。各药液均10(TC高压灭菌30min，4'C保存。将提取的中药口服液用灭菌生理盐水稀释至每毫升含生药0.5g/mL和1.0g/mL。各取lmL加入试管作为第l管及第2管，另加lmL灭菌生理盐水于第3管作为对照。将毛滴虫培养液轻轻摇匀，分别吸取lmL加入到3支培养管中，使第1管及第2管的药物浓度分别为0.25g/mL和0.5g/mL。各培养管置37'C恒温箱中培养，每半小时轻摇1次。于加药后2h、4h、6h分别取样观察活虫，计算各管活虫数，并与不加药物的培养管的活虫数进行比较。结果该中药口服液有明显的抗鸽毛滴虫的效果，并且随着药物浓度的增高和作用时间的增长，杀灭毛滴虫的效果显著增强。对于0.25g/mL的试验组，在加药2h后，虫体活动较活跃，鞭毛运动力较强，虫体生长良好，在加药4h后，虫体活动力减弱，部分变形膨胀，绝大多数虫体失去活动能力，在加药6h后，虫体全部崩解；对于0.5g/mL的试验组，在加药2h后，绝大多数虫体就已经崩解死亡，仅有个别虫体极弱活动，在加药4h后，虫体全部崩解。而对照组的虫体在2h6h的时间段内形态结构正常，行为活跃，鞭毛运动正常。中药复方制剂杀灭毛滴虫的效果见表2。表2中药方剂体外杀灭鸽毛滴虫的药敏实验结果2h4h6h药物活虫数/xl()S个活虫数~105个活虫数/xl()S个0.25g/mL20.500.5g/mL000对照222实施例5:不同药量组合对鸽毛滴虫抑制试验。将鱼腥草30份，炒黄芩30份，茜草25份，紫草25份，荆芥15份，柴胡15份将中药饮片配成方剂，加10倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸30min，滤出药液，药渣加8倍量水再煎2次。合并3次滤液，离心，文火煎煮浓縮至每毫升含生药lg，离心取上清，分装。各药液均100'C高压灭菌30min，4'C保存，得组方I。将鱼腥草40份，炒黄芩40份，茜草35份，紫草35份，荆芥25份，柴胡20份配成方剂，加10倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸30min，滤出药液，药渣加8倍量水再煎2次。合并3次滤液，离心，文火煎煮浓縮至每毫升含生药lg，离心取上清，分装。各药液均10(TC高压灭菌30min，4'C保存，得组方II。将鱼腥草50份，炒黄芩50份，茜草40份，紫草40份，荆芥30份，柴胡30份配成方剂，加10倍量水先武火加热至沸腾，再文火煮沸30min，滤出药液，药渣加8倍量水再煎2次。合并3次滤液，离心，文火煎煮浓縮至每毫升含生药lg，离心取上清，分装。各药液均10(TC高压灭菌30min，4。C保存，得组方III。将上述3个组方的中药浓缩液各取lmL，分装3个试管，另加lmL灭菌生理盐水于第4管作为对照。将培养的毛滴虫培养液轻轻摇匀，分别吸取lmL加入到4支培养管中，摇匀，各培养管置37t:恒温箱中培养，每半小时轻摇l次。于加药后2h、4h、6h分别取样观察活虫，计算各管活虫数，并与不加药物的培养管的活虫数进行比较。结果除加生理盐水管未见死亡外，第2至第3管二小时后毛滴虫均已死亡，表明上述不同组合的方剂均可有效地抑制鸽毛滴虫的生长。结果见表3。_表3不同药量中药方剂体外杀灭鸽毛滴虫的药敏实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例6:按照实施例2的配方与方法，制备出足够量的中药口服液待用。选择60只健康的1月龄白羽王鸽肉鸽，用分离的鸽毛滴虫口腔接种，使其感染(以口腔棉拭子取样镜检到毛滴虫为准)，然后将它们分成四组，每组15只。第1组、第2组及第3组每只每天分别用含生药量0.5g、lg及1.5g的中药口服液混悬于清洁水中供鸽饮用，连服10天。第4组为对照组，不给药。各组隔离饲养，在第5天及第10天分别观察鸽口腔有无黄白色渗出物，同时做口腔毛滴虫镜检。凡口腔见到黄白色渗出小点，且镜检出有毛滴虫的列为无效；口腔未见黄白色渗出小点，且镜检未见有毛滴虫的列为治愈；口腔未见黄白色渗出物但镜检出有毛滴虫的，或者治愈者列为有效；分别统计有效率、治愈率(表4)。表4不同剂量中药口服液对人工鸽毛滴虫感染治愈试验组别鸽数第5天第10天总有效率总治愈率无效有效治愈无效有效治愈%%第1组15784312118073.33第2组1531260151310086.67第3组1531270151410093.33对照组151500150000注无效口腔见到黄白色渗出小点，且镜检出有毛滴虫；治愈口腔未见黄白色渗出小点，且镜检未见有毛滴虫的列为治愈；有效口腔未见黄白色渗出物但镜检出有毛滴虫的，治愈者也列为有效。经观察、统计，每只鸽每天剂量为lg的治疗组经10天的治疗，病鸽毛滴虫感染治疗有效率100%，治愈13只，治愈率86.67%;每只鸽每天剂量为1.5g的治疗组疗效最好，病鸽毛滴虫感染治疗有效率100%，治愈14只，治愈率93.33%。每只每天剂量为0.5g的第1组治疗有效率80%，治愈11只，治愈率73.33%。未经治疗的对照组无自愈。结果表明，要达满意疗效，治疗剂量可按每天每只鸽lg生药含量混悬饮服，疗程需达10天以上。10权利要求1、一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物，其特征在于该组合物包含如下重量份数的组份鱼腥草30-50份，炒黄芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荆芥15-30份，柴胡15-30份。2、根据权利要求1所述的抗鸽毛滴虫病的中药组合物，其特征在于该组合物包含如下重量份数的组份鱼腥草40-45份，炒黄芩40-45份，茜草30-35份，紫草30-35份，荆芥20-25份，柴胡20-25份。3、根据权利要求1或2所述的抗鸽毛滴虫病的中药组合物，其特征在于该中药组合物的剂型为口服液。4、一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物的口服液的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)鱼腥草30-50份，炒黄芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荆芥15-30份，柴胡15-30份混合；(2)向步骤(1)得到的混合物料中，加入混合物重量的8~15倍的水，先武火加热至沸腾，再文火煮沸2060min，滤出药液；剩余药渣加入药渣重量的5~10倍量的水再煎2次；合并3次药液；(3)将步骤(2)得到的药液离心取上清，再文火煎煮浓缩至每毫升含生药2g，离心取上清；(4)上清液经100。C高压灭菌2040min，4"保存。5、权利要求1所述的抗鸽毛滴虫病的中药组合物在制备抗鸽毛滴虫病的药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种抗鸽毛滴虫病的中药组合物，包含如下重量份数的组份鱼腥草30-50份，炒黄芩30-50份，茜草25-40份，紫草25-40份，荆芥15-30份，柴胡15-30份。本发明还公开了该中药组合物的口服液的制备方法。本发明以中药方剂替代甲硝唑类禁用于畜产品的西药，有利于无公害食品的生产。鸽子感染毛滴虫后，用本产品可取得显著疗效，治愈率达93.33％，有效率100％。文档编号A61K9/00GK101574430SQ20091003314公开日2009年11月11日申请日期2009年6月15日优先权日2009年6月15日发明者姝张,戴鼎震,李志源,杜改梅,晓蒋,蒋加进,谈亦奇申请人:金陵科技学院