一种双黄连口服液指纹图谱的构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及双黄连口服液多种成分测定。更具体地说，本发明设及能够同时检测 双黄连口服液中多种有效成分W及判断是否存在山银花的方法。
【背景技术】
[0002] 双黄连口服液是由金银花、黄琴及连翅经提取精制而成，具有辛凉解表、清热解毒 功效，适用于风热感冒引起的上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎、病毒性肺炎等细菌和病毒感 染性疾病有一定疗效。双黄连口服液对风热感冒有很好的疗效。但是，由于金银花的价格 越来越高的原因，现在市场出现了使用山银花代替金银花来制备双黄连口服液的现象。由 于金银花和山银花无论从来源和性状还是其化学成分等方面都有很大不同，如果使用山银 花代替金银花制备双黄连口服液的话，对双黄连口服液的疗效会产生极大的影响。
[0003] 金银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或带初开的花。山银花为忍冬科植物灰拉毛 忍冬、红腺忍冬或华南忍冬的干燥花蕾或带初开的花。虽然两者都含有绿原酸，但是其他有 效成分例如芦了、木犀草巧、搬皮素=个化学成分更多分布于金银花中，而在山银花中更多 含有灰拉毛忍冬皂巧己和川续断皂巧己。
[0004] 现有的关于双黄连液体制剂的质量检测方法，都仅仅W绿原酸为依据来进行检 巧。，对于其他成分例如芦了、木犀草巧、搬皮素均没有标准的指纹图谱作为鉴定依据，同时， 是否含有灰拉毛忍冬皂巧己和川续断皂巧己也没有相应的检测方法。
【发明内容】
[0005] 作为各种广泛且细致的研究和实验的结果，本发明的发明人已经发现，在金银花 中含有特定的化学成分芦了、木犀草巧、搬皮素，而山银花中含有川续断皂巧己和灰拉毛 忍冬皂巧己特定成分。基于该种发现，完成了本发明。
[0006] 本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优 点。
[0007] 本发明还有一个目的是通过本发明所述检测方法，构建双黄连口服液的指纹图 谱，同时可W检测出双黄连口服液中是否含有川续断皂巧己成分，为建立双黄连口服液质 量监控体系提供基础。
[000引本发明还有一个目的是通过本发明所述检测方法，提高双黄连口服液的HPLC待 测液制备效率，W便获得更好的检测效果。
[0009] 为了实现根据本发明的该些目的和其它优点，提供了一种双黄连口服液指纹图谱 的构建方法。其中所述双黄连口服液由金银花、黄琴、连翅、庶糖W及香精制成，所述构建方 法包括W下步骤：
[0010] 步骤一、制备供试品溶液，取双黄连口服液1. 0血，精密称定，加入25血50%甲醇 水溶液，45°C水浴5-lOmin后，立即进行离屯、，取上清液；将所述上清液置于50mL圆底烧瓶 中，回流提取化，冷却后称重，用50%甲醇溶液补足失重，超微过滤；得供试品溶液；由于双 黄连口服液在制备过程中添加了庶糖和香精等辅助成分，在供试品溶液制备的过程中要避 免庶糖和香精残留在供试品溶液中，影响后续色谱分析结果。所W，提前将供试品在45°C下 水浴，由于在高温状态下，庶糖极难溶解于甲醇中，通过后续的回流提取得到的供试品溶液 更纯净为后期高效液相色谱检测奠定基础。
[0011] 步骤二、采用高效液相色谱法检测所述双黄连口服液的活性成分，W及检测是否 含有川续断皂巧己；其中色谱条件为：
[0012] 色谱柱；WatersAcquityUPLC肥HRPis;流动相：己膳-0.4%冰醋酸水；梯度洗 脱；0-10min，15 %A-85 %B;2-4min，25 %A-75 %B;4-8min，37 %A-63 %B;8-10min，56 % A-44%B;10-llmin，93%A-7%B;柱温；35°C;检测波长；300nm。理论塔板数按绿原酸峰 计算不低于1000,与相邻峰的分离度大于2. 0。
[0013] 在其中一个实施例中，所述双黄连口服液的活性成分包括；绿原酸、连翅巧、黄琴 巧W及木犀草巧。其中木梶草甘是金银花中区别于山银花的特征成分，所W除了检测双黄 连口服液中绿原酸、连翅巧W及黄琴巧该=种活性成分之外，为了保证其质量检测体系的 精确性，本发明选择木梶草甘作为检测成分之一。
[0014] 在其中一个实施例中，所述色谱条件还包括；ELSD检测器参数；漂移管温度为 80°C，载气流速为2. 5ml/min。
[0015] 在其中一个实施例中，所述超微过滤具体指；使用0. 45ym微孔滤膜过滤。
[0016] 在其中一个实施例中，所述构建方法还包括对照品溶液的制备，具体包括；精密称 取绿原酸、连翅巧、黄琴巧、木犀草W及川续断皂巧己对照品；〇. 889mg、0. 886mg、0. 903mg、 0.92〇111肖化及〇.976111肖化及，^己膳-〇.4%磯酸水溶液为溶剂，于栋色容量瓶中定容至2血， 作为储备液。其他不同质量浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。
[0017] 在其中一个实施例中，双黄连口服液中金银花采用山银花取代，其制备方法如下： 取山银花、连翅W及黄琴的干燥生药，粉碎成细粉过4号筛；加水煎煮比，过滤蒸干，残渣加 70%甲醇超声20min，0. 45ym微孔滤膜过滤。其中所述供试品中含有绿原酸1. 18mg/mU黄 琴巧7. 2mg/mL，连翅巧0. 04mg/mL，木梶草甘0. 013mg/mL，川续断皂巧己3. 51mg/血。
[001引本发明至少包括W下有益效果；本发明通过在双黄连口服液检测过程中对双黄连 口服液的绿原酸、连翅巧、黄琴巧、木犀草等多种成分同时测定，使用现有设备，同一种检测 条件下将指纹图谱和多种活性成分一次性检测完成，同时，在此特定条件下还可W检测出 川续断皂巧己等成分，用于鉴定双黄连口服液的质量。采用简单的缓冲盐溶液直接溶解对 照品和供试品溶液，成功地解决川续断皂巧己对照品高浓度情况下的析出问题，也解决了 供试品溶液长期室温放置的某些成分衰减问题；采用于一定温度下制备供试品溶液，解决 了双黄连口服液中辅料对供试品溶液中活性成分检测的影响。
[0019] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0020] 图1示出了本发明其中一个实施例所述双黄连口服液的高效液相色谱图；
[0021] 图2示出了本发明其中一个实施例所述双黄连口服液的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，W令本领域技术人员参照说明书文 字能够据W实施。
[0023] 应当理解，本文所使用的诸如"具有"、"包含及"包括"术语并不配出一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。
[0024] < 实例 1〉
[0025] 本发明双黄连口服液指纹图谱的构建方法，采用的仪器和材料：
[0026] WatersAcquityUPLCH-Class系统，包括四元累，自动进样器，E：LSD检测器等。 十万分之一天平（梅特勒公司）；EL204万分之一天平（上海精密仪器有限公司）；KQ-250DE 超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）。
[0027] 甲醇与己膳（色谱纯，Fisher公司），己醇，磯酸（分析纯，北京化工厂），双蒸 水。对照品绿原酸（N0;110753-201313)和木犀草巧（N0;111720-201107)购自中国食品 药品检定研究院。山银花材料经鉴定为忍冬科植物灰拉毛忍冬Loniceramacranthoides Hand.-Mazz