专利名称：中药红外指纹图谱鉴别技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然植物或以天然植物原料为主的中药材、中成药、保健品、饮料、调料、各种提取物和添加剂的品种鉴定和真伪鉴别技术。
背景技术：
中药红外指纹图谱鉴别技术属于仪器分析方法中的红外光谱法。对于其它光谱法，如紫外、荧光、原子吸收、核磁共振以及色谱—光谱联用法，也都有人用来进行中药质量评价的研究。各种方法性能不同其鉴别效果也各具特色。色谱—光谱联用法可对中药中的有效成分进行准确的定性定量分析，然而，由于目前人们还不知道每种单味药材所独有的特征性成分是什么，因此，其对单味药材和中成药的鉴别效果大打折扣。例如黄连和黄柏都含小檗碱，用色谱—光谱联用仪可准确测出某中药材检品含有小檗碱，但不能确定该检品是黄连还是黄柏。每种图谱鉴别技术都有其局限性和最佳的使用范围。不同方法的难易程度、解决问题的角度、测试成本以及其鉴别效果等均有所不同。对于中药中某个成分的定性定量分析而言，应首选色谱-光谱联用法。然而，对于单味药材或中成药全处方的品种和真伪鉴别来说，特别是当没有形态鉴别特征时，快捷、方便、经济、准确、可靠的鉴别方法尚未见报道。
发明内容
本发明针对已有技术的上述问题，提供一种快捷、方便、经济、准确、可靠的中药红外指纹图谱鉴别技术。
本发明包括将样品用正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取，分别测试提取物的红外光谱，与相应对照品的红外光谱进行比较，即可获得鉴别结果。
本发明的特点在于，每克或每毫升样品分步加入正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮1-30毫升，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液得到的分别是正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取物。
对可粉碎成粉末的固体样品，如中药材或以生药为主的中成药的散剂、片剂、锭剂、水丸剂和胶囊剂，具体制备步骤如下将样品粉碎，每克样品加正己烷5-20ml，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液得到正己烷提取物；待样品挥干后，再加乙醚5-20ml，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液得到乙醚提取物；待样品挥干后，再加95％乙醇5-20ml，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液，向提取物中加2-10ml蒸馏水，使溶，将混悬液离心，向上清液中加丁酮5-20ml，振摇，离心，蒸干上清液得到丁酮提取物。
对粘性固体样品，如，中成药蜜丸剂，具体制备步骤如下将样品切碎，每克样品加蒸馏水5-20ml，研成混悬物，振摇，离心，向上清液中加5-20ml正己烷，振摇，离心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下层溶液再加5-20ml乙醚，振摇，离心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；再向下层溶液加5-20ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
对不含脂溶物的固体样品，如，中成药冲剂和颗粒剂，具体制备步骤如下每克样品加蒸馏水5-30ml，使溶，加5-30ml乙醚，振摇，离心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下层溶液再加5-30ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
对仅含水溶物的固体样品，例如单味中药浓缩颗粒，具体制备步骤如下每克样品加蒸馏水5-30ml使溶，加5-30ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
对粘性液体样品，例如中成药合剂、酒剂、洗剂、浸膏剂及保健品口服液，具体制备步骤如下每毫升样品加丁酮1-10ml，振摇，离心，蒸干上清液，向丁酮提取物中加蒸馏水1-10ml使溶，向混悬液中加1-10ml正己烷，振摇，离心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下层溶液加1-10ml乙醚，振摇，离心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下层溶液加1-10ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
对仅含水溶物的液体样品，例如中成药注射剂，具体制备步骤如下每毫升样品加丁酮1-10ml，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
本发明通过测定检品的三种极性提取物(正己烷、乙醚、丁酮提取物)的红外光谱，然后将其光谱与其对照品的红外光谱或与已建立的中药材和中成药标准红外光谱图集及其计算机检索光谱库比较，后者可借助计算机进行判断，确定该检品的归属。通常，同种植物的药用部位与非药用部位的光谱是不同的。假如检品是来自非药用部位，那么根据其光谱特征就可以确定其真伪。需要特别强调的是，有不少学者都在探索用红外光谱法鉴别中药材的问题，由于各家的研究方法不同，因此其鉴别效果也各不相同。若要比较其鉴别效果的优劣可以用测试甘草(乌拉、胀果和光果)的光谱来评定，看谁的信息量大，谁鉴别得既快又准。本发明方法真正达到了简便、快速、准确、经济、重复性高、信息量大、适用面广、鉴别效果极佳并且可使用计算机检索的水平。
使用本发明可以使天然植物或以天然植物原料为主的中药材、中成药、保健品、饮料、调料、各种提取物或添加剂获得1-3张独特的红外指纹图谱。该图谱可用于上述样品的品种和真伪鉴别以及对产品质量的稳定性考查。本技术的鉴别能力和水平对单味植物药一般可准确鉴别其种及其各种复杂情况，对不同产地、不同采集期和不同加工方法等情况只要其成分有明显的变化均可提供鉴别信息；对中成药可准确鉴别其处方的真实性和完整性，通常，其鉴别的灵敏度可反映一味药的变化，缺少或更换一味药均可测出差异。例如黄连和黄柏都含小檗碱，用色谱—光谱联用仪可准确测出某中药材检品含有小檗碱，但不能确定该检品是黄连还是黄柏。使用本发明无论对于黄连还是黄柏，都可以获得三张具有独特特征的红外谱图。每一张光谱都是含多种成分的混合物的光谱。该光谱类似于人类的指纹，使用它可以准确无误地鉴别黄连和黄柏。该光谱的特征性来源于物种所含化学成分千差万别的特征性。每种药材红外光谱的轮廓特征是相对固定的，因此可以把它看作是一个稳定的曲线图形。这样，我们就可以不解释光谱中每个峰的化学含义，光谱鉴别就成为类似药材外形鉴别的特殊图形的形态鉴别方法。
使用本发明可对生产原料和最终产品进行强有力地质量控制，可大幅度地提高产品的质量和信誉。条形码和激光防伪标记等技术不可能从根本上做到防伪，而本技术则是从实测内在成分入手，只要光谱吻合，产品的身份即正宗无疑。我国中药生产厂家正在积极推行GMP管理，本发明有助于推动我国中药现代化、促进中医药产品与国际接轨并让世界更好更多地接受中医药产品。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1是四种甘草正己烷提取物的红外光谱。图2是四种甘草乙醚提取物的红外光谱。图3是四。种甘草丁酮提取物的红外光谱。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％，从上到下样品分别是内蒙古野生乌拉甘草、新疆人工栽培胀果甘草、新疆野生光果甘草和山东人工栽培刺果甘草。
正品甘草有三个种，乌拉、胀果和光果，刺果甘草是作为其它药用品种。对于这四种甘草的粉末或全成分提取物，用现行其它方法很难在短时间内鉴别清楚。从图1-3可以看出，不管使用哪一种提取物的光谱，都能把这四种甘草分得一清二楚。
图4是同仁堂大活络丹的对照或标准红外光谱，其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％，从上到下分别是正己烷、乙醚、丁酮提取物的光谱。同仁大活络丹含有51味药材，该光谱是采用本发明的方法对25个批号的同仁大活络丹样品正己烷、乙醚、丁酮提取物的光谱经计算机对其光谱特征进行了平均和归纳，因此，可以被看作是同仁大活络丹的对照或标准红外光谱。
图5是同仁堂牛黄清心丸的标准红外光谱，其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％，从上到下分别是正己烷、乙醚、丁酮提取物的光谱。牛黄清心丸含有29味药材。图5中的正己烷提取物的光谱在1107、1070、1054、1031、1020和1007cm-1附近的一组吸收峰正是冰片的特征峰(已经与冰片的红外光谱比较并证实)。根据这组吸收峰的有无，就可以对牛黄清心丸中是否加入冰片做出准确的鉴定。
图6是制首乌浓缩颗粒的红外光谱。图7是防风浓缩颗粒的红外光谱。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率T％，上图均为未经提取直接用KBr压片法测定的光谱；下图为丁酮提取物的光谱。这两个浓缩颗粒样品都是江苏省江阴天江药业有限公司生产的。制首乌和防风不同科不同属，但其水煎剂的光谱却极为相似，看起来有点不可思议。用本发明方法提取后，二者的光谱差异一下子变得非常明显，光谱鉴别变得非常容易。
图8～图l0分别是9403-102批号的同仁大活络丹的正己烷、乙醚、丁酮提取物的光谱(上图)与其标准红外光谱(下图)的计算机检索结果。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％。剂型大蜜丸剂，来源均来自北京同仁堂制药厂，制样溴化钾涂片法。从图中可以看出两光谱吻合得很好，吻合率为94～97％，以此可作出是真品的结论。
图11是伪大活络丹正己烷提取物的光谱(上图)与正品大活络丹标准红外光谱(下图)的对照结果。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％。剂型大蜜丸剂，来源正品来自北京同仁堂制药厂，伪品由北京同仁堂制药厂收集并提供，制样溴化钾涂片法。从图中可以看出两光谱明显吻合得不好，吻合率不足40％，以此可作出上图是伪品的结论。
图12是山东省淄博市淄川区第二制药厂生产的板蓝根冲剂(批号20000104)的红外光谱。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％，上图是乙醚提取物的光谱；下图是丁酮提取物的光谱。由于此类样品一般不含脂溶物，因此只能得到两种提取物的光谱，鉴别时，需要将其光谱与板蓝根冲剂的对照或标准光谱进行比较并根据其相似程度判断其真伪。
图13是山东北方制药厂的复方大青叶合剂(批号960411)的红外光谱。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率/T％，从上到下分别是正己烷、乙醚、丁酮提取物的光谱。此类粘性液体样品一般都能得到三种提取物的光谱。鉴别时，需要将其光谱逐一与复方大青叶合剂的对照或标准光谱进行比较并根据其相似程度判断其真伪。
图14是金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂生产的脉络宁注射液(批号200010073)的红外光谱。其中，横坐标是波数/cm-1，纵坐标是透过率T％，下图是丁酮提取物的光谱；上图是经丁酮提取后下层溶液所含物质的光谱。鉴别时，需要将其光谱逐一与脉络宁注射液的对照或标准光谱进行比较并根据其相似程度判断其真伪。
(五)具体实施例实施例1.对可粉碎成粉末的固体样品乌拉甘草的鉴别将样品粉碎，过50目筛，称取样品2g，加正己烷30ml，提取20分钟，离心，取上清液蒸干即得正己烷提取物；待样品挥干后，加乙醚30ml，提取20分钟，离心，取上清液蒸干即得乙醚提取物；待样品挥干后，加95％乙醇30ml，提取20分钟，离心，将上清液蒸干，向上清液提取物中加20ml蒸馏水，使溶，将混悬液离心，向上清液中加30ml丁酮，振摇，离心，取上清液蒸干即得丁酮提取物。分别测试上述三种提取物的红外光谱(见图1-3中的上数第一张光谱)。然后将其光谱与乌拉甘草对照药材(中国药品生物制品检定所可提供近400种对照药材)的光谱比较并根据其相似程度判断其真伪。
实施例2.对粘性固体样品蜜丸剂大活络丹的鉴别称取3g样品，切碎，加蒸馏水30ml，研磨使之成为均匀的混悬物，振摇，离心，向上清液中加30ml正己烷，振摇，离心，取上清液蒸干，得到正己烷提取物；向下层溶液加30ml乙醚，振摇，离心，取上清液蒸干，得到乙醚提取物；向下层溶液加30ml丁酮，振摇，离心，将上清液蒸干，得到丁酮提取物。分别测试上述三种提取物的红外光谱(见图4)。然后将其光谱与大活络丹的对照或标准光谱比较并根据其相似程度判断其真伪。
实施例3.对不含脂溶物的固体样品板篮根冲剂的鉴别取样品1g，加蒸馏水20ml，使溶，加20ml乙醚，振摇，离心，将上清液蒸干，得到乙醚提取物。向下层溶液加20ml丁酮，振摇，离心，将上清液蒸干，得到丁酮提取物。分别测试上述两种提取物的红外光谱(见图12)。然后将其光谱与板篮根冲剂的对照或标准光谱比较并根据其相似程度判断其真伪。
实施例4.对仅含水溶物的固体样品单味中药浓缩颗粒制首乌的鉴别取样品1g，加蒸馏水20ml，使溶，加20ml丁酮，振摇，离心，将上清液蒸干，得到丁酮提取物。测试丁酮提取物的红外光谱(见图6的下边一张光谱)。然后将其光谱与单味中药浓缩颗粒制首乌的对照或标准光谱比较并根据其相似程度判断其真伪。
实施例5.对粘性液体样品复方大青叶合剂的鉴别取样品10ml，加丁酮20ml，振摇，离心，将上清液蒸干，向丁酮提取物中加20ml蒸馏水研磨，得到混悬液，向混悬液中加20ml正己烷，振摇，离心，将上清液蒸干，得到正己烷提取物；向下层溶液加20ml乙醚，振摇，离心，将上清液蒸干，得到乙醚提取物；向下层溶液加20ml丁酮，振摇，离心，将上清液蒸干，得到丁酮提取物。分别测试上述三种提取物的红外光谱(见图13)。然后将其光谱与复方大青叶合剂的对照或标准光谱比较并根据其相似程度判断其真伪。
实施例6.对仅含水溶物的液体样品脉络宁注射剂的鉴别取样品10ml，加20ml丁酮，振摇，离心，将上清液蒸干，得到丁酮提取物。测试上述丁酮提取物的红外光谱(见图14)。然后将其光谱与脉络宁注射剂的对照或标准光谱比较并根据其相似程度判断其真伪。
权利要求
1.一种中药红外指纹图谱鉴别技术，包括将样品用溶剂提取，分别测试提取物的红外光谱，与相应对照品的红外光谱进行比较，其特征在于，所用溶剂是正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮。
2.如权利要求1所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，每克或每毫升样品分步加入正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮1-30毫升，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液分别得到正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取物。
3.如权利要求1或2所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，对可粉碎固体样品，具体的溶剂提取步骤如下将样品粉碎，每克样品加正己烷5-20ml，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液得到正己烷提取物；待样品挥干后，再加乙醚5-20ml，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液得到乙醚提取物；待样品挥干后，再加95％乙醇5-20ml，提取1-30分钟，离心，蒸干上清液，向提取物中加2-10ml蒸馏水，使溶，将混悬液离心，向上清液中加丁酮5-20ml，振摇，离心，蒸干上清液得到丁酮提取物。
4.如权利要求1或2所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，对粘性固体样品，具体的溶剂提取步骤如下将样品切碎，每克样品加蒸馏水5-20ml，研成混悬物，振摇，离心，向上清液中加5-20ml正己烷，振摇，离心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下层溶液再加5-20ml乙醚，振摇，离心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；再向下层溶液加5-20ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
5.如权利要求1或2所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，对不含脂溶物的固体样品，具体的溶剂提取步骤如下每克样品加蒸馏水5-30ml，使溶，加5-30ml乙醚，振摇，离心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下层溶液再加5-30ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
6.如权利要求1或2所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，对仅含水溶物的固体样品，具体的溶剂提取步骤如下每克样品加蒸馏水5-30ml使溶，加5-30ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
7.如权利要求1或2所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，对粘性液体样品，具体的溶剂提取步骤如下每毫升样品加丁酮1-10ml，振摇，离心，蒸干上清液，向丁酮提取物中加蒸馏水1-10ml使溶，向混悬液中加1-10ml正己烷，振摇，离心，蒸干上清液，得到正己烷提取物；向下层溶液加1-10ml乙醚，振摇，离心，蒸干上清液，得到乙醚提取物；向下层溶液加1-10ml丁酮，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
8.如权利要求1或2所述的中药红外指纹图谱鉴别技术，其特征在于，对仅含水溶物的液体样品，具体的溶剂提取步骤如下每毫升样品加丁酮1-10ml，振摇，离心，蒸干上清液，得到丁酮提取物。
全文摘要
中药红外指纹图谱鉴别技术,涉及天然植物或以天然植物原料为主的中药材、中成药、保健品、饮料、调料、各种提取物和添加剂的品种鉴定和真伪鉴别。包括将样品用溶剂提取,分别测试提取物的红外光谱,与相应对照品的红外光谱进行比较,所用溶剂是正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮,每克或每毫升样品分步加溶剂1－30毫升,提取1－30分钟,离心,蒸干上清液分别得到正己烷、和/或乙醚、和/或丁酮提取物。本发明的鉴别效果,对单味植物药可准确鉴别其种,对不同产地、不同采集期和不同加工方法等只要其成分有明显的变化均可提供鉴别信息;对中成药可准确鉴别其处方的真实性和完整性。
文档编号G01N21/35GK1327154SQ0111516
公开日2001年12月19日 申请日期2001年7月23日 优先权日2001年7月23日
发明者田进国 申请人:山东大学