三黄方制剂成分检测方法及指纹图谱构建方法

三黄方制剂成分检测方法及指纹图谱构建方法
【专利摘要】本发明属于药物分析领域，涉及一种中药指纹图谱的测定方法，本发明公开了一种三黄方制剂成分检测方法，将供试品溶液注入UPLC?Q?TOF?MS联用仪，以UPLC?Q?TOF?MS法采用梯度洗脱进行测定，根据UPLC?Q?TOF?MS联用仪检测结果，获得三黄方制剂的成分。本发明还公开了利用上述三黄方制剂成分检测方法，取不同批次的三黄方制剂供试品溶液按上述的方法进行检测，根据检测结果，标定共有峰，建立了三黄方制剂超高效液相色谱?高分辨?飞行时间质谱联用指纹图谱。该方法和指纹图谱可作为三黄方制剂质量控制与分析的有效方法之一。
【专利说明】
三黄方制剂成分检测方法及指纹图谱构建方法
技术领域
[0001] 本发明属于药物分析领域，涉及中药指橘绿木霉菌谱的测定方法，尤其涉及一种 三黄方制剂成分检测方法及超高效液相色谱-高分辨-飞行时间质谱联用指纹图谱构建方 法。
【背景技术】
[0002] 中药指纹图谱是采用现代分析技术建立的能反映中药材或中成药的某类或几类 成分的色谱或光谱信息的图谱，能较全面地反映中药的整体化学特征，体现其内在的整体 质量，可弥补仅用少数成分来控制中药质量的弊端，已成为国际公认的控制中药或天然药 物质量的有效手段。然而，中药化学成分的多样性和复杂性以及药效物质基础的不确定性， 增加了中药指纹图谱建立的难度以及指纹图谱的有效和重复性。
[0003] 目前，中药指纹图谱研究较多的是中药化学指纹图谱，是采用色谱、波谱和其他分 析方法建立的用于表征中药化学成分特征的指纹图谱。高效液相色谱(HPLC)具有分离效能 高、分析速度快、重现性好的特点，以及可配合不同检测器来分析各种类型样品的优势，已 成为公认的建立中药指纹图谱的主导方法。近年来兴起的超高效液相色谱技术(UPLC)具有 超高压、超高灵敏度、超高分离度等特点，它借助HPLC的理论与原理，采用1.7μπι粒径的色谱 柱填料，能使一次指纹图谱的分析时间由原来的至少1小时缩短为为l〇min左右，并且色谱 峰容量和稳定性也显著提高，UPLC在中药及天然产物等复杂体系的分离分析上具有明显优 势，为中药指纹图谱研究提供了新的分离平台。
[0004] 紫外(UV)检测器是目前与液相色谱联用进行指纹图谱研究应用最广泛的检测方 法。然而化学成分的紫外吸光度有加和性，从而使测定结果产生偏差，不能真实反映中药化 学成分的含量。而且紫外检测法只适合具有紫外吸收的中药化学成分，对于无紫外吸收或 吸收较弱的成分，难以进行有效测定。特别本复方制剂中君药黄芪中标志性重要化学成分 三萜皂苷类(如黄芪甲苷IV等）以及佐药泽泻中标志性重要化学成分原帖烷三萜类成分(如 泽泻醇A等)在紫外区吸收很弱并且干扰较多，不适合用紫外检测器测定。
[0005] 质谱(MS)检测器可用于中药中各种化合物的检测，均可产生较好的响应，是一种 高灵敏度的通用检测器，更重要的是能提供化合物的分子量和分子结构信息（串联质谱）。 采用质谱检测器，通过确定离子的质量扫描范围，可以使其包含所有目标化合物的信息。应 用总离子流检测模式，可以综合化合物的全部信息；进而，通过考查共有色谱峰的质谱信 息，可以确定色谱峰的组成情况，保证色谱峰为单一化合物组成，具有较好的科学性。由于 中药化学成分的复杂性，保证中药指纹图谱中的色谱峰为单一化合物峰是很难的或者说几 乎不可能，而采用质谱检测器，可以从总离子流色谱图（TIC)中提取特定m/z的离子，建立提 取离子色谱图（EIC)，从而保证了色谱峰为单一化合物组成。另外，通过对共有峰进行质谱 定性，建立共有峰的提取离子色谱图，进而通过色谱峰与化合物m/z的一一对应关系，实现 对各共有峰的准确定位和测量，从而可弥补其它方法、实验室之间的重现性差的缺点。
[0006] 飞行时间串联质谱仪(Q-T0F-MS)是高分辨串联质谱，其显著特点是高灵敏度、高 选择性，能得到高质量质谱图和化合物精确分子量(质量精度<3X 106)，能大大提高化合物 结构鉴定的准确性。UPLC-Q-TOF-MS结合了非常优良的色谱分离能力和非常灵敏、非常智能 的检测能力，在中药化学指纹图谱中极具发展前景和空间，优势突出，特点明显，必将成为 中药指纹图谱的发展趋势和方向。
[0007]三黄方为复旦大学附属华山医院协定处方，由黄芪、黄连、泽泻、蒲黄、茵陈配伍而 成，多年来临床应用于治疗代谢综合症和非酒精性脂肪肝，为中医科早期协定处方益气散 聚方(专利号：200810034507.3)的精简方(专利申请号：201511018056.0)，具有益气散聚功 效，能够改善患者体征与体内胰岛素抵抗状态、能促进气血精微正常运化，纠正机体代谢异 常，即具有益气散结、清热化痰、祛湿降浊、调脂化瘀的作用。由于黄芪中重要有效成分如黄 芪皂苷IV等三萜皂苷类以及泽泻中重要有效成分如泽泻醇及其酯类等原萜烷三萜类的紫 外吸收较差，一般的紫外检测器检测灵敏度较差;蒸发光散射检测器灵敏度也比较差，限制 了含这两种中药的复方制剂的指纹图谱研究。目前为止我们报道了采用2成分、4个成分含 量测定方法控制三黄方制剂的含量，但是仍没有其多成分含量测定以及利用UPLC-Q-TOF-MS进行质量控制的报道。本发明基于《中国药典》2015版对5种组成中药的质量鉴定所需测 定的种11种化学成分(黄芪为黄芪甲苷IV、毛蕊异黄酮葡萄糖苷;黄连为表小檗碱、黄连碱、 巴马汀、小檗碱;泽泻为23-乙酰泽泻醇Β;生蒲黄为异鼠李素-3-0-新橙皮苷和香蒲新苷;茵 陈为绿原酸与滨蒿内酯）以及国家食品药品监督管理局标准品目录，并参考三黄方制剂血 清化学研究（18种成分能够入血），选择出的23种指纹图谱测定指标除了涵盖以上化学成分 并分别针对药典中对5种中药特别生蒲黄、泽泻所需检测目标成分较少的缺点新增了 12种 化学成分，并经10批三黄方溶液指纹图谱的测定，初步确定共有化学成分，作为三黄方制剂 质量控制的参考方法。
[0008] 本技术基于高端液相测定技术，所需设备尚未在国内大量普及，但对于一般综合 性大学与大型中药生产药企都为必备配备。三黄方制剂目前已基本完成临床前研究，将初 步作为复旦大学附属华山医院院内开发制剂，其制剂尚未大规模生产，目前的指纹图谱主 要作为参考图谱，但本测定方法可以作为三黄方制剂的质量控制方法。

【发明内容】

[0009] 本发明的目的在于克服现有技术的缺点和不足，提供一种利用UPLC-Q-TOF-MS简 单快速进行三黄方制剂质量控制的方法，以及由此方法所构建的三黄方制剂指纹图谱。 [0010]本发明的第一个目的是提供一种三黄方制剂成分检测方法，包括以下步骤：
[0011]步骤1:供试品溶液的制备
[0012]取黄芪、黄连、泽泻、生蒲黄和茵陈，用水和乙醇提取，定容，得到供试品溶液；
[0013]步骤2:供试品溶液的测定
[0014] 吸取供试品溶液注入UPLC-Q-TOF-MS联用仪，以UPLC-Q-TOF-MS法采用梯度洗脱进 行测定，根据UPLC-Q-TOF-MS联用仪检测结果，获得三黄方制剂的成分。
[0015] 优选地，上述的步骤1具体包括以下步骤：
[0016] 步骤a:将黄芪、黄连、泽泻、生蒲黄和茵陈用纯化水浸泡后，再加入纯化水同煮，然 后滤取药液并浓缩处理得到浓缩药液；
[0017] 步骤b:往步骤a得到的浓缩药液中加入乙醇搅拌均匀后，常温沉淀24小时，然后取 上清液回收乙醇并进行浓缩处理，再次取上清液回收乙醇并进行浓缩处理，得到浓缩液；
[0018] 步骤c:往步骤b得到的浓缩液中加入水搅拌均匀后，沉淀24小时，然后将上清液进 行浓缩处理，定容得到供试品溶液。
[0019] 优选地，上述的步骤1中按重量比计算，各组分含量分别为:黄芪1-4份;黄连1份； 泽泻1 -3份;生蒲黄1 -3份;茵陈1 -3份。
[0020] 优选地，上述步骤2中UPLC色谱条件为:流动相为0.1 %的甲酸水-0.1 %的甲酸乙 腈;流速0.3-0.5!11171^11;柱温35-50°(：;进样量1-54匕
[0021] 优选地，上述步骤2中UPLC色谱测定方式为正负离子全扫描，电喷雾(ESI)离子源 检测模式;扫描质量范围为l〇〇-l〇〇〇Da。
[0022] 优选地，上述步骤2中UPLC色谱的色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱。
[0023] 优选地，上述的ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱的色谱条件为：流速0.4mL/min，柱 温45-50°C，进样量 l-5yL。
[0024]本发明的第二个目的提供一种三黄方制剂指纹图谱构建方法，取不同批次的三黄 方制剂供试品溶液按上述的三黄方制剂成分检测方法进行测定，根据检测结果，标定共有 峰，建立三黄方制剂指纹图谱。
[0025]通过10批三黄方制剂供试品溶液比对，确定了 23种共有成分，并标出共有峰。本发 明检测条件下样品中除目的成分外不含有其它干扰成分，结果显示本发明提供的检测方法 精密度高、更稳定、重复性好，耐用性良好，本发明的图谱可用于三黄方制剂的质量控制与 分析。
[0026]本发明利用指纹图谱从整体上表征三黄方制剂的化学成分，并通过血清药物化学 方法证明该方法可用于测定18个共有峰均为被吸收入血的成分，可能是三黄方制剂发挥药 效的潜在有效成分。
[0027]与现有技术相比，本发明具有以下优点：
[0028] (1)本发明在国内外首次采用UPLC-Q-T0F-MS作为分析手段，利用23种容易购买的 标准品(包括《中国药典》2015版规定需要测定的5种组成中药材中共计11种化学成分)建立 了三黄方制剂化学指纹图谱质量控制方法，与现有报道的HPLC-UV分析方法相比，不仅大大 缩短了分析时间，提高了分离效率和检测灵敏度;而且能给各峰赋予分子量的信息，通过建 立离子色谱图，可准确计算各峰的峰面积，并在实验室间重现时若保留时间发生偏离，可通 过各峰的分子量信息进行准确定位，从而保证了指纹图谱检测方法的可复制性，可用于三 黄方有关制剂的质量控制与分析。
[0029] (2)可以同时测定三黄方中18个入血成分，对于进一步研究三黄方制剂的血清药 理学、药代动力学、开发新药具有比较重要的作用。
[0030] (3)本方案也可用于5种组成中药材的化学物质基础分析。
[0031] (4)本发明检测条件下样品中除目的成分外不含有其它干扰成分，结果显示本发 明提供的检测方法精密度高、更稳定、重复性好，并且耐用性良好。
【附图说明】
[0032]图1为三黄方制剂和5种组成中药的UPLC-Q-T0F-MS阳离子提取离子色谱图（HQ = 黄芪，HL =黄连，ZX =泽泻，PH=蒲黄，YC =茵陈，SHD =三黄方提取液）。
[0033]图2为三黄方制剂和5种组成中药的UPLC-Q-T0F-MS阴离子提取离子色谱图（HQ = 黄芪，HL =黄连，ZX =泽泻，PH=蒲黄，YC =茵陈，SHD =三黄方提取液）。
[0034]图3为三黄方制剂的UPLC-Q-T0F-MS指纹图谱（阳离子模式）。
[0035]图4为三黄方制剂大鼠含药血清的UPLC-Q-T0F-MS阳离子提取离子色谱图。
[0036]图5为三黄方制剂大鼠含药血清的UPLC-Q-T0F-MS阴离子提取离子色谱图。
【具体实施方式】
[0037] 下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明， 但是下述实施例并不限制本发明范围。
[0038] 实施例1
[0039]本实施例为三黄方制剂UPLC-Q-T0F-MS指纹图谱的测定方法，详细方法如下：
[0040] 1.仪器与试剂药品
[0041] 1丄仪器
[0042] Waters公司AcquityTM Ultra Performance LC system(Waters，Milford，USA)， 系统配备有四元栗，真空脱气机，自动进样器，控制软件为MassLynX(V 4.1)。
[0043] 1.2.试剂药品
[0044] 乙腈和甲酸为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯；
[0045]黄芪甲苷IV，芒柄花素，毛蕊异黄酮，毛蕊异黄酮-7-0-?Η)-葡萄糖苷，小檗碱，巴 马汀，药根碱，23-乙酰泽泻醇B，绿原酸，东莨菪内酯，6,7_二甲氧基香豆素，香蒲新甙，异鼠 李素-3-0-新橙皮苷，异鼠李素，柚皮素，槲皮素，山奈素购自中国食品药品监督管理局;表 小檗碱，黄连碱，泽泻醇A，泽泻醇F，24-乙酰泽泻醇A，6-羟基-7-甲氧基-香豆素购自上海华 壹生物技术有限公司；5种中药材购自上海虹桥中药饮片有限公司。
[0046] 2.供试品溶液的制备
[0047]将符合中药炮制规范的30g黄芪、9g黄连、15g泽泻、15g生蒲黄、15g茵陈称量、配剂 备用，其中黄芪、黄连、泽泻、生蒲黄、茵陈的重量比为1-4:1:1-3:1-3:1-3。将以上药物先浸 泡0.5h，加纯化水同煮(其中生蒲黄包煎），提取2次，每次加水8-12倍，煮沸2次，每次lh，滤 取药液，浓缩生药，加入1倍量的95%酒精，搅拌均匀，常温沉淀24小时，取上清液回收乙醇 并浓缩;再加入5倍量95 %酒精，静置24小时，取上清液回收干净乙醇；加入2倍水（70-80 °C)，搅拌，10-15Γ环境沉淀24小时，吸取上清液，并与药用矫味剂、防腐剂混合均匀后制成 口服溶液，滤除沉淀物，浓缩为20mL溶液(即4.2g中药/mL溶液）。
[0048] 吸取50yL上述溶液，加入950yL甲醇-乙腈（1:1)溶液，4°C冰箱放置4h，离心（4°C， 20，267g，15min)，取上清，进样量为2yL。
[0049] 3.指纹图谱检测条件
[0050] 色谱条件：分析柱为ACQUITY UPLCTM BEH C18column(100mmX2.1mm i.d.，1·7μ m，waters)，柱温45°C，梯度洗脱【Α为0.1%(v/v)的甲酸溶液，Β为含0.1%(v/v)甲酸的乙腈 溶液，梯度变化情况如下 ：0-0.5min，5%B;0.5-4min，5-20%B;4-6min，20-25%B;6-8min， 25-50%B；8-12.5min,50-85%B； 12.5-13.5min,85-100%B； 13.5-15min,100%B；15-15.5min，100-5%B;15.5-17min，5%B】。
[0051 ] 质谱条件：电喷雾(ESI)离子源(Waters Corporation，Mi If ord，MA)，全扫描数据 设置为l〇〇-l〇〇〇Da，间隔时间为0.02s，扫描秒时间为0.3s，毛细管电压为3000V(阳离子模 式)和2800v(阴离子模式），脱溶剂温度为350°C，样品锥电压为35v(阳离子模式)和50v(阴 离子模式），碰撞能量为4eV，提取锥电压为4.0V，源温度为115 °C，锥气体流速为50L/h，脱溶 剂气流速为6001711。0.21^/11^亮氨酸脑啡肽溶液(>=10(^171]1；[11)在线校正。实验结果如图1 和图2所示。实施例2
[0052]本实施例为三黄方制剂指纹图谱的建立与评价 [0053] 1.1.共有峰的确定
[0054]收集10批三黄方制剂，按实施例1中的方法操作，按实施例1的检测条件进行分析。 从检测结果来看，有23个化合物峰是各批供试品共有，因此将这23个化合物峰作为三黄方 制剂的共有化合物峰，从总离子流色谱图中获取这23个化合物峰的提取离子色谱图，如图3 所示。其中巴马汀的峰面积最大，选为参照峰。
[0055] 飞行时间质谱为高分辨质谱，能够测定离子的精确质量，进而根据测量偏差小于 5PPM和同位素拟合度最小的原则计算各共用峰的分子式。
[0056] 如表1所示，按出峰时间顺序排列，23个共有峰的质核比分别为:化合物2(峰l)，m/ z 354;化合物 11(峰2)，m/z 192;化合物 13(峰3)，m/z 192;化合物 14(峰4)，m/z 770;化合 物 15(峰5)，m/z 446;化合物 18(峰6)，m/z 624;化合物25(峰7)，m/z 206;化合物27(峰8)， m/z 320;化合物30(峰9)，m/z 336;化合物31(峰 10)，m/z 338;化合物33(峰ll)，m/z 302; 化合物34(峰12)，m/z 284;化合物35(峰13)，m/z 336;化合物36(峰14)，m/z 352;化合物37 (峰15)，111/2 272;化合物40(峰16)，111/2 316;化合物41(峰17)，111/2 268;化合物42(峰18)， m/z 784;化合物44(峰 19)，m/z 300;化合物51(峰20)，m/z 488;化合物52(峰21)，m/z 490; 化合物54(峰22)，111/2 532;化合物56(峰23)，111/2 514。
[0057]另外有33个化学成分的质核比分别为:化合物l，m/z 354;化合物3，m/z 368;
[0058] 化合物4，111/2 594;化合物5，111/2 516;化合物6，111/2 684;化合物7，111/2 342;
[0059] 化合物8，111/2 164;化合物9，111/2 368;化合物10，111/2 464;化合物12，111/2 464;
[0060] 化合物16，111/2 740;化合物17，111/2 594 ;化合物19，111/2 624;化合物20，111/2 286 ;
[0061 ]化合物21，111/2 322;化合物22，111/2 478 ;化合物23，111/2 284;化合物24，111/2 188 ;
[0062] 化合物26，111/2 316;化合物28，111/2 354 ;化合物29，111/2 338;化合物32，111/2 430 ;
[0063] 化合物38，111/2 334;化合物39，111/2 350 ;化合物43，111/2 504;化合物45，111/2 528 ;
[0064] 化合物46，111/2 826;化合物47，111/2 486;化合物48，111/2 826;化合物49，111/2 488;
[0065] 化合物50，111/2 528;化合物53，111/2 532 ;化合物55，111/2 472。
[0066] 另外，三黄方制剂指纹图谱各共有峰的相对峰面积如表2所示，从表2可以看出不 同批次的供试品共有峰的相对峰面积相似度很高，变异系数很小，说明本方法用于测定三 黄方制剂含量重复性高，结果精准，可用于三黄方制剂成分含量的测定。
[0067] 表1 UPLC-ESI-Q-T0F-MS所测定的三黄方制剂的化学成分

[0070]
[0071] a)Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge,b)Coptis chinensis Franch.,c) Alismao rientale(Sam.)Juz.d)Typha angustifolia L.,e)
[0072] Artemisia capillaries Thunb.；
[0073] Glc:β-D-glucose；Rha:rhamnopyrano；Xy1: xylose
[0074] 表2三黄方制剂指纹图谱各共有峰的相对峰面积

[0077] 实施例3
[0078]本实施例为三黄方制剂入血成分的确定，具体步骤如下：
[0079] 取Wistar大鼠（200±20g)，禁食12h，口服三黄方制剂液，给药后lh用苯巴比妥钠 生理盐水液腹腔注射麻醉（浓度100mg/mL，2 . OmL/kg体重），经腹主动脉采血，离心 (3000rpm，lOmin，4°C)，取血清200yL，加入800yL甲醇-乙腈（1:1)溶液，4°C冰箱放置4h，离 心(4 °C，20，267g，15min)，取上清，进样量为6yL，按拟定的色谱条件检测，获得18个入血成 分的质荷比的提取离子色谱图，实验结果如图4与图5所示。
[0080] 本实施例利用指纹图谱从整体上表征三黄方制剂的化学成分，并通过血清药物化 学方法证明该方法可用于测定18个共有峰均为被吸收入血的成分，可能是三黄方制剂发挥 药效的潜在有效成分。
[0081 ] 实施例4
[0082] 本实施例主要选取7个重要的化学标志性成分并对其同时定量分析用于对本发明 的测定方法做进一步的验证。
[0083] (1)线性范围与检测限、定量限考察：线性与范围研究通过对7个选定化学成分配 制6个不同浓度的工作液进行考察，每个样品被测试2次。检测限与定量限分别为信噪比（S/ N)为3与10的标准样品浓度。结果见表2。
[0084] (2)重复性考察:同一样品被重复分析6次，用于考察方法的重复性。结果见表2。
[0085] (3)精密度考察：日内精密度通过一天内对5个样品每间隔一定时间测定1次，共5 次测定；日间精密度通过连续5天在同一时刻测定同一浓度样品获得。结果见表2。
[0086] (4)准确度考察:通过加样回收率考察。即向3份已知含量的样品中分别加入不同 含量(已知含量的80 %、100 %和120 % )的同种标准品，测定所得样品中目标标准品的含量， 并计算实际检测量与理论添加量的差异。计算公式为：回收率（％ ) = 100 X (检测量-理论加 入量)/理论加入量;并以相对标准差(RSD)表示变异系数。结果见表3。
[0087]通过7个重要的化学标志性成分做为对照对比，进一步验证了本发明的测定方法 准确度高，重复性良好。
[0088]表3 7种标志性化合物的定量分析
[0090]以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限 制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和 替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和 修改，都应涵盖在本发明的范围内。
【主权项】
1. 一种三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:供试品溶液的制备 取黄芪、黄连、泽泻、生蒲黄和茵陈，用水和乙醇进行浓缩处理，得到供试品溶液； 步骤2:供试品溶液的测定 吸取供试品溶液注入UPLC-Q-TOF-MS联用仪，以UPLC-Q-TOF-MS法采用梯度洗脱进行测 定，根据UPLC-Q-TOF-MS联用仪检测结果，获得三黄方制剂的成分。2. 根据权利要求1所述的三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，所述的步骤1具体包 括以下步骤： 步骤a:将黄芪、黄连、泽泻、生蒲黄和茵陈用纯化水浸泡后，再加入纯化水同煮，然后滤 取药液并浓缩处理得到浓缩药液； 步骤b:往步骤a得到的浓缩药液中加入乙醇搅拌均匀后，常温沉淀24小时，然后取上清 液回收乙醇并进行浓缩处理，再次取上清液回收乙醇并进行浓缩处理，得到浓缩液； 步骤c:往步骤b得到的浓缩液中加入水搅拌均匀后，沉淀24小时，然后将上清液进行浓 缩处理，定容得到供试品溶液。3. 根据权利要求1所述的三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，所述的步骤1中黄芪、 黄连、泽泻、生蒲黄和茵陈，按重量份计算，各组分含量分别为:黄芪1-4份;黄连1份;泽泻1-3份;生蒲黄1_3份;茵陈1-3份。4. 根据权利要求1所述的三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，所述步骤2中UPLC色 谱条件为:流动相为0.1 %的甲酸水-0.1 %的甲酸乙腈;流速0.3-0.5mL/min;柱温35-50°C ; 进样量l-5yL。5. 根据权利要求1所述的三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，所述步骤2中UPLC色 谱测定方式为正负离子全扫描，电喷雾（ESI)离子源检测模式；扫描质量范围为100-1000Da〇6. 根据权利要求1所述的三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，所述步骤2中UPLC色 谱的色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱。7. 根据权利要求6所述的三黄方制剂成分检测方法，其特征在于，所述的ACQUITYUPLC BEH C18色谱柱的色谱条件为:流速0.4mL/min，柱温45-50°C，进样量l_5yL。8. -种三黄方制剂指纹图谱构建方法，其特征在于，取不同批次的三黄方制剂供试品 溶液按权利要求1-7任意一项所述的方法进行检测，根据检测结果，标定共有峰，建立三黄 方制剂指纹图谱。9. 根据权利要求8所述的三黄方制剂指纹图谱在三黄方制剂质量控制和分析方法中的 应用。10. 根据权利要求8所述的三黄方制剂指纹图谱在三黄方制剂入血成分的确定分析方 法中的应用。
【文档编号】G01N30/02GK106018577SQ201610305751
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】刘庆丰, 钟明康, 焦正, 王文健, 刘毅, 王斌, 施孝金, 李中东
【申请人】复旦大学附属华山医院