一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法
【专利摘要】本发明涉及一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法。是将连翘花干燥，粉碎，以含水甲醇或含水乙醇为溶剂，采用微波辅助提取法制备样品溶液；采用高效液相色谱法进行化学成分的指纹图谱分析，以乙腈为流动相A，酸水为流动相B，梯度洗脱；本发明采用优化的微波辅助提取方法制备样品，能在40min内实现20种以上化学成分的有效分离。本方法是一种快速、高效分析连翘花化学成分指纹图谱的新方法，有利于连翘花化学成分分析及质量控制水平的提高。
【专利说明】
一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种天然产物质量分析技术领域，具体涉及一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法。
【背景技术】
[0002]连翅(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)为木庫科(Oleaceae)连翅属多年生落叶灌木。连翘的传统用药部位为果实，具有清热解毒，消肿散结，疏散风热之功效，用于痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒、风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、神魂发斑、热淋涩痛等症。连翘作为重要的中药资源，在临床和中成药生产中需求量大。然而由于无序采收和缺乏人工培育，连翘的产量已不能满足日益增长的需要。寻找新的可替代资源是解决供需矛盾的途径之一。药用植物的不同部位可能会具有相似的生物活性和化学成分，因此连翘花也是潜在的药物资源，值得研究开发。连翘花初春开放，并且存在花柱异型，授粉和结果率低，因此加强对连翘花化学成分的研究有利于促进其开发利用。目前已有研究将连翘花开发为连翘花茶。但关于连翘花化学成分的提取和测定缺乏研究。微波辅助提取作为一种现代技术，具有快速、高效、避免成分降解、节能环保等优点。在中药有效成分的提取、质量控制等方面具有广阔的应用前景。化学成分指纹图谱能全面反映中药的内在质量，有利于中药质量控制水平的提高。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法，该方法能在很短的时间内将连翘花中的多种成分提取出来并完成化学成分指纹图谱分析。
[0004]—种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法，包括以下步骤:
[0005]I)将新采集的连翘花晒干或烘干，粉碎，过60?120目筛，得到连翘花粉末。
[0006]2)以浓度为30 %?90 %甲醇或30 %-80 %乙醇水溶液作为溶剂，将连翘花粉末与所述溶剂按照质量体积比1:10?40混合置于微波提取器中，设定微波功率400?1000W，温度50?70°C，提取I?lOmin，取出，放至室温，用所述溶剂补足至提取前连翘花粉末与溶剂的重量(即和提取前称定的重量一致)，摇匀，取续滤液，作为分析用样品溶液。
[0007]3)采用反相高效液相色谱法进行图谱分析:色谱条件:色谱柱为C18键合硅胶柱，所述C18键合硅胶色谱柱的长度为250mm，内径4.6mm，填料的粒径为5μπι;柱温为20?35°C;流速为1.0OmL/min;进样体积为10?20yL;检测波长为270?280nm;梯度洗脱40min，梯度洗脱条件如下:
[0008]Omin时，流动相A:流动相B = 13:87(体积比)
[0009]20min时，流动相A:流动相B = 15:85(体积比)
[0010]30min时，流动相A:流动相B = 30:70(体积比)
[0011]38min时，流动相A:流动相B = 40:60(体积比)
[0012]40min时，流动相A:流动相B = 100:0 (体积比)
[0013]所述流动相A为乙腈，所述流动相B为浓度0.05?0.1 % (体积比)的甲酸水溶液、浓度0.03?0.06% (体积比)的磷酸水溶液或浓度0.10?0.50% (体积比)的醋酸水溶液。
[0014]发明首次公开了一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法，该方法采用优化的微波辅助提取法制备样品，能在短时间内完成;优化的高效液相色谱法能在40min内实现20种以上化学成分的分离。因此本方法是一种快速、高效分析连翘花化学成分指纹图谱的新方法，有利于连翘花化学成分分析及质量控制水平的提高。
【附图说明】
[0015]图1不同连翘花样品的高效液相色谱指纹图谱。
[0016]由图1可以看出，在40min内可以对连翘花中化学成分进行有效分离，该发明建立的分析方法适合用于连翘花样品的化学成分分析和指纹图谱建立，分析时间短，方法稳定性好。5份样品的图谱中发现20个共有色谱峰，各色谱峰峰面积的大小及相互间的比例反应了不同连翘花样品的质量差异。相比测定一个或几个化学成分的质量分析方法，该化学成分图谱更能全面反应连翘花的质量情况。
【具体实施方式】
[0017](I)将新采集的连翘花晒干或烘干，粉碎，过80目筛得到连翘花粉末。
[0018](2)精密称取连翘花粉末Ig置具塞圆底烧瓶中，加入30mL浓度为70%甲醇水溶液，具塞，精密称定。置微波辅助提取器中，设定微波功率400W，温度600C，提取3min，取出，放至室温，精密称定，用浓度为70 %的甲醇水溶液补足至提取前称定的连翘花粉末与甲醇溶液的总重量，摇匀，用0.45μπι微孔滤膜滤过(也可用滤纸滤过)，续滤液作为分析用样品溶液。
[0019](3)采用反相高效液相色谱法进行分析，色谱条件:色谱柱为C18键合硅胶柱(250mm X 4.6mm，5μπι)，流动相A为乙腈，流动相B为含0.05 %甲酸(体积比)的水溶液，进样体积为10此，流速为1.0011117111；[11，检测波长为28011111，柱温30<€。梯度洗脱40min，条件如下:
[0020]Omin时，流动相A:流动相B = 13:87(体积比)
[0021 ] 20min时，流动相A:流动相B = 15:85(体积比)
[0022]30min时，流动相A:流动相B = 30:70(体积比)
[0023]38min时，流动相A:流动相B = 40:60(体积比)
[0024]40min时，流动相A:流动相B = 100:0(体积比)
[0025](4)结果见图1。图1为分析得到的五个连翘花样品的高效液相色谱指纹图谱。由结果可以看出，在40min内可以对连翘花中化学成分进行有效分离。5份样品的图谱中发现20个共有色谱峰，各色谱峰峰面积的大小及相互间的比例反应了不同连翘花样品的质量差异。相比测定一个或几个化学成分的质量分析方法，该化学成分图谱更能全面反应连翘花的质量情况。
[0026]说明该方法能对连翘花中的化学成分进行有效分离，适合用于建立连翘花的化学指纹图谱。
【主权项】
1.一种连翘花化学成分指纹图谱的快速分析方法，其特征在于步骤如下: 1)将新采集的连翘花晒干或烘干，粉碎，过60?120目筛，得到连翘花粉末； 2)以浓度为30%?90%甲醇或30%-80%乙醇水溶液作为溶剂，将连翘花粉末与所述溶剂按照质量体积比1:10?40混合置于微波提取器中，设定微波功率400?1000W，温度50?70°C，提取I?lOmin，取出，放至室温；用所述溶剂补足至提取前连翘花粉末与溶剂的重量，摇匀，取续滤液，作为分析用样品溶液； 3)采用反相高效液相色谱法进行图谱分析:色谱条件:色谱柱为C18键合硅胶柱，所述C18键合硅胶色谱柱的长度为250mm，内径4.6mm，填料的粒径为5μπι;柱温为20?35°C;流速为1.0OmL/min;进样体积为10?20yL;检测波长为270?280nm;梯度洗脱40min，梯度洗脱条件如下: Omin时，流动相A:流动相B= 13: 87体积比 20min时，流动相A:流动相B= 15: 85体积比 30min时，流动相A:流动相B = 30: 70体积比 38min时，流动相A:流动相B = 40: 60体积比 40min时，流动相A:流动相B= 100: O体积比 所述流动相A为乙腈，所述流动相B为浓度0.05?0.1 %的甲酸水溶液、浓度0.03?.0.06%的磷酸水溶液或浓度0.10?0.50%的醋酸水溶液。
【文档编号】G01N30/89GK106053704SQ201610305487
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月9日
【发明人】房信胜, 王建华
【申请人】山东农业大学