专利名称：从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法
技术领域：
本发明涉及一种中药有效成分的提取工艺，具体涉及一种从板蓝根中高 提取率地提取表告依春的方法。
背景技术：
板蓝根为中国传统抗病毒中药，《中华人民共和国药典》(2005年版) 一部收载为十字花科植物菘蓝i5加'w'"力goft'ca FoW.的干燥根，始载于《神 农本草经》，具有清热解毒、凉血利咽之功效，临床上常用于病毒性及细菌 性感染疾病。表告依春，英文名为Epigoitrin，是一类含-克的生物碱类化合 物，其结构式如下文献报道表告依春为板蓝根的主要成分(参见①刘海利，吴立军，李 华，等.板蓝根的化学成分研究[J].沈阳药科大学学报，2002， 19(2)， 93-96.②Huang Q S， Yoshihiro K, Natori S. Isolation of 2-hydroxy-3-butenyl thiocyanate, epigoitrin and adenosine from"Banlangen，,， /"<5%oft'c<3 root[J].尸/a"taMeAca, 1981， 42(3): 308-310.③徐丽华，黄芳，陈婷，等.板蓝根 中的抗病毒活性成分[J].中国天然药物，2005, 3(6): 359-360.)，并有显著的N H抗病毒活性(参见徐丽华，黄芳，陈婷，等.板蓝根中的抗病毒活性成分[J]. 中国天然药物，2005, 3(6): 359-360.)。目前，文献和相关专利提取表告依 春的方法有6~12倍量的30~95%乙醇回流提取，8 12倍量水煎煮提取的方 法，(参见①黄芳，熊雅婷，徐丽华，等.板蓝根不同提取物中抗病毒成分 表告依春在大鼠体内的药代动力学[J].中国药科大学学报，2006, 37(6): 519-522.②徐丽华.从板蓝根中提取表告依春的方法及其用途[P].中国专利 CN1666984， 2005-09-14.③梁鑫淼，丰加涛，徐青，等.一种表告依春的分 离制备方法[P].中国专利CN101289429A， 2008-10-22.),这些方法存在提 取率低、耗时长、提取出的杂质多、后处理繁瑣等缺点。 发明内容本发明的目的是提供一种从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法， 该方法能有效提取表告依春，且周期短、提取杂质少、后处理方便，以满足 充分利用原料，缩减投入成本，提高经济效益的需要。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法，其特征是，步骤如下 步骤1、将干燥的板蓝根药材粉碎成粗粉，加入10~25倍重量的溶剂于 20 7(TC温度下提取一定时间；所述的溶剂为水或低浓度的乙醇(1~50%的乙醇);步骤2、将步骤1中得到滤液于40 70。C温度下减压浓缩至一定体积， 得到表告依春提取组分；步骤3、将步骤2得到的浓缩液通过已经处理好的大孔树脂，先用5~12 倍柱体积的水冲洗，然后用2~5倍柱体积、30~50%质量浓度的乙醇冲洗并收集；步骤4、将步骤3得到的醇洗脱液于40 70。C温度下减压浓缩，即为表 告依春大孔树脂分离组分；步骤5、将步骤4中得到的表告依春大孔树脂分离组分，经柱层析或高 效工业色i普柱分离，制备出表告依春单体。上述的制备方法中，步骤1中板蓝根药材为过10~40目篩的粗粉，较优 为过10~20目筛，最优为过20目筛；上述的制备方法中，步骤1中提取溶剂为水或1 50%的乙醇，最优为水；上述的制备方法中，步骤1中加入的溶剂倍量为10~25倍量，较优为 15 20倍，最优为20倍量；上述的制备方法中，步骤1中提取温度为20 70°C，较优为40 70°C，最 优为60°C;上述的制备方法中，步骤1中提取时间为5 60min，较优为5 20min， 最优为10min;上述的制备方法中，步骤1中所用的提取方法可以是微波辅助提取、超 声提取或冷浸搅拌提取；上述的制备方法中，步骤l中提取次数为1~4次，较优为1 2次，最优 为提取1次；上述的制备方法中，步骤2中减压浓缩温度为40 70。C，较优为50~70°C， 最优为60°C;上述的制备方法中，步骤2中减压浓缩至一定体积，其相对密度为 1.05 1.20，较优为1.05 1.10，最优为1.10;步骤3中所用大孔树脂为常用的DlOl、 AB-8、 LSA-IO、 HPD100等树脂，较优为DIOI、 LSA-IO，最优为D101;上述的制备方法中，步骤3中先用5 12倍柱体积的水冲洗，较优为8~10 倍柱体积，最优为8倍柱体积；上述的制备方法中，步骤3中用2 5倍柱体积的30~50%乙醇沖洗，较 优为2~3倍柱体积的30~40%乙醇冲洗，最优为1倍柱体积30%乙醇冲洗；上述的制备方法中，步骤4中减压浓缩温度为40 70。C，较优为50 70°C， 最优为60°C。本申请的发明人在研究中发现，提取温度对表告依春的提取效率影响显 著，而以前的文献和专利所公开的现有技术中，对表告依春的提取温度都较 高(例如，采用IO(TC的煎煮)。本发明明确了温度是对表告依春提取率影响 的关键因素，并选择出了最佳的提取温度与工艺。 采用本发明提取表告依春具有以下特点 1、提取效率高。①板蓝根药材中表告依春的含量测定色谱条件ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6mmxl50mm, 5pim),流动相 为乙腈-(4.0mL磷酸+0.3mL三乙胺+500mL水)-8.5: 91.5;流速为 0.7mL/min, 4企测波长为245nm，进样量为20^iL，柱温为30°C。样品处理方法取板蓝根药材粉末(过40目筛)约0.2g，精密称定， 一式三份，分别置50mL具塞锥形瓶中，加水20mL，称重，室温条件下超 声提取(功率250W,频率20KHz) 60min，取出，放冷，再称重，用水补 足损失重量，0.45nm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试样品。测定结果HPLC检测，并计算药材中表告依春含量为2566.40jxg/g。 ②本发明和文献及专利中提取方法提取效率的比较 文献和专利中提取方法提取样品
提取方法1:板蓝根药材粗粉10g，精密称定，分别用6倍量的30%乙 醇、70%乙醇、95%乙醇回流提取2次，合并提取液，60。C减压浓缩至干， 分别用相应溶剂洗出，定容至50mL的容量瓶中，0.45pm微孔滤膜过滤，弃 去初滤液，取续滤液作为供试样品，备用。
提取方法2:板蓝根药材粗粉10g，精密称定，分别用12倍量的30%乙 醇、70%乙醇、95%乙醇回流提取2次，合并提取液，60。C减压浓缩至干， 分别用相应溶剂洗出，定容至50mL的容量瓶中，0.45拜微孔滤膜过滤，弃 去初滤液，取续滤液作为供试样品，备用。
提取方法3:板蓝根药材粗粉10g，精密称定，加入其重量8倍的水煎 煮提取2次，每次lh，合并提取液，60。C减压浓缩至适当体积，移至50mL 的容量瓶中，并用水洗容器，最后定容至刻度，0.45叫微孔滤膜过滤，弃 去初滤液，取续滤液作为供试样品，备用。
提取方法4:板蓝根药材粗粉10g，精密称定，加入其重量8倍的水煎 煮提取3次，每次3h，合并提取液，6(TC减压浓缩至适当体积，移至50mL 的容量瓶中，并用水洗容器，最后定容至刻度，0.45pm微孔滤膜过滤，弃 去初滤液，取续滤液作为供试样品，备用。
提取方法5:板蓝根药材粗粉10g,精密称定，加入其重量12倍的水煎 煮提取2次，每次lh,合并提取液，60。C减压浓缩至适当体积，移至50mL 的容量瓶中，并用水洗容器，最后定容至刻度，0.45pm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试样品，备用。
提取方法6:板蓝根药材粗粉10g,精密称定，加入其重量12倍的水煎 煮提取3次，每次3h,合并提取液，60。C减压浓缩至适当体积，移至50mL 的容量瓶中，并用水洗容器，最后定容至刻度，0.45pm微孔滤膜过滤，弃 去初滤液，取续滤液作为供试样品，备用。
本发明所采用的提取方法
板蓝根药材粗粉10g，精密称定，采用本发明所用的方法提取，提取液 60。C减压浓缩至适当体积，移至50mL的容量瓶中，并用相应溶剂洗涤容器， 最后定容至刻度，0.45pm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试 样品，备用。
HPLC检测，计算提取出表告依春的量，并有1 Og药材中表告依春的总 量计算提取率。结果见表l。
表l现有技术的方法提取表告依春的提取率和本发明中提取方法比较(n=3)
提取方法提取溶媒提取出的量(mg)药材中的含量 (mg)提取率 (%)
提取方法130%乙醇2.1525.728.36
提取方法l70%乙醇1.1925.974.58
提取方法195%乙醇0.7726.122.95
提取方法230%乙醇2.2025.948.48
提取方法270%乙醇1.3226.265.03
提取方法295%乙醇0.8325.683.23
提取方法3水8.7825.8733.94
提取方法4水9.2126.0535.36
提取方法5水9.5725.9236.92
提取方法6水10.2526.3338.93本发明提取方法城微度乙醇 24.28_^_93.96
由结果可知，采用本发明所用的方法提取表告依春，其提取效率比已有 文献和专利中最高的提取率(38.93%)高2.4倍多。
2、 提取出的杂质少。本发明所用提取方法提取时间短，提取温度低，所 以提取出的杂质少，不用进行醇沉处理，后续纯化方便。
3、 周期更短。本发明所用提取方法工艺筒单，提取时间短，从原药材 粉碎到提取、纯化周期更短。
4、 更适宜工业化生产。本发明能将板蓝根中的表告依春提取较完全， 充分利用了原料，减少了投入成本；另本发明所釆用的工艺非常容易实现标 准化，自动化，适于进行产业化大规模生产。
具体实施例方式
通过以下实例进一步详细说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这 些实例的任何限制。
实施例1:称取板蓝根药材粗粉(过20目筛)50g，加入20倍量的水 60。C微波辅助提取10min,过滤，取续滤液稀释后作为供试样品，HPLC检 测表告依春的浓度，计算提取出表告依春的量为118.49mg，按下面公式计算 提取率为92.34%。
提取率(％) = f H^^l^: x 100%……公式(l) 药材中表告依春的量
实施例2:称取板蓝根药材粗粉200g (过20目筛)，加入20倍量的水 6(TC微波辅助提取10min，过滤，取续滤液稀释后作为供试样品，HPLC检 测表告依春的浓度，计算提取出表告依春的量为478.12mg,按下面公式计算提取率为93.13%。
实施例3:称取板蓝根药材粗粉500g (过20目筛)，加入20倍量的水 6(TC微波辅助提取10min,过滤，取续滤液稀释后作为供试样品，HPLC检 测表告M的浓度，计算提取出表告依春的量为1196.22mg，按下面公式计 算提取率为93.20°/。。
实施例4:称取板蓝根药材粗粉5kg(过20目筛)，加入20倍量的水60°C 微波辅助提取10min，过滤，取续滤液稀释后作为供试样品，HPLC检测表 告依春的浓度，计算提取出表告依春的量为11888.85mg，按下面公式计算提 取率为92.64%。
实施例5:将微波提取液浓缩至相对密度为1.10g/mL，通过已经处理好 的DIOI大孔吸附树脂，1/3柱床体积上样，先用8倍柱体积的水冲洗，流速 为3mL/min;再用2倍柱体积的30%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，60。C减压浓 缩、真空干燥，即得表告依春纯化部位，HPLC检测表告依春的含量为 34.18%。
实施例6:将孩t波提取液浓缩至相对密度为1.10g/mL，通过已经处理好 的DIOI大孔吸附树脂，1/3柱床体积上样，先用8倍柱体积的水沖洗，流速 为3mL/min;再用2倍柱体积的30%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，60。C减压浓 缩、真空干燥，即得表告依春纯化部位，HPLC检测表告依春的含量为 35.47%。
实施例7:将微波提取液浓缩至相对密度为UOg/mL，通过已经处理好 的DIOI大孔吸附树脂，1/3柱床体积上样，先用8倍柱体积的水冲洗，流速 为3mL/min;再用2倍柱体积的30%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，60。C减压浓缩、真空干燥，即得表告依春纯化部位，HPLC检测表告依春的含量为 34.60%。
实施例8，与实施例l基本相同，但有以下改变 步骤l中，所用的提取方法是超声提取；
所述板蓝才艮药材为过10目筛的粗粉；所述提取溶剂为50%质量浓度的乙 醇；所述加入的溶剂倍量为15倍；所述提取温度为4(TC;所述提取时间为 60min;
步骤2中，所述减压浓缩温度为50°C;所述减压浓缩至一定体积是指 浓缩至其相对密度为1.05;
步骤3中，沖洗大孔树脂的水量为IO倍柱体积；冲洗大孔树脂的乙醇量 为3倍柱体积，质量浓度为40%;
步骤4中减压浓缩温度为50°C。
实施例9，与实施例l基本相同，但有以下改变
步骤l中，所用的提取方法是冷浸搅拌提取；
所述提取溶剂为30%质量浓度的乙醇；所述加入的溶剂倍量为25倍量； 所述提取温度为70°C;所述提取时间为20min;所述提取次数为4次；
步骤2中，所述减压浓缩温度为70°C;所述减压浓缩至一定体积是指 浓缩至其相对密度为1.05;
步骤3中，沖洗大孔树脂的水量为12倍柱体积；冲洗大孔树脂的乙醇量 为3倍柱体积，质量浓度为40%;
步骤4中减压浓缩温度为为40°C。
实施例10，与实施例l基本相同，但有以下改变步骤l中，所述加入的溶剂为水；所述加入的溶剂倍量为IO倍量；所述 提取温度为2(TC;所述提取时间为10min;所述提取次数为2次；
步骤2中，所述减压浓缩温度为40。C;所述减压浓缩至一定体积是指 浓缩至其相对密度为1.05;
步骤3中，冲洗大孔树脂的乙醇量为3倍柱体积，质量浓度为50%;
步骤4中减压浓缩温度为为70°C。
实施例ll，与实施例l基本相同，但有以下改变
步骤l中，所述加入的溶剂为水；所述加入的溶剂倍量为IO倍量；所述 提取时间为5min;所述提取次数为1次；
步骤2中，所述减压浓缩至一定体积是指浓缩至其相对密度为1.20;
步骤3中，冲洗大孔树脂的乙醇量为5倍柱体积，质量浓度为30%。
以上各实施例所用大孔树脂可以是DIOI、 AB-8、 LSA-10或HPD100中 的任意一种。
实施例12，与实施例l基本相同，但有以下改变 步骤1中，所述提取溶剂为1 %质量浓度的乙醇。
权利要求
1、一种从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法，其特征是，步骤如下步骤1、将干燥的板蓝根药材粉碎成粗粉，加入10～25倍重量的溶剂于20～70℃温度下提取一定时间；所述的溶剂为水或1％～50％质量浓度的乙醇；步骤2、将步骤1中得到滤液于40～70℃温度下减压浓缩至一定体积，得到表告依春提取组分；步骤3、将步骤2得到的浓缩液通过已经处理好的大孔树脂，先用5～12倍柱体积的水冲洗，然后用2～5倍柱体积、30％～50％质量浓度的乙醇冲洗并收集；步骤4、将步骤3得到的醇洗脱液于40～70℃温度下减压浓缩，即为表告依春大孔树脂分离组分；步骤5、将步骤4中得到的表告依春大孔树脂分离组分，经柱层析或高效工业色谱柱分离，制备出表告依春单体。
2、根据权利要求1所述的从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法， 其特征是，步骤1中，所述板蓝根药材为过10~20目筛的粗粉；所述提取溶剂为水；所述加入的溶剂倍量为15-20倍；所述提取温度为40-70。C;所述提取时间为5~60min; 步骤2中，所述减压浓缩温度为50-70°C;所述减压浓缩至一定体积是指浓缩至其相对密度为L05 1.20; 步骤3中，所用大孔树脂选自DlOl、 AB-8、 LSA-IO、 HPD100; 沖洗大孔树脂的水量为8~10倍柱体积；沖洗大孔树脂的乙醇量为2~3倍柱体积，质量浓度为30~40%; 步骤4中减压浓缩温度为50~70°C。
3、根据权利要求2所述的从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法， 其特征是，步骤1中，所述板蓝根药材为过20目筛的粗粉； 所述加入的溶剂倍量为20倍量； 所述提取温度为60 °C; 所述提取时间为5 20min; 所述提取次数为1~4次； 步骤2中，所述减压浓缩温度为60°C;所述减压浓缩至一定体积是指浓缩至其相对密度为1.Q5 1.10; 步骤3中，所用大孔树脂选自DlOl、 LSA-10; 冲洗大孔树脂的水量为8倍柱体积；沖洗大孔树脂的乙醇量为l倍柱体积，质量浓度为30%; 步骤4中减压浓缩温度为为60°C。
4、 根据权利要求3所述的从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法， 其特征是，步骤1中，所述提取时间为10min; 所述提取次数为1 2次； 步骤2中，所述减压浓缩至一定体积是指浓缩至其相对密度为1.10; 步骤3中，所用大孔树脂为D101。
5、 根据权利要求1 4之一所述的从板蓝根中高提取率地提取表告依春的 方法，其特征是，步骤l中所用的提取方法是微波辅助提取、超声提取或冷 浸搅拌提取。
全文摘要
从板蓝根中高提取率地提取表告依春的方法1.板蓝根药材粉碎成粗粉，加入10～25倍重量的水或低浓度乙醇于20～70℃温度下提取；2.将滤液于40～70℃温度下减压浓缩，得到表告依春提取组分；3.将浓缩液通过已经处理好的大孔树脂，先用5～12倍柱体积的水冲洗，然后用2～5倍柱体积、30％～50％质量浓度的乙醇冲洗并收集；4.将醇洗脱液于40～70℃温度下减压浓缩，即为表告依春大孔树脂分离组分；5.将表告依春大孔树脂分离组分，经柱层析或高效工业色谱柱分离，制备出表告依春单体。本发明表告依春的提取效率比现有技术高2.4倍多。且周期短、杂质少，后处理方便，可充分利用原料，缩减成本，提高经济效益。
文档编号A61P31/12GK101602740SQ20091003291
公开日2009年12月16日 申请日期2009年6月1日 优先权日2009年6月1日
发明者安益强, 贾晓斌, 彦 陈 申请人:贾晓斌