高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及动物组织和排泄物的检测领域，特别是一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法。
【背景技术】
[0002]样品前处理是分析检测过程的关键环节，是浓缩被测定的痕量组分，提高方法的灵敏度，及除去对分析系统有干扰的物质的重要手段。萃取是从样品集体中分离出目标化合物的一项技术，是样品预处理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是应用最广泛的样品制备方法之一，但是，传统的液液萃取的操作繁琐费时、有机溶剂消耗量大，而且容易出现乳化现象的缺陷，使得在实际应用中具有一定的局限性。
[0003]1998年，科学家提出了在传统的液液萃取的基础上，利用一种具有吸附性和较大的比表面积的惰性多空填料作为介质，建立的一种新型高效样品的制备方法-介质液液萃取(supported liquid extract1n简称SLE)，SLE萃取技术就是选用一种多孔性惰性材料-煅烧硅藻土作为介质，取代分液漏斗，增大了两相接触时的作用面积，实现高效、快速的萃取过程。
[0004]当水溶液样品加样到固定的聚丙烯注射管中的煅烧硅藻土上后，经过一定时间(一般分为几分钟)，水相溶液以一层薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，将有机溶剂从柱管上端加入，当互不相溶的两相在硅藻土表面接触的同时萃取立即发生，最后萃取液在重力作用下流出，必要情况下，可以施加较小的压力，而水相保留在介质中。盛接的流出液直接将溶剂吹干，复溶后，即可用于下一步分析检测。
[0005]农业部1063号公告-6-2008《饲料中13种β —受体激动剂的检测液相色谱——串联质谱法》采用阳离子型交换柱来提取饲料中的β —受体激动剂，如何降低上述检测的用时，提高上述检测的准确度是本领域技术人员需要思考的问题。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法。
[0007]本发明的技术方案为:一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，包括以下步骤:
[0008]步骤1:取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理0.5?1.5分钟后再经过离心处理，将经混合处理的溶液在离心机中以9000?11000转/分钟的速度离心0.5?1.5分钟，取离心处理后的上清液少量；
[0009]步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置2?4分钟；
[0010]步骤3:采用三元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；
[0011]步骤4:采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，并分别绘制莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的不同浓度标准溶液的标准回归曲线，所述的高效液相色谱法的具体参数为:
[0012]色谱柱:C18柱，150mm*3.9mmID
[0013]柱温:室温
[0014]流动相:0.05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05%磷酸水溶液和乙腈的体积比为100:12 ；
[0015]检测器:UV检测器；
[0016]检测波长:217nm;
[0017]其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下重量份组成:
[0018]正丁醇2?4份；
[0019]正己烷2?4份；
[0020]乙酸甲酯2?8份；
[0021]所述的缓冲溶液为:Ph范围为6.5?7.0的磷酸缓冲液。
[0022]在上述的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法中，所述的饲料样品为lg，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0.5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0.5ml。
[0023]在上述的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法中，所述的SLE柱为奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱，液相色谱仪为LC-2010型高效液相色谱仪(日本岛津)。
[0024]本发明的有益效果如下:
[0025]采用SLE法分离饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇，采用三元萃取剂可以有效的提高多组分萃取对象的萃取效率，结合HPLC法可以有效的提高检测的准确度和降低检测用时。
【具体实施方式】
[0026]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0027]实施例1
[0028]步骤1:取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理I分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0.5ml ;离心处理的转速为10000转/分钟，离心时间I分钟。所述的缓冲溶液为:ph为6.5的磷酸缓冲液。
[0029]步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置3分钟；
[0030]步骤3:采用三元洗脱剂对SLE柱(奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱)洗脱两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0.5ml。
[0031]其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下成分组成:
[0032]正丁醇30wt% ；
[0033]正己烷30wt% ；
[0034]乙酸甲酯40wt%。
[0035]实施例2
[0036]步骤1:取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理I分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0.5ml ;离心处理的转速为10000转/分钟，离心时间I分钟。所述的缓冲溶液为:ph为7的磷酸缓冲液。
[0037]步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置4分钟；
[0038]步骤3:采用三元洗脱剂对SLE柱(奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱)洗脱两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0.5ml。
[0039]其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下成分组成:
[0040]正丁醇20wt% ；
[0041]正己烷30wt% ；
[0042]乙酸甲酯50wt%。
[0043]分析:
[0044]检测方法具体为:
[0045]仪器:LC_2010型高效液相色谱仪(日本岛津)
[0046]色谱柱:C18柱，150mm*3.9mmID
[0047]柱温:室温
[0048]流动相:0.05%磷酸水溶液:乙腈=100:12 ；
[0049]检测器:UV检测器；
[0050]检测波长:217nm；
[0051]进样量:50μ L
[0052]采用上述的检测方法分别测量莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的标准样，并分别绘制莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的回归方程，同时，采用实施例1的样品按上述参数进行检测，根据217nm条件下的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的回归方程测定莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的含量，其中，沙丁胺醇出峰时间为7.2min，莱克多巴胺出峰时间为9.3min，克仑特罗的出峰时间为10.2min。
[0053]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1:取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理0.5?1.5分钟后再经过离心处理，将经混合处理的溶液在离心机中以9000?11000转/分钟的速度离心.0.5?1.5分钟，取离心处理后的上清液少量； 步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置2?4分钟； 步骤3:采用三元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液； 步骤4:采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，并分别绘制莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的不同浓度标准溶液的标准回归曲线，所述的高效液相色谱法的具体参数为: 色谱柱:C18 柱，150mm*3.9mmID 柱温:室温 流动相:0.05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05%磷酸水溶液和乙腈的体积比为 100:12 ； 检测器:uv检测器； 检测波长:217nm ； 其中，所述的三元洗脱剂为正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脱剂由以下重量份组成: 正丁醇2?4份； 正己烧2?4份； 乙酸甲酯2?8份； 所述的缓冲溶液为:Ph范围为6.5?7.0的磷酸缓冲液。
2.根据权利要求1所述的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，其特征在于，所述的饲料样品为lg，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为.0.5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂为0.5ml。
【专利摘要】本发明公开了一种高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法，包括以下步骤：步骤1：取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用三元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的洗脱液，步骤4：绘制含有莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的各个标准溶液的线性回归曲线，并测量步骤3的洗脱液中莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇的含量。本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的高精度测量饲料中的莱克多巴胺、克仑特罗、沙丁胺醇含量的方法。
【IPC分类】G01N30-06, G01N30-02
【公开号】CN104820037
【申请号】CN201510239853
【发明人】陈学松, 陈启钊, 叶小强, 郭振旺, 吴岚, 邓水德
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月12日