一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药质量控制技术领域，尤其涉及一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立 方法与应用。
【背景技术】
[0002] 灯盘花为菊科植物短葶飞蓬[ErigeronBreviscapul(Vent.)Hand-Mass.]的干燥 全草，又名灯盏细辛，是云南道地的民族药材，占全国的95%。全草具有散寒解表；祛风除 湿；活络止痛；消积的功效，临床上多用于治疗脑血栓、脑栓塞、中风等脑血管意外所致的 瘫痪症、心绞痛等。灯盏花主要成分为灯盏花乙素，此外还含有黄酮、吡喃酮、倍半萜、咖啡 酸酯、酚酸类化合物等多种化学成分。
[0003] 灯盏花颗粒现行标准以总黄酮和灯盏花乙素的含量作为评价质量的指标。然而， 灯盏花总黄酮紫外分光光度法检测精度差，不能反映成分的比例和灯盏花乙素的含量并不 能反映灯盏花颗粒的整体质量。近年来，兴起的指纹图谱质量控制技术通过全面反映中药 所含内在化学成分的种类与数量，能有效的反映中药质量。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用，旨在全面 地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
[0005] 本发明是这样实现的，一种灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高 效液相色谱法，具体包括如下步骤：
[0006] (1)对照品溶液的制备：精密称取灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素对照品，以 甲醇、乙醇或碱水为溶剂配成对照品溶液；
[0007] (2)样品溶液的制备：精密称取灯盏花颗粒，精密加入甲醇水溶液，超声振荡，滤 过，作为样品溶液；
[0008] (3)色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为 乙腈-醋酸铵水溶液组成梯度洗脱溶液。
[0009] (4)测定：精密吸取步骤（1)中的对照品溶液和步骤（2)中的样品溶液分别注入 高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
[0010] 优选的，步骤（2)具体包括：取灯盏花颗粒适量研细，精密称取700mg，置50ml具 塞锥形瓶中，精密加入75 %的甲醇溶液25ml，超声振荡40min，放冷，再称定重量，用75 %甲 醇补足减失的重量，摇匀，用〇. 45ym的滤膜过滤，作为样品溶液。
[0011] 优选的，步骤（3)中，所述流动相为乙腈-0.1%~2%醋酸铵溶液用磷酸调PH= 2~7组成的梯度洗脱液。
[0012] 优选的，步骤（3)中，所述色谱条件柱柱温为10~50°C。
[0013] 优选的，步骤（3)中，所述色谱条件紫外检测波长为210~380nm。
[0014] 优选的，步骤（3)中，所述梯度洗脱包括以下具体步骤：
[0015] 0分钟时，流动相A为13 %的乙腈溶液、流动相D为87 %的0.I%的醋酸铵溶液；
[0016] 15分钟时，流动相A为15 %的乙腈溶液、流动相D为85 %的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0017] 23分钟时，流动相A为17%的乙腈溶液、流动相D为83%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0018] 24分钟时，流动相A为17%的乙腈溶液、流动相D为83%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0019] 48分钟时，流动相A为18%的乙腈溶液、流动相D为82%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0020] 50分钟时，流动相A为20%的乙腈溶液、流动相D为80%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0021] 65分钟时，流动相A为20%的乙腈溶液、流动相D为80%的0. 1 %的醋酸铵溶液。
[0022] 本发明进一步公开了由上述灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法得到的灯盏花颗粒 指纹图谱。
[0023] 本发明进一步公开了上述灯盏花颗粒指纹图谱在灯盏花颗粒质量控制方面的应 用。
[0024] 本发明克服现有技术的不足，提供一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应 用，采用高效液相色谱（HPLC)建立其指纹图谱，并用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统 的相关软件（版本2004) "建立灯盏花颗粒指纹图谱，并对不同批次灯盏花颗粒的指纹图谱 相似度进行分析比较。可全面地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临 床用药的有效性与安全性。
【附图说明】
[0025] 图1是本发明实施例二中灯盏花乙素对照品色谱峰图；
[0026] 图2是本发明实施例二中灯盏花甲素对照品色谱图；
[0027] 图3是本发明实施例二中野黄芩素对照品色谱峰图；
[0028] 图4是本发明实施例二中灯盏花颗粒指纹图谱；
[0029] 图5是本发明实施例四中8批灯盏花颗粒指纹图谱。
【具体实施方式】
[0030] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图以及实施例， 对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并不用于限定本发明。
[0031 ] 实施例一、灯盏花颗粒指纹图谱方法的建立
[0032] 灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，具体包括如下步骤：
[0033] (1)对照品溶液的制备
[0034] 精密称取灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素对照品，以甲醇、水为溶剂配成对照 溶液；
[0035] (2)样品溶液的制备
[0036] 取灯盏花颗粒适量，研细，精密称取700mg，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入75% 的甲醇溶液25ml，超声振荡40min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀， 用0. 45ym的滤膜过滤，作为样品溶液。
[0037] (3)色谱条件
[0038] 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-醋酸 铵溶液组成梯度洗脱溶液，紫外检测波长为335nm，时间60min;其中，所述流动相为乙 腈-0. 1 %醋酸铵溶液用磷酸调PH= 3组成的梯度洗脱液，柱温：30°C。梯度洗脱包括以下 具体步骤：
[0039] 0分钟时，流动相A为13 %的乙腈溶液、流动相D为87 %的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0040] 15分钟时，流动相A为15 %的乙腈溶液、流动相D为85 %的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0041] 23分钟时，流动相A为17%的乙腈溶液、流动相D为83%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0042] 24分钟时，流动相A为17%的乙腈溶液、流动相D为83%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0043] 48分钟时，流动相A为18%的乙腈溶液、流动相D为82%的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0044] 50分钟时，流动相A为20 %的乙腈溶液、流动相D为80 %的0. 1 %的醋酸铵溶液；
[0045] 65分钟时，流动相A为20%的乙腈溶液、流动相D为80%的0. 1 %的醋酸铵溶液。
[0046] ⑷测定
[0047] 精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图 谱。
[0048] 实施例二、灯盏花颗粒共有峰的确定
[0049] 取对照品灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素按实施例一条件进行图谱测定，取灯 盏花颗粒按实施例一条件做灯盏花颗粒作图谱测定，在灯盏花颗粒的指纹图谱中确定12 个峰作为特征峰组成（见图4)。通过对照品图谱测定，根据对照品保留时间，确定了灯盏花 颗粒中5号峰为灯盏花乙素（图1)，10号峰为灯盏花甲素（图2)，12号峰为野黄芩素（图 3)。选取分离度好，峰形较为稳定的灯盏花乙素5号峰为参照峰。
[0050] 实施例三、灯盏花药颗粒精密度测定
[0051] 取4批灯盏花颗粒供试品溶液，按实施例一色谱条件连续进样6次，每次5y1，记 录所得到的色谱指纹图谱，灯盏花颗粒共有色谱峰峰面积见表1。考察共有峰的相对保留时 间，以灯盏花乙素色谱峰为参照，计算大于总峰面积10%的共有峰的相对峰面积RSD值，计 算结果见表1、表2。
[0052] 表1灯盏花颗粒精密度试验各峰峰面积表
[0053]
【主权项】
1. 一种灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，具体包括 如下步骤： (1) 对照品溶液的制备：精密称取灯盏花乙素、灯盏花甲素、野黄芩素对照品，以甲醇、 乙醇或碱水为溶剂配成对照品溶液； (2) 样品溶液的制备：精密称取灯盏花颗粒，精密加入甲醇水溶液，超声振荡，滤过，作 为样品溶液； (3) 色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙 腈-醋酸铵水溶液组成梯度洗脱溶液。 (4) 测定：精密吸取步骤（1)中的对照品溶液和步骤（2)中的样品溶液分别注入高效 液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱。
2. 如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤（2)具 体包括：取灯盏花颗粒适量研细，精密称取700mg，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入75 %的 甲醇溶液25ml，超声振荡40min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，用 0. 45 y m的滤膜过滤，作为样品溶液。
3. 如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤（3)中， 所述流动相为乙腈_〇. 1%~2%醋酸铵溶液用磷酸调PH = 2~7组成的梯度洗脱液。
4. 如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤（3)中， 所述色谱条件柱柱温为10~50°C。
5. 如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤（3)中， 所述色谱条件紫外检测波长为210~380nm。
6. 如权利要求1所述的灯盏花颗粒指纹图谱的建立方法，其特征在于，在步骤（3)中， 所述梯度洗脱包括以下具体步骤： 0分钟时，流动相A为13%的乙腈溶液、流动相D为87%的0. 1 %的醋酸铵溶液； 15分钟时，流动相A为15%的乙腈溶液、流动相D为85%的0. 1 %的醋酸铵溶液； 23分钟时，流动相A为17%的乙腈溶液、流动相D为83%的0. 1 %的醋酸铵溶液； 24分钟时，流动相A为17%的乙腈溶液、流动相D为83%的0. 1 %的醋酸铵溶液； 48分钟时，流动相A为18%的乙腈溶液、流动相D为82%的0. 1 %的醋酸铵溶液； 50分钟时，流动相A为20 %的乙腈溶液、流动相D为80 %的0. 1 %的醋酸铵溶液； 65分钟时，流动相A为20%的乙腈溶液、流动相D为80%的0. 1 %的醋酸铵溶液。
7. 权利要求1~4任一所述方法得到的灯盏花颗粒指纹图谱。
8. 权利要求5所述的灯盏花颗粒指纹图谱在灯盏花颗粒质量控制方面的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种灯盏花颗粒指纹图谱及其建立方法与应用，采用高效液相色谱(HPLC)建立其指纹图谱，并用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统的相关软件(版本2004)”建立灯盏花颗粒指纹图谱，并对不同批次灯盏花颗粒的指纹图谱相似度进行分析比较。可全面地对灯盏花颗粒质量进行评价，保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104655748
【申请号】CN201510043238
【发明人】张洪, 周敏, 刘子兰, 武正才, 黄春球, 谢忠浪, 马海燕
【申请人】云南植物药业有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年1月28日