一种肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法
【专利摘要】一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，涉及中药制剂质量控制方法。肾康宁胶囊用甲醇超声波提取，以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱方法为梯度洗脱。本发明建立的肾康宁胶囊指纹图谱与相应的对照图谱进行相似度评价，其相似度大于0.9，能有效的检测到肾康宁胶囊处方中除山药、淡附片、茯苓外各药材的特征峰，有利于监控本产品的内在质量，从而保障其在治疗上的有效性。
【专利说明】
-种肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法
技术领域
[0001] 本发明设及中药制剂的质量控制方法，特别是设及一种用高效液相色谱法对肾康 宁胶囊制剂指纹图谱的构建方法。
【背景技术】
[0002] 中药质量控制是中药现代化的重要内容，指纹图谱技术被认为是中药质量控制的 有效手段。现行参照西药的质量控制模式的质量标准不能恰当的反应中药内在的质量。宏 观的鉴别和主要有效成分含量测定结合才是质量控制模式的发展趋势。中药指纹图谱能科 学地反映中药制剂中相关处方药的化学物质的种类，是实现中药真实性、质量可控性和产 品稳定性的可行模式，能更好地反映中药的内在品质。
[0003] 肾康宁胶囊由黄巧、丹参、巧等、泽泻、益母草、淡附片、锁阳、山药八味药制成的纯 中药制剂。具有溫肾，益气，和血，渗湿的作用。用于慢性肾炎，肾气亏损，肾功能不全所引起 的的腰酸、疲乏、畏寒及夜尿增多。现行《中国药典》中肾康宁胶囊的质量控制方法主要包括 鉴别和含量测定两方面。仅仅是选取其中一两种成分状况来说明产品的内在质量，运些控 制方法不足W代表其质量整体，具有一定的局限性。现行的肾康宁胶囊的质量控制标准已 不能真实反映其内在品质及批次之间产品质的一致性。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种肾康宁胶囊指纹图 谱的建立方法，该方法W高效液相色谱法对肾康宁胶囊中的某些指标成分进行实验，获得 指纹图谱，用于评价和控制肾康宁胶囊的质量，W确保证肾康宁胶囊的质量稳定性、一致性 和可控性，从而提高肾康宁胶囊的安全性和有效性。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案。
[0006] -种肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法:取肾康宁胶囊内容物用甲醇超声波提取； W丹参素、毛蕊异黄酬葡萄糖巧、毛蕊异黄酬为对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱， 洗脱过程为梯度洗脱。
[0007] 进一步的，上述肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法:取肾康宁胶囊内容物，研细后用 甲醇超声波提取，滤过，浓缩，取滤液；W丹参素、毛蕊异黄酬葡萄糖巧、毛蕊异黄酬为对照 品，照高效液相色谱法建立指纹图谱，洗脱过程为梯度洗脱。
[000引前述肾康宁胶囊指纹图谱的建立方法如下： (a) 供试品溶液的制备：取肾康宁胶囊内容物0.5~2.Og,充分研细后加入甲醇25~ 100mL，超声处理20~40分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5~20ml，取续滤液为供试品溶液，所 述滤过为采用微孔滤头滤过； (b) 对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品适量、毛蕊异黄酬葡萄糖巧对照品适 量、毛蕊异黄酬对照品适量，加甲醇分别制成每1ml各含0.2mg的对照品溶液； (C)色谱条件为:0DS C18色谱柱，流动相A为乙腊，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗 脱，流速0.5~1.5ml/min，柱溫25~35 °C，检测波长:260~300醒； (d)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法 测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
[0009] 进一步地，前述肾康宁胶囊指纹图谱的方法优选方案如下： (a) 供试品溶液的制备:取肾康宁胶囊内容物Ig,充分研细后加入甲醇50ml，称定重量， 超声处理30分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5ml，取续滤液为供试品溶液； (b) 对照品溶液的配制:精密称取丹参素对照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作为丹参素 对照品溶液;精密称取毛蕊异黄酬葡萄糖巧对照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作为毛蕊异 黄酬葡萄糖巧对照品溶液;精密称取毛蕊异黄酬对照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作为毛 蕊异黄酬对照品溶液； (C)色谱条件为：ODS C18色谱柱，流动相A为乙腊，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗 脱，流速1.0ml/min，柱溫30°C，检测波长:280nm; (d)测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液lOiil，分别注入液相色谱仪，照高效液相色 谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
[0010] 前述方法中所述梯度洗脱的程序W如下体积比浓度配置进行。
[0011] 用前述方法建立的指纹图谱中有12特征峰，其中峰3为丹参素，峰8为毛蕊异黄酬 葡萄糖巧，峰12为毛蕊异黄酬，图谱总长度为71min。
[0012] 上述指纹图谱中所述12个特征共有峰的平均保留时间(min)如下。
[0013] 峰I黄巧药材、泽泻药材、锁阳药材的共有峰，峰2为黄巧药材、泽泻药材共有峰，峰 3、6、9、10、11为丹参专属峰，峰5为益母草专属峰，峰7为益母草、泽泻药材共有峰，峰8、12为 黄巧药材专属峰。方中山药、巧等和淡附片在该色谱条件下基本检不出特征峰。
[0014] 与现有技术相比，本发明的有益效果如下： (1)用本发明所提供的方法建立的肾康宁胶囊HPLC指纹图谱与对照图谱采用《中药色 谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版相似度软件对比评价，相似度均大于0.9，能有效的 表征其质量，有利于全面监控产品的质量。
[0015] (2)指纹图谱注重各特征峰的关联性和指纹图谱的整体面貌特征，标定了 12个共 有峰，反应信息比较完全，保证了产品质量的长期稳定性，疗效的安全性和可靠性。
[0016] (3)本发明具有方便、快捷、稳定、精密度高和重现性好等优点，可准确可靠的控制 肾康宁胶囊的质量。
【附图说明】
[0017] 图1为肾康宁胶囊指纹图谱。
[001引图2为6批次肾康宁胶囊的指纹图谱。
[0019] 图3为丹参药材色谱图。
[0020] 图4为黄巧药材色谱图。
[0021] 图5为益母草药材色谱图。
[0022] 图6为泽泻药材色谱图。
[0023] 图7为锁阳药材色谱图。
【具体实施方式】
[0024]除非另有定义，本发明使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属技术领域 普通技术人员通常理解的含义相同。通常，本发明使用的命名及下述实验方法都是本领域 公知的或常用的。为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，W 下结合具体实施例，对本发明作进一步的说明。
[00巧]仪器:Waters高效液相色谱仪(Waters2695分离单元，Waters2996二极管阵列检测 器，Empower色谱工作站）；ABl04-N万分之一天平(梅特勒-托利多）;AUW2200十万分之一天 平（SHIMADZU岛津）;KQ3200超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）;Mi 1 i-Q超纯水仪： (美国Mi Iipore公司）。
[0026] 试药和试剂：肾康宁胶囊（批号：121101、121102、121103、121104、121201、 121202、130702、130703);甲醇(分析纯）、乙腊(色谱纯）、醋酸(分析纯）。
[0027] 实施例1:肾康宁胶囊基于指纹图谱的质量控制方法。
[0028] 供试品溶液的制备:供试品溶液的制备:取肾康宁胶囊内容物Ig,充分研细后加入 甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5ml为供试品溶液。
[0029] 对照品溶液的配制:精密称取丹参素对照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作为丹参 素对照品溶液;精密称取毛蕊异黄酬葡萄糖巧对照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作为毛蕊 异黄酬葡萄糖巧对照品溶液;精密称取毛蕊异黄酬对照品2mg，加甲醇IOml充分溶解，作为 毛蕊异黄酬对照品溶液。
[0030] 色谱条件为：ODS C18色谱柱，流动相A为乙腊，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度 洗脱，流速l.Oml/min，柱溫25~35°C，检测波长:280nm。
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[0032] 测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液IOiil，分别注入液相色谱仪，照高效液相 色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。
[0033] 实施例2:肾康宁胶囊指纹图谱的建立。
[0034] 采用实施例1所述方法测定共6个批次的肾康宁胶囊（批号：130101、130102、 130301、130302、130401、130501)，得到6批次的肾康宁胶囊指纹图谱。
[0035] 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版相似度软件，对6批次肾康宁 胶囊HPLC图谱的进行相似度评价，肾康宁胶囊指纹图谱相似度研究如下。
[0036] 6个批次肾康宁胶囊指纹图谱相似度计算结果。
[0037] 上表显示，不同批次肾康宁胶囊指纹图谱的相似度大于0.9,说明各批次的样品色 谱模式相似，其化学成分一致性较好。
[0038] 应当说明的是，虽然本发明W较佳实施例掲示如上，然其并非用W限定本发明，任 何熟习此项技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，所作的任何修改、等同替换和改进 等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于肾康宁胶囊内容物用甲醇超 声提取，以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，照高效液相色谱法建立指 纹图谱;高效液相色谱法的色谱条件为:C18色谱柱;流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水 溶液;检测波长260~300nm;柱温为15~35 °C ;流速0.5~1.5ml/min;洗脱方法为梯度洗 脱。2. 根据权利要求1所述的一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于肾 康宁胶囊内容物以甲醇为溶剂超声波提取，滤过，取滤液测试；以丹参素、毛蕊异黄酮葡萄 糖苷、毛蕊异黄酮为对照品，用甲醇溶解，照高效液相色谱法建立指纹图谱，其中梯度洗脱 的时间程序及其流动相的体积变化按下表设置进行：3. 根据权利要求2所述的一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于： (a) 供试品溶液的制备：取肾康宁胶囊内容物0.5~2g，充分研细后加入甲醇25~ 100ml，超声处理20~40分钟，取出放冷，滤过，滤液浓缩至5~20ml，用孔径为0.45μηι的滤头 滤过为供试品溶液； (b) 对照品溶液的配制：精密称取丹参素对照品适量、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适 量、毛蕊异黄酮对照品适量，加甲醇分别制成每lml各含0.2mg的对照品溶液； (c) 色谱条件:C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速 0.5~1.51111/1^11，柱温25~35°(：，检测波长：28〇11111; (d) 测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液5~15μ1，分别注入液相色谱仪，照高效液 相色谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。4. 根据权利要求3所述的一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于： (a) 供试品溶液的制备:精密称取充分研细后的肾康宁胶囊内容物lg，加入甲醇50ml， 超声处理30分钟，取出放冷，滤过，浓缩至5ml，取续滤液为供试品溶液； (b) 对照品溶液的配制:精密称取丹参素对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为丹参素 对照品溶液;精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛蕊异 黄酮葡萄糖苷对照品溶液;精密称取毛蕊异黄酮对照品2mg，加甲醇10ml充分溶解，作为毛 蕊异黄酮对照品溶液； (c) 色谱条件:C18色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为1%冰醋酸水溶液，梯度洗脱，流速 1 · Oml/min，柱温30°C，检测波长：280nm; (d) 测定:精密吸取供试品溶液、对照品溶液1 ΟμL，分别注入液相色谱仪，照高效液相色 谱法测定，得到肾康宁胶囊的指纹图谱。5. 根据权利要求3或4所述的一种肾康宁胶囊HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于 指纹图谱中所述的12个特征共有峰的与峰3(丹参素)相对保留时间如下： 峰1 :0.52;峰2 :0.76 ;峰3 :1.00;峰4 1.23;峰5 :1.55;峰6 :1.57;峰7 :2.23;峰8 :2.81;峰9 :3.30 ;峰10 :3.64;峰11 :3.75;峰12 :3.81 。
【文档编号】G01N30/02GK105954435SQ201610573178
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年7月21日
【发明人】周朝忠, 肖军平, 吴永忠, 杜剑松, 习锦山, 刘厚权, 夏淑英
【申请人】江西普正制药有限公司