采用sle法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及动物饲料的检测领域，特别是一种采用SLE法分离猪尿中的莱克多己 胺的方法。
【背景技术】
[0002] 样品前处理是分析检测过程的关键环节，是浓缩被测定的痕量组分，提高方法的 灵敏度，及除去对分析系统有干扰的物质的重要手段。萃取是从样品集体中分离出目标化 合物的一项技术，是样品预处理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是应用最广泛的 样品制备方法之一，但是，传统的液液萃取的操作繁琐费时、有机溶剂消耗量大，而且容易 出现乳化现象的缺陷，使得在实际应用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科学家提出了在传统的液液萃取的基础上，利用一种具有吸附性和较大 的比表面积的惰性多空填料作为介质，建立的一种新型高效样品的制备方法-介质液液萃 取（suppo;rtedliquidextraction简称SLE)，SLE萃取技术就是选用一种多孔性惰性材 料-锻烧娃藻±作为介质，取代分液漏斗，增大了两相接触时的作用面积，实现高效、快速 的萃取过程。
[0004] 当水溶液样品加样到固定的聚丙締注射管中的锻烧娃藻±上后，经过一定时间 (一般分为几分钟），水相溶液W-层薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，将有机溶剂 从柱管上端加入，当互不相溶的两相在娃藻±表面接触的同时萃取立即发生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情况下，可W施加较小的压力，而水相保留在介质中。盛接的流出 液直接将溶剂吹干，复溶后，即可用于下一步分析检测。
[0005] 农业部1025号公告-11-2008公开了猪尿中0 -受体激动剂多残留检测，其采用 酶解后异丙醇-己酸己醋进行萃取，并通过内标法可W得到相关的检测结果，但是在实际 应用中，采用酶解后然后在采用传统方法萃取后通过色谱检测有时无法检出残留项。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的采用SLE法分离猪尿中的莱 克多己胺的方法。
[0007] 本发明的技术方案为：一种采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法，包括W 下步骤：
[000引步骤1 ;样品预处理；收集猪尿，首先加入0 -盐酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶 进行酶解，每毫升的尿液中加入0 -盐酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶12y以酶解结束后 加入S氯己酸沉淀猪尿中的蛋白质，加入4倍猪尿体积的化范围为8. 0~10. 0的氨水-氯 化锭缓冲液，縱祸混合器混合后离屯、；取离屯、后的上清液；
[0009] 步骤2 ;将上清液加入到SLE柱后，静置2~4分钟；
[0010] 步骤3 ;采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多己 胺的洗脱液；
[0011] 其中，所述的二元洗脱剂为异丙醇和二氧六环的混合物，其中异丙醇和二氧六环 的重量比为0.8~1:1。
[0012] 在上述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法中，所述的猪尿为1ml，缓冲 溶液为4ml，步骤2中所取的上清液为0. 5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为 0. 5ml。
[0013] 在上述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法中，所述的步骤3中，每次洗 脱时所用的洗脱剂为0. 5ml。
[0014] 在上述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法中，所述的=氯己酸和猪尿 的质量比为1:98~100。
[0015] 在上述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法中，所述的步骤1中，縱祸混 合器混合处理的时间为0. 5~1. 5分钟。
[0016] 在上述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法中，所述的步骤1中，所述的 离屯、处理的具体操作为；将经混合处理的溶液在离屯、机中W9000~11000转/分钟的速度 离屯、0. 5~1. 5分钟。
[0017] 在上述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺的方法中，所述的SLE柱为奥秘山 东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱。
[001引本发明的有益效果如下；
[0019] 采用SLE法分离猪尿中的莱克多己胺，先进行酶解使蛋白质和莱克多己胺分离， 采用缓冲溶液进行混合，然后通过SLE柱分离出莱克多己胺，萃取剂为异丙醇和二氧六环， 本发明的分离效率好、分离时间短，有利于后期的测量。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0021] 实施例1
[002引步骤1 ;取猪尿Ig，首先加入12化0 -盐酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶进行酶 解，酶解时间为3-4小时，酶解结束后加入立氯己酸沉淀猪尿中的蛋白质，加入4ml的化为 9的氨水-氯化锭缓冲液，縱祸混合器混合后离屯、；取离屯、后的上清液0. 5ml 氯己酸和 猪尿的质量比为1:99。
[0023] 步骤2 ;将上清液加入到SLE柱后，静置3分钟；
[0024] 步骤3;采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有莱克多己胺的 洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0. 5ml，所述的二元洗脱剂为异丙醇和二氧六环的混合物，异 丙醇和二氧六环的重量比为1:1。
[0025] 实施例2
[0026] 步骤1;取猪尿Ig，首先加入12yL0 -盐酸葡萄糖醒巧酶/芳基硫酸醋酶进行酶 解，酶解时间为3-4小时，酶解结束后加入互氯己酸沉淀猪尿中的蛋白质，加入4ml的化为 9的氨水-氯化锭缓冲液，縱祸混合器混合后离屯、；取离屯、后的上清液0. 5ml 氯己酸和 猪尿的质量比为1:100。
[0027] 步骤2 ;将上清液加入到SLE柱后，静置3分钟；
[002引步骤3 ;采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有莱克多己胺的 洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0. 5ml，所述的二元洗脱剂为异丙醇和二氧六环的混合物，异 丙醇和二氧六环的重量比为0. 8:1。
[0029] 标准样的制备
[0030] 称取莱克多己胺标准品（纯度>99 %)O.OlOOg，置于1000ml容量瓶中，用重量比 为1:1的异丙醇和二氧六环的混合物的溶剂溶解定容，其浓度为10yg/ml;
[003U 取上述浓度为10yg/ml的莱克多己胺溶液于1000ml容量瓶中，配制成为2yg/L、 5yg/L、8yg/L、10yg/L、20yg/L的标准样。
[003引对比例1
[0033] 与实施例1大体相同，不同的地方在于，步骤3中，洗脱剂为异丙醇与己酸己醋的 混合物，其体积比为40:60。
[0034]分析；
[0035] 检测方法具体为；
[0036] 仪器；LC-2010型高效液相色谱仪（日本岛津）
[0037]色谱柱；C18 柱，150mm*3. 9mmTD
[003引 柱温；室温
[0039]流动相巧酬；己膳=100:12 ;
[0040] 检测器；UV检测器；
[0041]检测波长；226nm;
[0042] 进样量；25化
[00创 W2yg/L、5yg/L、8yg/L、10yg/L、20yg/L的标准样进行测试，回归方程为Y= 12715X+1. 1，R2= 0. 9994,X为待测物浓度，Y为峰面积。
[0044] 取同一份猪尿化g，按照实施例1的方法制备10份萃取样品A标号为A1-A10,按 照对比例1的方法制备10份萃取样品B标号为B1-B10。
[0045] 按照上述检测方法进样检测，得到如下的检测结果：
[0046]
【主权项】
1. 一种采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1 :样品预处理；收集猪尿，首先加入0 _盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶进行 酶解，每毫升的尿液中加入0 -盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12 y L，酶解结束后加入 三氯乙酸沉淀猪尿中的蛋白质，加入4倍猪尿体积的Ph范围为8. O~10.0 的氨水-氯化 铵缓冲液，漩涡混合器混合后离心；取离心后的上清液； 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置2~4分钟； 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的 洗脱液； 其中，所述的二元洗脱剂为异丙醇和二氧六环的混合物，其中异丙醇和二氧六环的重 量比为0.8~1:1。
2. 根据权利要求1所述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的猪尿为lml，缓冲溶液为4ml，步骤2中所取的上清液为0. 5ml。
3. 根据权利要求2所述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特征在于，， 所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0. 5ml。
4. 根据权利要求2所述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的三氯乙酸和猪尿的质量比为1:98~100。
5. 根据权利要求1所述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的步骤1中，漩涡混合器混合处理的时间为0. 5~1. 5分钟。
6. 根据权利要求5所述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的步骤1中，所述的离心处理的具体操作为：将经混合处理的溶液在离心机中以9000~ 11000转/分钟的速度离心0. 5~1. 5分钟。
7. 根据权利要求1至6任一所述的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，其特 征在于，所述的SLE柱为奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱。
【专利摘要】本发明公开了一种采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法，包括以下步骤：步骤1：样品预处理；收集猪尿，首先加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶进行酶解，每毫升的尿液中加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶12μL；取离心后的上清液；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的洗脱液；其中，所述的二元洗脱剂为异丙醇和二氧六环的混合物，其中异丙醇和二氧六环的重量比为0.5～1:1。本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的采用SLE法分离猪尿中的莱克多巴胺的方法。
【IPC分类】G01N30-06
【公开号】CN104880519
【申请号】CN201510243114
【发明人】陈学松, 赖秀梅, 温志芳, 陈启钊, 郭振旺, 吴岚
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月12日