救必应药材指纹图谱的构建方法及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种救必应药材指纹图谱的构建方法 及其检测方法。
【背景技术】
[0002] 救必应为冬青科植物铁冬青的干燥树皮，其性苦、寒。气微香、味苦、微涩。具有 清热解毒、利湿止痛之功效，适用于暑湿发热、喉咙肿痛、湿热泻痢、脘腹胀痛、风湿痹痛、湿 瘆、疮疖、跌打损伤等。现代药理研宄表明，救必应还具有抗心律失常和抗心肌缺血作用、降 压和减慢心率作用、抗肿瘤作用、止血作用等。
[0003] 救必应为干燥树皮，目前中药材有多种外观相似的易混淆品，而现有技术中对于 检测是否为救必应的方法较为复杂，且结果误差较大。因此，有必要建立一种全面、直观、快 速的检测方法。
【发明内容】
[0004] 基于此，本发明提供了一种救必应药材指纹图谱的构建方法。
[0005] 具体的技术方案如下：
[0006] -种救必应药材指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
[0007] (1)对照品溶液的制备：
[0008] 精密称取紫丁香苷对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；
[0009] (2)供试品溶液的配制：
[0010] 精密称取救必应药材粉末，加入体积百分含量为45-55 %的乙醇，超声提取或回流 提取50-70min，过滤，即得所述供试品溶液；
[0011] ⑶测定
[0012] 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到 由13个共有特征峰构成的救必应药材指纹图谱。
[0013] 在其中一个实施例中，步骤（3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱 柱；流动相：甲醇为流动相A，0. 5% (体积浓度）冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方 式；流速为〇? 8-1. 2ml/min;检测波长为288-292nm;柱温23-27°C。
[0014] 在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：〇_5min，流动相A的体积百分数由 20 %变化至25 % ;6-15min，流动相A的体积百分数由25 %变化至35 %; 15-45min，流动相A 的体积百分数由35%变化至45% ;45-50min，流动相A的体积百分数由45%变化至60%。
[0015] 在其中一个实施例中，检测波长为290nm，柱温为25°C。
[0016] 在其中一个实施例中，步骤（2)中，乙醇的体积百分含量为50%，提取时间为 60min〇
[0017] 本发明的另一目的是提供一种准确鉴定救必应药材的检测方法。
[0018] 具体的技术方案如下：
[0019] 一种救必应药材指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：
[0020] (1)对照品洛液的制备：
[0021] 精密称取紫丁香苷对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；
[0022] (2)供试品溶液的配制：
[0023] 精密称取救必应药材粉末，加入体积百分含量为45-55%的乙醇，超声提取或回流 提取50-70min，过滤，即得所述供试品溶液；
[0024] ⑶测定
[0025] 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，即得。
[0026] 在其中一个实施例中，步骤（3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱 柱；流动相：甲醇为流动相A，0. 5 %冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为 0? 8-1. 2ml/min;检测波长为 288-292nm;柱温 23-27°C。
[0027] 在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0_5min，流动相A的体积百分数由 20 %变化至25 % ;6-15min，流动相A的体积百分数由25 %变化至35 %;15-45min，流动相A 的体积百分数由35%变化至45% ;45-50min，流动相A的体积百分数由45%变化至60%。
[0028] 在其中一个实施例中，步骤（2)中，乙醇的体积百分含量为50%，提取时间为 60min;步骤（3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动 相A，0. 5%冰乙酸水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为I.Oml/min;检测波长为 290nm;柱温 25°C。
[0029] 本发明的有益效果如下：
[0030] 本发明经发明人的大量实验和研宄，确定了制备供试品溶液和对照品溶液的方 法，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出救必应药材的指纹图谱。采用本 申请方法构建的指纹图谱以及检测方法可以准确地鉴定救必应药材，精密度高，且节约试 剂。
【附图说明】
[0031] 图Ia为溶剂峰比较图；
[0032] 图Ib为标准品紫丁香苷HPLC图；
[0033] 图2为不同流动相HPLC图；
[0034] 图3为流动相不同起始梯度HPLC图；
[0035] 图4为流动相不同梯度HPLC图；
[0036] 图5为不同流速HPLC图；
[0037] 图6为不同柱温HPLC图；
[0038] 图7为不同波长HPLC图；
[0039] 图8为不同色谱柱HPLC图；
[0040] 图9为六种提取溶剂HPLC图；
[0041] 图10为不同提取体积HPLC图；
[0042] 图11为不同种提取方法HPLC图；
[0043] 图12为不同提取时间HPLC图；
[0044] 图13为救必应所有样品导出HPLC图谱；
[0045] 图14为救必应药材指纹图谱的对照谱图；
[0046] 图15为实施例2待测药材的HPLC图谱。
【具体实施方式】
[0047] 以下通过实施例对本申请做进一步阐述。
[0048] 实施例1救必应药材指纹图谱的构建方法
[0049] 一、仪器、试药与材料
[0050] 1、仪器
[0051] KQ- 100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；T-214型电子分析天平 (Denver公司）；Waterse2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样 器、紫外检测器（Waters公司）。
[0052] 2、试剂
[0053] 冰乙酸（色谱纯，天津市化学试剂研宄所）；甲醇、乙腈（色谱纯，Honeywell公 司）；水为超纯水；
[0054] 对照品为紫丁香苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111574-200603)。
[0055] 3、材料
[0056] 救必应药材（广州白云山星群（药业）股份有限公司提供，共12批，批号或产地 分别为XG1404-01，XG1307-01、XG1105-01、XG111