一种重感灵胶囊指纹图谱的建立方法与流程

本发明涉及中药制剂的质量检测方法，特别是涉及一种用高效液相色谱法对重感灵胶囊制剂指纹图谱的构建方法。

背景技术：

重感灵胶囊由毛冬青、羌活、葛根、石膏、马鞭草、板蓝根、青蒿七味中药与马来酸氯苯那敏、安乃近两味化药制成的中西药复方制剂。具有解表清热，疏风止痛的作用。用于表邪未解、郁里化热引起的重症感冒，症见恶寒高、高热、头痛、四肢酸痛、咽痛、鼻塞、咳嗽等。现行重感灵胶囊的质量控制方法主要为理化鉴别、薄层鉴别、含量测定与马来酸氯苯那敏的含量均匀度检测。对处方中中药仅仅是选取其中一两种成分状况来评价产品的内在质量，这些控制方法不足以代表其整体质量，存在一定的局限性。现行重感灵胶囊的质量控制标准已不能真实全面的反映其内在品质及批次之间产品质的一致性。近年来科技发展迅速，指纹图谱技术、远红外在线控制技术等多种新技术用于中药的生产和质量控制等方面，取得了很好的效果，极大的提高了中药生产和质量控制等环节的科技含量。现行参照西药的质量控制模式的质量标准不能恰当的反应中药内在的质量。宏观的鉴别和主要有效成分含量测定结合才是质量控制模式的发展趋势。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种重感灵胶囊指纹图谱的建立方法，该方法用于评价和控制重感灵胶囊的质量，以确保证重感灵胶囊的质量稳定性、一致性和可控性，从而提高重感灵胶囊的安全性和有效性。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案。

一种重感灵胶囊指纹图谱的建立方法：取重感灵胶囊内容物用60%甲醇超声波提取；以葛根素为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱过程为梯度洗脱。

进一步的，上述重感灵胶囊指纹图谱的建立方法：取重感灵胶囊内容物，研细后用50-80%甲醇超声波提取，放冷、滤过，取续滤液；以葛根素为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱过程为梯度洗脱。

前述重感灵胶囊指纹图谱的建立方法如下：

（a）供试品溶液的制备：称取重感灵胶囊内容物1.0g，充分研细后加入50-80%甲醇50ml，称定重量，超声处理15-45分钟，取出放冷，滤过，取续滤液为供试品溶液，所述滤过为最终采用微孔滤头（孔径0.45um）滤过；

（b）对照品溶液的配制：精密称取葛根素对照品适量，加50%-80%甲醇制成每1ml含葛根素0.05mg的对照品溶液，即得；

（c）色谱条件为： C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为0.5%醋酸溶液，梯度洗脱，流速0.5-1.5ml/min，柱温15～35℃，检测用蒸发光散射检测器；

（d）测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到重感灵胶囊的指纹图谱。

进一步地，前述重感灵胶囊指纹图谱的方法优选方案如下：

（a）供试品溶液的制备：精密取重感称灵胶囊内容物1g，充分研细后加入60%甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，取出放冷，滤过，取续滤液为供试品溶液；

（b）对照品溶液的配制：精密称取葛根素对照品7mg，加60%甲醇至溶解至25ml，摇匀，从中取2ml用60%甲醇稀释至10 ml，得到葛根素对照品溶液；

（c）色谱条件为：C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为0.5%冰醋酸溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：108℃ ，氮气流速：3.2L/min；

（d）测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到重感灵胶囊的指纹图谱。

前述方法中所述梯度洗脱的程序以如下体积比浓度配置进行：

用前述方法建立的指纹图谱中有10特征峰，其中峰3为葛根素，峰9与峰10来自毛冬青特征峰，图谱总长度为67min。

上述指纹图谱中所述10个特征共有峰的平均保留时间（min）如下：

峰2、峰3、峰4、峰5为葛根药材峰，峰9、峰10为毛冬青药材专属峰。其他小峰为板蓝根等药材的一些共有峰，方中马鞭草、青蒿、安乃近在该色谱条件下基本检不出特征峰。

使用前述方法测定共7个批次的重感灵胶囊，得到7批次的重感灵胶囊指纹图谱。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012年版相似度软件，对7批次重感灵胶囊HPLC图谱进行相似度评价，不同批次重感灵胶囊指纹图谱的相似度大于0.9，说明各批次的样品色谱模式相似，其化学成分一致性较好。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

（1）用本发明所提供的方法建立的重感灵胶囊HPLC 指纹图谱与对照图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012年版相似度软件对比评价，相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量。

（2）指纹图谱注重各特征峰的关联性和指纹图谱的整体面貌特征，标定了10个共有峰，反应信息比较完全，保证了产品质量的长期稳定性，疗效的安全性和可靠性。

（3）本发明具有方便、快捷、稳定、精密度高和重现性好等优点，可准确可靠的控制重感灵胶囊的质量。

附图说明

图1 重感灵胶囊指纹图谱。

图2 七批次重感灵胶囊的指纹图谱。

图3 葛根药材色谱图。

图4 葛根素对照品色谱图。

图5板蓝根药材色谱图。

图6马鞭草药材色谱图。

图7 青蒿药材色谱图。

图8 毛冬青药材色谱图。

具体实施方式

除非另有定义，本发明使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属技术领域普通技术人员通常理解的含义相同。通常，本发明使用的命名及下述实验方法都是本领域公知的或常用的。为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明作进一步的说明。

仪器：Waters 2695-2996 高效液相色谱仪；色谱柱：赛博斯C18 4.6×250mm，5μm；检测器：奥泰2000ELSD； AB104-N万分之一天平（梅特勒-托利多）； AUW2200十万分之一天平（SHIMADZU 岛津）；KQ3200超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；Mili-Q超纯水仪：（美国Milipore公司）。

试药和试剂： 重感灵胶囊（批号：121001、121002、121101、130303、130305、130307、130702）；甲醇（分析纯）、乙腈（色谱纯）、醋酸（分析纯）。

实施例1：重感灵胶囊基于指纹图谱的质量控制方法。

供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：取重感灵胶囊内容物1g，充分研细后加入60%甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，取出放冷，滤过，取续滤液过0.45um的滤膜，即为供试品溶液。

对照品溶液的配制：精密称取葛根素对照品7mg，加60%甲醇至溶解至25ml，摇匀，从中取2ml用60%甲醇稀释至10 ml，作为葛根素对照品溶液。

色谱条件为： C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为0.5%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温15～35℃，蒸发光散射检测器，漂移管温度：108℃ ，氮气流速：3.2L/min。

梯度洗脱的程序以如下体积比浓度配置进行：

测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到重感灵胶囊的指纹图谱。

实施例2：重感灵胶囊指纹图谱的建立。

采用实施例1 所述方法测定共7个批次的重感灵胶囊（批号：121001、121002、121101、130303、130305、130307、130702），得到7批次的重感灵胶囊指纹图谱。

采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012年版相似度软件，对7批次重感灵胶囊HPLC图谱的进行相似度评价，重感灵胶囊指纹图谱相似度研究如下：

7个批次重感灵胶囊指纹图谱相似度计算结果

上表显示，不同批次重感灵胶囊指纹图谱的相似度大于0.9，说明各批次的样品色谱模式相似，其化学成分一致性较好。

应当说明的是，虽然本发明以较佳实施例揭示如上，然其并非用以限定本发明，任何熟习此项技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。