益肝明目口服液的多指标成分含量测定、指纹图谱构建和制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药领域，具体而言，涉及一种益肝明目口服液的多指标成分同时测 定的方法，以及益肝明目口服液的制备方法。
【背景技术】
[0002] 益肝明目口服液(参见国家药品监督管理局标准(试行)ws-5054(B-0054)-2002) 已经被批准上市销售，其处方包括熟地黄、当归、枸杞子、白芍等十二味生药，具有补益肝肾 的作用，适用于肝肾不足症见腰膝酸软、头晕目糊、记忆力减退、体倦乏力等病症。
[0003] 由于其中生药种类繁多，各生药的有效成分更是难以计数，各生产批次间的工艺 稳定性不强，导致了各生药的有效成分在各批次间差异很大，所以对最终患者的治疗效果 也产生了较大的差异。周志敏（临床合理用药.2009年，2(17):86)以芍药苷作为指标成分， 测定了各合格批次的益肝明目口服液的芍药苷含量，最终经专家审议，国家药品监督管理 局规定了芍药苷的含量不得低于〇.30mg/mL的标准。此后，再没有对益肝明目口服液的深入 研究的公开和启示。
[0004] 然而，经本发明人长期回访，发现即使满足这一规定的各批次益肝明目口服液，甚 至严格生产工艺，虽然在行政监管上是合格品，甚至使得芍药苷的含量大幅提高(基本能超 过0.9mg/mL)，但是仍旧会对最终患者的治疗效果产生较大的差异;再经过本发明人艰苦的 研究，令人意外地在众多生药的有效成分中进一步发现了 5种成分(绿原酸、木犀草苷、阿魏 酸、川陈皮素、橙皮苷)可以作为与疗效对应的指标成分，从而可以用于全面检测益肝明目 口服液的质量并用于改进其制备工艺。另外，经本发明人对测定方法细节的摸索，令人意外 地获得这五种成分可以与芍药苷同时进行准确含量测定的测定方法，从检测仪器上可以一 次性得出6种成分的有效结果，也可获得指纹图谱，因此几乎不会提高检测成本。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的问题是提供新的益肝明目口服液的测定方法及包括测定方法 步骤的制备益肝明目口服液的方法。另外，本发明还提供由此制备的益肝明目口服液及其 应用等。
[0006] 具体而言，在第一方面，本发明提供了益肝明目口服液的多指标成分的测定方法， 其包括，用高效液相色谱法检测所述益肝明目口服液，获得所述指标成分的含量，其中所述 指标成分是绿原酸、木犀草苷、阿魏酸、川陈皮素、橙皮苷和芍药苷。
[0007] 益肝明目口服液的多指标成分可以分多次分别测定，但是本发明优选是一次性测 定，即一次性获得所述指标成分的含量。
[0008] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的样品定容溶剂是甲 醇。在本发明的【具体实施方式】中，1体积的益肝明目口服液用甲醇混匀并定容至10体积。
[0009] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的色谱填料是十八烷 基硅烷键合硅胶，更优选是Inertsil ODS-SP或Diamonsil C18〇
[0010] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的流动相A为乙腈，流 动相B为体积百分比0.05 %的磷酸水溶液。
[0011] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的进样量为2~50yL， 更优选为10~2〇yL。
[0012] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的柱温为15~45°C， 更优选为20~30°C。
[0013] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的色谱柱的径长规格 为4·6mmX 250mm或4·6mmX 200mm。
[0014] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的流速在0.5~ 1.5mL/min，更优选为0.8~1.0mL/min〇
[0015] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的检测波长为230nm、 284nm、325nm和348nm。其中，绿原酸、阿魏酸和川陈皮素的检测波长为325nm，木犀草苷的检 测波长为348nm，橙皮苷的检测波长为284nm，和芍药苷的检测波长为230nm〇
[0016] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述指标成分的含量通过如表8所述的方 程计算：
[0017] 表8
[0018]
[0019]其中，X为相应成分在相应检测波长处检测得到的吸光度。
[0020] 优选在本发明第一方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的洗脱是梯度洗脱， 更优选所述高效液相色谱法的洗脱如表1所示，最优选如表3所示：
[0021] 表1
[0022]
[0026] 在第二方面，本发明提供了益肝明目口服液制剂的指纹图谱的测定方法，其包括， 用高效液相色谱法检测所述益肝明目口服液，获得所述指纹图谱。进一步地，在第三方面， 本发明提供了益肝明目口服液制剂的指纹图谱相似度的测定方法，其包括，用高效液相色 谱法检测所述益肝明目口服液，获得所述指纹图谱，然后将所述指纹图谱与参照图谱比较， 获得相似度。
[0027]优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的样品定容溶剂 是甲醇。更优选在定容前先用水饱和正丁醇萃取，如萃取1~5次。在本发明的【具体实施方式】 中，1体积的益肝明目口服液用2体积的水饱和正丁醇萃取，减压回收溶剂，用甲醇复溶并定 容至10mL。
[0028] 优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的色谱填料是十 八烷基硅烷键合硅胶，更优选是Inertsil 0DS-SP或Diamonsil C18〇
[0029] 优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的流动相A为乙 腈，流动相B为体积百分比0.05 %的磷酸水溶液。
[0030] 优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的进样量为2~ 50yL，更优选为10~20yL。
[0031 ]优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的柱温为15~45 °C，更优选为20~30°C。
[0032]优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的色谱柱的径长 规格为 4 · 6mm X 250mm或 4 · 6mm X 200mm。
[0033] 优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的流速在0.5~ 1.5mL/min，更优选为0.8~1.0mL/min〇
[0034] 优选在本发明第三方面的测定方法中，所述参照图谱如图4A所示。
[0035]优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的检测波长为 230nm。
[0036] 优选在本发明第二或三方面的测定方法中，所述高效液相色谱法的洗脱是梯度洗 脱，更优选所述高效液相色谱法的洗脱如表2所示，最优选如表4所示：
[0037] 表 2
[0038]
LUU4i j 仕弟四力囬，不反明怩1兴J市?奋Μ肘明目U服V仪的力法，兵钭怙：
[0042] (1)获得多批次的益肝明目口服液，根据批次分别取样；
[0043] (2)通过本发明第一方面的测定方法分别测定步骤(1)取样的样品；和，
[0044] (3)将步骤(2)的测定结果与标准比较，保留样品符合标准的批次的益肝明目口服 液，所述标准是绿原酸、木犀草苷、阿魏酸、川陈皮素、橙皮苷和芍药苷的含量范围。
[0045] 其中，多批次的益肝明目口服液可以根据国家药品监督管理局标准（试行）ws-5054(B-0054)-2002来制备获得，也可以直接通过市场渠道购买获得。
[0046] 优选在本发明第四方面的方法中，所述标准如下所示：
[0047] 阿魏酸：25 ~52yg/mL;
[0048] 川陈皮素：2.1~7.8yg/mL;
[0049] 绿原酸：38 ~65yg/mL;
[0050]木尾草昔：12 ~39yg/mL;
[0051 ]橙皮苷：230 ~600yg/mL;和，
[0052] 苟药昔：905 ~1500yg/mL。
[0053] 在第五方面，本发明提供了制备益肝明目口服液的方法，其包括：
[0054] (1)获得多批次的益肝明目口服液，根据批次分别取样；
[0055] (2)通过本发明第三方面的测定方法分别测定步骤(1)取样的样品；和，
[0056] (3)将步骤(2)的测定结果与标准比较，保留样品超过标准的批次的益肝明目口服 液，所述标准是指纹图谱相似度值。
[0057] 其中，多批次的益肝明目口服液可以根据国家药品监督管理局标准（试行）ws-5054(B-0054)-2002来制备获得，也可以直接通过市场渠道购买获得。
[0058] 优选在本发明第五方面的方法中，所述标准是0.915。
[0059] 在第六方面，本发明提供了本发明第四或五方面的方法制备的益肝明目口服液。
[0060] 优选在本发明第六方面的益肝明目口服液中，各指标成分的含量范围为：
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