.的干燥花蕾。
[002引本发明所述双黄连口服液指纹图谱的构建方法。其中所述双黄连口服液由金银 花、黄琴、连翅、庶糖W及香精制成，所述构建方法包括W下步骤：
[0029] 步骤一、制备供试品溶液，取市售双黄连口服液1. 0血，精密称定，加入25血50% 甲醇水溶液，45°C水浴5-lOmin后，立即进行离屯、，其中离屯、的温度例如控制在30°C-40°C 之间；之后取上清液；将所述上清液置于50mL圆底烧瓶中，回流提取化，冷却后称重，用 50%甲醇溶液补足失重，使用0. 45ym微孔滤膜过滤。得供试品溶液；
[0030] 对照品溶液的制备，具体包括；精密称取绿原酸、连翅巧、黄琴巧、木犀草W及川续 断皂巧己对照品；〇. 889mg、0. 886mg、0. 903mg、0. 920mgW及 0. 976mg，W己膳-0. 4%磯酸水 溶液为溶剂，于栋色容量瓶中定容至2mU作为储备液。其他不同质量浓度的对照品溶液由 储备液稀释得到。
[0031] 步骤二、采用高效液相色谱法检测所述双黄连口服液的活性成分，W及检测是否 含有川续断皂巧己；其中色谱条件为：
[0032] 色谱柱；WatersAcquityUPLC肥HRPis;流动相：己膳-0.4%冰醋酸水；梯度洗 脱；0-10min，15 %A-85 %B;2-4min，25 %A-75 %B;4-8min，37 %A-63 %B;8-10min，56 % A-44%B;10-llmin，93%A-7%B;柱温；35°C;检测波长；300nm。理论塔板数按绿原酸峰 计算不低于1000,与相邻峰的分离度大于2. 0。，所述色谱条件还包括；ELSD检测器参数；漂 移管温度为80°C，载气流速为2. 5ml/min。
[0033] 如图1所示，所述双黄连口服液的活性成分包括；绿原酸1、连翅巧3、黄琴巧4 W及木梶草甘2,其中绿原酸1.Img/mL、连翅巧0. 5mg/mL、黄琴巧8. 2mg/mLW及木梶草甘 0.002mg/mL。
[0034] 实施例2
[0035] 供试品溶液的制备，取山银花、连翅W及黄琴的干燥生药，粉碎成细粉过4号筛； 加水煎煮比，过滤蒸干，残渣加70 %甲醇超声20min，0.45ym微孔滤膜过滤。其中所述供 试品中含有绿原酸1. 18mg/mU黄琴巧7. 2mg/mL，连翅巧0. 04111径/111以木梶草甘0. 013mg/mL， 川续断皂巧己3. 51mg/mL。
[0036] 对照品溶液的制备，具体包括；精密称取绿原酸、连翅巧、黄琴巧、木犀草W及川续 断皂巧己对照品；〇. 889mg、0. 886mg、0. 903mg、0. 920mgW及 0. 976mg，W己膳-0. 4%磯酸水 溶液为溶剂，于栋色容量瓶中定容至2mU作为储备液。其他不同质量浓度的对照品溶液由 储备液稀释得到。
[0037] 步骤二、采用高效液相色谱法检测所述双黄连口服液的活性成分，W及检测是否 含有川续断皂巧己；得图2,其中活性成分为；绿原酸1、连翅巧3、黄琴巧4、木犀草巧2和川 续断皂巧己5其中色谱条件为：
[003引 色谱柱；WatersAcquityUPLC肥HRPis;流动相：己膳-0. 4%冰醋酸水；梯度洗 脱；0-10min，15 %A-85 %B;2-4min，25 %A-75 %B;4-8min，37 %A-63 %B;8-10min，56 % A-44%B;10-llmin，93%A-7%B;柱温；35°C;检测波长；300nm。理论塔板数按绿原酸峰 计算不低于1000,与相邻峰的分离度大于2. 0。，所述色谱条件还包括；ELSD检测器参数；漂 移管温度为80°C，载气流速为2. 5ml/min。
[0039] 标准曲线的建立
[0040] a,线性关系、检测限（LOD)和定量限化OQ)的考察
[0041] 分别精密吸取对照品储备液，用流动相逐级稀释成一系列不同浓度的对照品溶 液，分别进样3 测定（n= 3)。绿原酸、连翅巧、黄琴巧、木犀草巧和川续断皂巧己W浓 度X为横坐标，平均峰面积Y为纵坐标进行线性回归，考察线性关系。由表1可知，各回归 方程呈良好的线性关系。
[0042] 表1绿原酸、连翅巧、黄琴巧、木犀草巧和川续断皂巧己的标准曲线、相关系数、线 性范围测定结果
[0043]
【主权项】
1. 一种双黄连口服液指纹图谱的构建方法，其中所述双黄连口服液由金银花、黄芩、连 翘、蔗糖以及香精制成，所述构建方法包括以下步骤： 步骤一、制备供试品溶液，取双黄连口服液1.0 mL，精密称定，加入25mL50 %甲醇水溶 液，45°C水浴5-10min后，立即进行离心，取上清液；将所述上清液置于50mL圆底烧瓶中，回 流提取2h，冷却后称重，用50%甲醇溶液补足失重，超微过滤；得供试品溶液； 步骤二、采用高效液相色谱法检测所述双黄连口服液的活性成分，以及检测是否含有 川续断皂苷乙；其中色谱条件为： 色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH RP18;流动相：乙腈-0.4%冰醋酸水；梯度洗脱：O-IOmin, 15%A-85%B；2-4min,25%A-75%B；4-8min,37%A-63%B；8-10min,56% A-44% B ;10-llmin，93% A-7% B ;柱温：35°C ;检测波长：300nm。
2. 如权利要求I所述的双黄连口服液指纹图谱的构建方法，其中所述双黄连口服液的 活性成分包括：绿原酸、连翘苷、黄芩苷以及木犀草苷。
3. 如权利要求1所述的双黄连口服液指纹图谱的构建方法，其中所述色谱条件还包 括：ELSD检测器参数：漂移管温度为80°C，载气流速为2. 5ml/min。
4. 如权利要求1所述的双黄连口服液指纹图谱的构建方法，其中所述超微过滤具体 指：使用〇. 45ym微孔滤膜过滤。
5. 如权利要求1所述的双黄连口服液指纹图谱的构建方法，其中所述构建方法还包括 对照品溶液的制备，具体包括：精密称取绿原酸、连翘苷、黄芩苷、木犀草以及川续断皂苷乙 对照品：〇? 889mg、0. 886mg、0. 903mg、0. 920mg以及0? 976mg以及，以乙腈-0? 4%磷酸水溶液 为溶剂，于棕色容量瓶中定容至2mL，作为储备液。其他不同质量浓度的对照品溶液由储备 液稀释得到。
【专利摘要】本发明提供一种双黄连口服液指纹图谱的构建方法，其中所述双黄连口服液由金银花、黄芩、连翘、蔗糖以及香精制成，所述构建方法包括制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测所述双黄连口服液的活性成分，以及检测是否含有川续断皂苷乙；其中色谱条件为：色谱柱：Waters Acquitv UPLC BEH RP18；流动相：乙腈-0.4％冰醋酸水；梯度洗脱：0-10min，15％A-85％B；2-4min，25％A-75％B；4-8min，37％A-63％B；8-10min，56％A-44％B；10-11min，93％A-7％B；柱温：35℃；检测波长：300nm。本发明构建双黄连口服液的指纹图谱，同时可以检测出双黄连口服液中是否含有川续断皂苷乙成分，为建立双黄连口服液质量监控体系提供基础。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104880528
【申请号】CN201510299374
【发明人】李晓甜, 张轶, 肖文雅
【申请人】新乡医学院
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月3日