一种中药组合物指纹图谱的建立方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种中药组合物的质量控制方法，具体设及一种利用高效液相色谱法 对胃力康颗粒制剂指纹图谱的构建方法及其指纹图谱。
【背景技术】
[0002] 中药质量控制是中药现代化的重要内容，中药指纹图谱技术被认为是中药质量控 制研究的有效手段。中药指纹图谱是指运用现代分析技术对中药化学信息W图形方式进行 表征并加W描述，是某种或某几种中药材所共有，具有特征性的某几类成分的色谱或光谱 的图谱。中药指纹图谱能比较全面地反映中药中化学物质的种类和数量，可W用于中药质 量的可控性和产品质量的稳定性的提升。利用高效液相色谱法构建的指纹图谱技术在原有 指纹图谱的方法上赋予指纹图谱大量的定性、定量信息共同应用于中药质量控制，对指纹 图谱中多个目标成分尤其是有效成分进行准确定量，使中药质量控制更加准确，能从根本 上保证中药材质量W及批与批之间产品质量的一致性。
[0003] 胃力康颗粒是由柴胡（醋炙）、赤巧、积壳（教炒）、木香、丹参、延胡索、義术、黄 连、吴荣英、大黄（酒炙）、党参和甘草组成，具有行气活血，泄热和胃功效，用于主治气滞血 疲兼肝胃郁热所致的胃腕疼痛，胀闷，灼热，暧气泛酸，烦躁易怒，口干口苦，W及慢性浅表 性胃炎见上述证候者。目前胃力康颗粒所用的质量控制方法是采用薄层色谱法对赤巧、延 胡索、黄连、大黄和丹参中的巧药巧、延胡索乙素、盐酸小築碱、大黄酸和丹参酬IIA进行鉴 另IJ，同时对巧药巧含量进行测定。该标准中主要是W薄层色谱定性鉴别方法控制制剂质量， 无法对产品成分进行定量分析，因此不能保证药材质量的稳定性、W及产品批与批之间的 质量均一性。
[0004] 由于胃力康颗粒组分复杂，任何一种单一成分均不能反映其整体疗效，测定其中 任何一种单一成分的含量多少也都反映不出其所体现的整体疗效。中药指纹图谱是一种多 指标的质量控制模式，可W较全面的反映所含化学成分的种类和数量，能够更加有效地体 现出中药成分的整体性和综合作用，从而更好地评价中药及其制剂的质量。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种胃力康颗粒指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，克服了现有质 量控制方法的不足，可W确保胃力康颗粒所用中药材的质量稳定性，W及胃力康颗粒制剂 的质量稳定性、均一性和可控性，从而提高胃力康颗粒用药的安全、有效、稳定及质量可靠。
[0006] 本发明提供了一种胃力康颗粒指纹图谱的建立方法：胃力康颗粒加纯水溶解，W 巧药巧、抽皮巧、芦下、丹参酪酸B、迷迭香酸、大黄素-8-0-P-D化喃葡萄糖巧、甘草酸为 对照品，照高效液相色谱法建立指纹图谱。
[0007] 本发明提供的一种胃力康颗粒指纹图谱的建立方法：其中，胃力康颗粒用纯水溶 解配制成1.Og/mL供试品溶液；分别精密称定巧药巧、抽皮巧、芦下、丹参酪酸B、迷迭香酸、 大黄素-8-0-P-D化喃葡萄糖巧溶于甲醇溶液配制成0. 5mg/mL对照品溶液，精密称定甘草 酸溶于50%的甲醇溶液中配制成0. 5mg/mL对照品溶液，按照高效液相色谱法建立指纹图 谱。
[0008] 前述方法中所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为AgilentZorbax EclipsePlusC18柱（4. 6X250mm，5ym)，流动相A为甲醇，流动相B为0. 2%甲酸水溶液， 梯度洗脱，流速1. 0血/min,柱溫25 °C，检测波长：0~45min，254nm;45~80min，230nm; 80 ~llSmin，254nm。
[0009] 本发明提供的一种胃力康颗粒指纹图谱的建立方法：
[0010] (a)供试品溶液的制备：精密称定胃力康颗粒样品10.Og，置lOmL容量瓶中，加入 纯水定容至刻度，超声15min，冷却，用纯水补足重新定容至刻度，摇匀，取ImL该溶液用微 孔滤膜过滤，14000r/min离屯、lOmin，取上清液置4°C冰箱作为供试品溶液备用；
[0011] 化）对照品溶液的制备：分别精密称定巧药巧、抽皮巧、芦T、丹参酪酸B、迷迭香 酸、大黄素-8-0-P-D化喃葡萄糖巧5mg溶于甲醇溶液，配制为0. 5mg/mL对照品溶液，-4°C 冰箱储存备用；精密称取甘草酸5mg，溶于50 %的甲醇中，配制为0. 5mg/mL对照品溶 液，-4°C冰箱储存备用；
[001引（C)色谱条件：色谱柱为AgilentZorbaxEclipsePlusC18柱(4. 6X250mm，5ym);流动相A为甲醇，流动相B为0. 2 %甲酸水溶液，梯度洗脱，流速 1.OmL?min1，柱溫25°C，检测波长：0 ~45min，254nm;45 ~80min，230nm;80 ~115min， 254nm；
[0013] (d)测定：精密吸取供试品溶液10yL注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定， 得到胃力康颗粒的指纹图谱。
[0014] 其中，步骤（a)中微孔滤膜为0.45ym微孔滤膜；步骤（C)中梯度洗脱的程序是按 照如下体积比浓度配置进行：
[0015]
[0016]
[0017] 本发明人通过对胃力康颗粒进行指纹图谱研究，建立了胃力康颗粒指纹图谱检测 方法，并通过方法学考察，验证该方法精密度、重复性、稳定性均符合要求。
[0018] 精密度实验
[0019] 取同一批胃力康供试品溶液，连续进样6次，每次10yL检测指纹图谱，测定主要 共有峰的相对保留时间和相对峰面积，主要共有峰相对峰面积RSD小于2. 99%，相对保留 时间RSD小于0. 52%，表明仪器精密度良好，具体结果见表1、表2所示。
[0020] 表1同一批胃力康颗粒样品共有峰的保留时间
[0021]
[00巧]重复性实验
[0026]取同一批胃力康样品，制备6份供试品溶液，测定主要共有峰的相对保留时间和 相对峰面积，结果胃力康颗粒主要共有峰峰面积的RSD小于2. 98%，保留时间的RSD小于 0. 26%，表明方法重复性好，具体结果见表3、表4所示。
[0027] 表3同一批胃力康颗粒样品共有峰的保留时间
[0028]
[0032] 稳定性实验
[0033] 取同一批胃力康供试品溶液分别在0、2、4、6、8、2地进样，每次10化检测指纹图 谱，测定主要共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果胃力康颗粒主要共有峰的峰面积 的RSD小于2. 79%，保留时间的RSD小于0. 25%，表明样品在24h内稳定性较好，具体结果 见表5、表6所不。
[0034] 表5同一批胃力康样品共有峰的相对保留时间
[0035]
[0038]
[0039] 指纹图谱的测定与分析
[0040] 按照确定的指纹图谱检测方法测定了 10批胃力康颗粒指纹图谱，对10批样品指 纹图谱进行数据分析，确定占总峰面积90%W上的13个色谱峰为胃力康颗粒的共有峰。
[0041] 采用国家药典委员会编的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版"，参数设 置：(a)参照图谱：采用1112054(S1)样品作为相似度计算时校正的参照图谱。化）时间窗 宽度：0. 10。（C)校正方式：多点校正。校正色谱峰的确定：实验记录了保留时间115min的 色谱图。（d)指纹图谱的生成：将10批样品色谱图生成指纹图谱见图1，生成的对照指纹图 谱见图2,相似度计算结果见表7,10批样品相似度均在0. 9W上，符合要求。
[0042] 表7十批样品相似度评价结果
[0043]
[0044] 本发明使用二极管阵列检测器对样品在210、230、254、360皿的波长下进行扫描， 并对各波长下的色谱图进行分析比较。结果表明，在230nm和254nm波长下检测到的峰的 数目较多，各峰分离良好，特征峰明显且峰形较好，从图谱中可W尽可能的获取色谱组分信 息W反映体系组成的全貌。并且本发明经过大量的实验研究发现，当选择W下特定时间段 的特定检测波长时，即0~45min时选择254皿、45~80min时选择230皿、80~115min 时选择254nm，所得到的各峰分离最好，特征峰最明显且峰形最好。
[0045] 本发明人对洗脱液进行了系列筛选，结果发现当采用乙腊-水进行梯度洗脱，获 得的色谱峰信息较少，把有机相改为甲醇，获得较多色谱峰W反映体系组成，后把水相改 为0. 2%甲酸水，基线漂移小，出峰数目多，峰分离情况比较理想。在此基础上，调整甲醇一 0. 2 %甲酸水梯度洗脱的比例关系，最终确定了色谱洗脱条件。
[0046] 由于胃力康颗粒组分复杂，任何一种单一成分均不能反映其所体现的整体疗效。 故通过多种分析检测手段，测定其中任何一种单一成分的含量多少也都反映不出其所体现 的整体疗效。中药指纹图谱是一种多指标的质量控制模式，虽然它不能代替含量测定，但它 比测定任何单一成分所提供的信息却丰富得多，可W比较全面的反映所含化学成分的种类 和数量，能够更加有效地体现出中药成分的整体性和综合作用，从而更好地评价中药及其 制剂的质量。所W利用现代色谱分析技术建立胃力康颗粒的色谱指纹图谱并对胃力康颗粒 进行宏观的综合分析是非常必要的，因为它可相对提供关于胃力康颗粒的整体特征，保证 胃力康颗粒的安全、有效、稳定及质量可靠。
[0047] 相似度评价是指纹图谱研究的一个重要组成部分，所建