一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及检测领域，具体的说，本发明设及一种玛咖中苄基芥子油巧的含量测 定方法。
【背景技术】
[0002] 玛咖（L巧idiumm巧eniiWalp)为十字花科独行菜属植物，原产于安第斯山脉， 我国云贵高原和青藏高原均有引种。具有提高生育力、改善性功能、抗疲劳和增强免疫等功 效[1]，近年来研究发现，其主要活性成分为玛咖酷胺、玛咖締和芥子油巧等巧]。2011年玛 咖粉被卫生部列为新资源食品巧]，具有广泛的开发市场和应用前景。
[0003] 芥子油巧又称为硫代葡萄糖巧，是仅在十字花科植物中发现的一种次生代谢产 物，玛咖药材中芥子油巧含量约为1%，其中苄基芥子油巧为其主要活性成分及其特征物 质。目现有的方法是利用硫酸醋酶（sul化taseenzyme)将苄基芥子油巧催化水解为苄基 脱硫硫代葡萄糖巧值esul化glucotropaeolin)，用HPLC进行分析定量，但是该方法的标准 品存在问题，苄基脱硫硫代葡萄糖巧无法购买，目前只能采用丙締基芥子油巧同步水解，定 量分析后系数换算来解决标准品问题，不仅没有针对性，而且检测过程复杂繁琐，增加了方 法的不确定度。
[0004] 本方法利用葡糖硫巧酶（thioglucosidase)将苄基芥子油巧催化水解为异硫氯 酸节醋炬ITC)，利用BITC简便的HPLC分析条件，建立苄基芥子油巧快速定量分析检测方 法。方法的原理见下式：
[0005]
【主权项】
1. 一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法，其特征在于，该方法是以苄基芥子油苷 为指标成分，通过对其定量测定来进行的。
2. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述定量是通过使用高效液相 色谱法来进行的。
3. 根据权利要求2所述的含量测定方法，其特征在于， a. 色谱条件的建立 色谱柱：C18 柱（4. 6 X 250mm, 5 y m); 流动相：甲醇-水（梯度洗脱：〇-5min，3 % -8 %甲醇；5-9min，8 % -48 %甲醇； 9-23min，48% -62% ;23-25min，62% -95% ) ;25-28min，95% 甲醇； 进样量为10 U L，检测波长302nm，流速为1.0 mL/min，流速为1.0 mL/min，柱温40°C ; b. 葡糖硫苷酶溶液配制 精密称取Img葡糖硫苷酶，置于IOmL容量瓶内，加蒸馏水溶解，定容，配制成每毫升含 0? 33UN的酶活力溶液； c. 标准曲线的绘制 精确称取BITC标准品250mg，用甲醇定容至25mL容量瓶内，配制成lOmg/mL的标 准品溶液；分别移取20 y L、50 y L、100 y L、150 y L、200 y L，分别用甲醇定容至IOmL容 量瓶内，制成浓度为 〇? 〇2mg/mL、0. 05mg/mL、0. 10mg/mL、0. 15mg/mL、0. 20mg/mL 的标准品 溶液，用以制作标准曲线；在a项下色谱条件，分别进样10 y L，以对照品质量浓度X(g/ L)为横坐标，对照品峰面积Y为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，所得回归方程Y = 4886. 3X+6. 4890 (R2 = 0. 9994, n = 5)，表明 BITC 在 0 ~0. 20mg/mL 范围内有较好的线性 关系； d. 供试品溶液 精密称取IOOmg样品，置于IOmL容量瓶内，加5mL 47. 5%乙醇/水溶液（V/V)，50°C水 浴超声1小时，样品放置室温后，用47. 5%乙醇/水溶液（V/V)定容至IOmL ;精密量取上述 溶液4mL，置于IOmL的顶空瓶内，添加ImL的b项中的酶溶液，摇匀后，加盖密闭。置于45°C 的恒温水浴锅内酶解30min，取出转移至IOmL容量瓶内，用47. 5%乙醇/水溶液（V/V)定 容至10mL，经0. 22 y m微孔滤膜过滤后，用于HPLC检测； e. 加样回收率试验 精密称取9份已知含量的同一批次供试品溶液，分别加入高、中、低浓度的对照品溶 液，按照d项方法，每个浓度配制三份，按照d项下方法配制供试品溶液，进样测定峰面积， BITC的平均回收率为99%，RSD为1. 3% ; f. 精密度试验 取BITC对照品溶液10 y L，在a项色谱条件下连续进样五次，结果色谱峰面积的RSD为 0. 8%，表明仪器的精密度良好； g. 稳定性试验 取供试品溶液，在a项色谱条件下分别在0、2、4、6、8、IOh进样，进样量为10 y L，结果 BITC的RSD为1. 06%，表明供试品溶液在室温下IOh内稳定； h. 重复性实验 按照a项方法平行制备6份供试品，各吸取10 y L进样重复进样分析测定峰面积，BITC 的RSD为0. 7 %，表明方法重复性良好。
【专利摘要】本发明涉及一种玛咖中苄基芥子油苷的含量测定方法，该方法是以苄基芥子油苷为指标成分，通过对其定量测定来进行的。芥子油苷及其分解产物异硫氰酸苄酯具有在提高生育力、抗肿瘤等功效，因此对玛咖中芥子油苷含量测定尤为重要，本实验采用方法简便易行，结果可靠。可作为玛咖中芥子油苷含量检测新方法推广应用。
【IPC分类】G01N30-88, G01N30-06
【公开号】CN104880526
【申请号】CN201510268665
【发明人】斯聪聪, 孙振蛟, 胡晓雁, 殷红军, 余斌, 余梅燕
【申请人】宁波立华植物提取技术有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月25日