专利名称：保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及中药组合物领域，特别是涉及一种保护肝脏、预防肝损伤的中药组合 物、其制备方法及应用。
背景技术：
中医中药为中华民族的繁衍昌盛作出了巨大的贡献。近年来，中药作为“绿色’"天 然”药物越来越受到国际医药学界的重视。随着国际交流的频繁，中药在海外保健品市场 及治疗领域逐渐占有一席之地。然而“绿色” “天然”并非是“安全”的，随着中药的广泛应 用，某些中药的毒副作用也日益受到关注。前几年受到广泛关注的龙胆泻肝汤中的关木通被检测出对人体肾脏有损伤，继而 青木香、马兜铃等药也被检查出对人体有副作用，引起人们对中药用药的重视。据报道对肝 脏有损伤的中药除了雷公藤、千里光、川楝子、黄药子之外，还有一些中药也被认为有肝毒 性，譬如生首乌、桅子、苍耳子、苍术、薄荷、艾叶、石榴皮、贯众等，但是这些毒性多是从临床 医生的印象中得来，缺少可靠的临床资料和毒理实验加以证实。在上述中药中，有些属常用 中药，临床应用广泛，甚至还是治疗肝病的常用药。例如，桅子从古至今在临床上运用广泛 并具有卓越疗效，在医圣-张仲景所著的《伤寒论》中，相当多的方剂中都有桅子的配伍使 用，尤以在《伤寒论·太阳病中篇》的应用最为广泛。由于桅子清热解毒功效显著，有较好 的降低转氨酶活性和胆红素的作用，现代肝病医生在临诊治疗急慢性肝炎时常喜将其作为 要药应用。因近年来有不少文献报道，桅子具有肝毒性，大剂量使用，会造成肝脏损害。由此 给临床医生带来困惑，遣方用药不敢使用桅子，从而影响临床疗效。然而，有关桅子肝毒性 的实验研究的桅子用量超出临床常用量的数十倍，与临床应用剂量相去甚远。常用量的桅 子是否会损伤肝脏，目前尚无研究报道。能否通过中药配伍，既发挥桅子的临床疗效，又避 免其损伤肝脏的毒副作用，现有的文献也缺乏报道。因此，需通过动物实验，来观察临床常 用剂量的桅子对正常小鼠和急性肝损伤小鼠的肝毒性，并以健脾保肝中药相配伍，观察用 桅子治疗急性肝损伤模型小鼠的同时，药物的肝毒性是否能够避免。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物、其制 备方法及应用。通过“知肝传脾，当先实脾”的中医治法理论指导，按照《金匮要略》中肝病 补用酸，助用焦苦，益以甘味之药调之的原理，选用黄芪、白术、茯苓、甘草、五味子等5味药 食两用的中药组成复方，取名健脾保肝方。经动物实验肝脏病理学研究证实，该方本身没有 肝毒性，且有一定的预防CCl4所致的小鼠急性肝损伤的作用。该方既能减轻桅子对正常小 鼠的肝损害，又能协助常规剂量的桅子预防治疗CCl4所致的小鼠急性肝损伤，因此，本发明 具有安全、有效、价廉等特点，适合化学性和药物性肝损伤患者服用。为解决上述技术问题，本发明的一种保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物，包括以下重量份的原料药制成炙黄芪20份 30份、白术10份 15份、茯苓10份 15份、甘草 10份 15份、五味子10份 15份。优选的中药组合物重量份的原料药为炙黄芪20份、白术10份、茯苓10份、甘草 10份、五味子15份，该中药组合物称为“健脾保肝方”。另外，本发明的中药组合物还可与桅子组合，即本发明的中药组合物还可以由以 下重量份的原料药制成炙黄芪20份 30份、白术10份 15份、茯苓10份 15份、甘草 10份 15份、五味子10份 15份、桅子9份 18份。 优选的中药组合物重量份的原料药为炙黄芪20份、白术10份、茯苓10份、甘草 10份、五味子15份，桅子18份。本发明的保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物的制备方法，包括将所述重量份的原料药加水煎煮，浓缩至浓度相当于生药0. 55 0. 75g · πιΓ1。本发明的中药组合物可用于治疗的主要适应症是预防肝损伤，因此，该组合物可 用于制备预防肝损伤药物。本发明的中药组合物可以采用中药制剂的常规方法制备成不同剂型的内服制剂 (如颗粒剂、片剂、胶囊剂或口服液)，其用量和疗程可根据剂型、患者的年龄、疾病的轻重 程度作适当调整，一般为每日剂量相当于该方生药60g，可分3次口服，以1个月为一个疗 程，可连续使用6个疗程或更长时间。本发明应用中医基础理论结合现代医学及科学技术手段，并依据《金匮要略》云
“夫肝之病，补用酸，助用焦苦，益用甘味之药以调之......”，肝为刚脏，五行属木，以疏为
用。肝之为病，易克土传变侮脾。基于“未病防传，已病防变”的观念，治肝病当先实脾，安 其未受邪之脾脏，使肝木不侵犯脾土。脾为后天之本，健脾也可以养木。本发明选用黄芪、白术、茯苓、甘草、五味子等5味中药组成复方，取名健脾保肝 方。黄芪性味甘温，在《神农本草经》中列为上品，具有补气升阳、健脾益气、解毒、护肝 作用，在健脾保肝方中为君药。黄芪的主要成分为甙类、多糖及微量元素，临床及现代药理 方面，并具有保肝，利尿、抗衰老、降压、强心、扩张冠状血管、及全身末梢血管、抗菌、增强机 体免疫力等作用；炙用偏于走里，能补中益气、补气生血。在动物实验方面，黄芪可提高小鼠 的血清IgG(免疫球蛋白G)含量及体液免疫的作用，并对正常机体的抗体生成功能有明显 促进作用。在临床应用方面，以黄芪为主的复方，可使脾虚患者的IgG水平升高、慢性肝炎 患者IgG由治疗前水平下降上升到正常范围，并使免疫球蛋白含量升高。以黄芪口服液治 疗慢性肝炎可以有改善临床症状及降低血清丙氨酸转氨酶(ALP)并有效调节机体免疫的 功能；另一方面，可以使慢性乙型病毒性肝炎NK细胞活性及LTR(淋巴细胞转化率)的下降 和SIL22R(可溶性白细胞介素22受体)的升高，随病情加重而明显；黄芪对慢性乙型病毒 性肝炎轻度患者，有提高NK细胞活性、LTR和降低SIL22R的作用。提示黄芪能增强NK细 胞清除乙肝病毒的能力。白术性味甘苦微温，具有补脾、益胃、燥湿、和中的功效，并具有保肝作用，在健脾 保肝方中为臣药。临床上用以治疗脾胃气弱、泄泻、汗出、胎动不安等。现代药理研究发现， 白术含挥发油、维生素等成分，其挥发油中含苍术醇、苍术酮，能增加胃肠的分泌和蠕动，有 利肠胃的消化，因而能保护肝脏，促进血液循环和降低血糖；并能能调节神经系统，常食能补益人体，增强正气。白术尚且明显提高机体的细胞免疫和体液免疫功能。在动物实验方 面，白术多糖PAM作用于体内及体外对小鼠脾淋巴细胞调节作用，结果显示白术多糖PAM 在一定浓度范国内能单独激活或协同ConA (刀豆素A) /PHA (植物血球凝集素)促进正常小 鼠淋巴细胞转化并能明显提高IL_2(白介素-2)分泌的水平。PAM对氢化可的松造成的免 疫抑制小鼠淋巴细胞的增殖功能有恢复作用。同时还发现白术多糖PAM对淋巴细胞的调节 与肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素相关。在机体防御方面，白术含有大量T淋巴细 胞、B淋巴细胞及巨噬细胞。因免疫功能低下而产生致敏淋巴细胞和抗体，白术能清除衰老 细胞和微生物等物质。白术挥发油能增强小鼠DNCB(2，4-二硝基氯苯)所致迟发型超敏反 应，显著提高小鼠腹腔巨噬细胞EA花环率并可提高巨噬细胞的活性，增强机体非特异性免 疫功能，抑制癌细胞的生长。茯苓自古作为食品当药材，《神农本草经》将其收载，列为“上品”。性味甘淡平，入 心、脾、肺经，具有补脾健胃、渗湿利水、保肝作用，并且有激素样作用和降酶作用，在健脾保 肝方中为佐药。茯苓药性平缓，补而不峻，利而不猛，既能扶正，又能祛邪，为较佳的补虚防 病要药。现代药理方面，茯苓聚糖可增强人体免疫功能；茯苓多糖具有抗寒和抗疲劳作用。 在大鼠试验证明，茯苓能提高巨噬细胞的吞噬功能，有防癌抑癌作用，并且有抗菌、降血糖 和降低胃酸、预防胃溃疡等作用。茯苓素在小鼠体内外能增强经BCG(卡介苗)预先激活巨 噬细胞产生的TNF(肿瘤坏死因子)能力，且有显著的剂量依赖性关系其在小鼠体内对移植 性肿瘤细胞有明显的抑制性作用，其抑制作用与TNF的水平呈正相关。甘草也被《神农本草经》列为上品。其性味甘平，具有补中益气、清热解毒、止咳润 肺。本品药性平和通行十二经脉，调和诸药，故又名国老，在健脾保肝方中为使药。现代药理 研究发现，甘草及甘草甜素对CCI4及化学致癌剂甲基-氨偶氮苯所致的肝损伤和肝癌有明 显的保护作用。甘草酸具有抑制肝脏损伤的作用，其对慢性肝炎的降酶效果已被确认，甘草 酸的降解酶作用在给药后即可出现，于8hr后转氨酶达到最低值；推测其作用机制是对肝 细胞膜的直接保护作用。进一步的研究证明，甘草酸保护肝细胞膜的机制是通过抑制磷脂 酶的活性发挥抗炎作用实现的。对肝炎病毒的作用，研究证实，甘草酸具有抑制肝脏损伤的 作用。临床运用方面，甘草酸二胺经随机配对治疗研究显示，其降低慢性病毒性肝炎病人的 ALT (谷丙转氨酶)效果显著，静脉给药Iw之内即可见效，经2m治疗，85 %以上的病人ALT 可恢复正常，明显优于单胺制剂，用药后血清SB(间接胆红素)也同步恢复正常，且在疗程 后期可明显降低Y球蛋白。经肝活检对照实验研究表明，用药后慢性乙型、慢性丙型肝炎 患者均有80%左右的病人肝组织学得到改善，主要是炎症细胞浸润减少、肝细胞变性、坏死 减少。五味子在《神农本草经》也名忝上品，为著名的滋补性中药。因其果实甘、酸、辛、 苦、咸五味俱全，故名五味子。具有敛肺滋阴、生津涩精、益气强阴、养五脏、降酶作用，为健 脾保肝方中的引经药。现代药理提示，五味子对动物和人的神经系统功能有调节作用，可促 进蛋白质和肝糖原的生成，并对化学毒物的肝损害起保护作用，其制剂能促进肝糖原异生， 并能促进肝糖原分解，使脑、肝、肌肉中果糖和葡萄糖的磷酸化过程加强。在动物实验方面， 小鼠口服五味子乙醇提取物，每日1次，连续3d后，由腹腔注射苯丙氨酸，发现其渗入肝脏 蛋白质速率显著增加，表明蛋白质合成增加。大鼠注射CCl4后产生肝小叶坏死，嗜碱质、线 粒体DNA、糖原、酸性磷酸酶、ATP酶、5-核苷酸酶、琥珀酸脱氢酶的活性均降低，经五味子制
5剂治疗后，肝小叶坏死区缩小，嗜碱性、线粒体和糖原增多，各种组织化学酶活性增高，显示五味子乙醇提取液对大鼠由014引起的高SGPT(ALT，谷丙转氨酶)有明显的降低作用。预 先给家兔五味子乙醇提取液，可预防CCl4引起的小鼠SGPT升高。五味子多糖对荷瘤小鼠 的免疫器官有较好的保护作用，并能抑制肿瘤的生长，具有预防和治疗癌症的潜在价值，其 在抑瘤作用的同时，还对脾脏、胸腺有刺激增生作用，由此提高其机体的免疫功能。在临床 运用方面，患慢性肝病时，尤其是肝硬化时常有不同程度的肠道菌群失调，失调程度往往与 肝功能损害程度有关。中药五味子能有效地调整肠道菌群，预防慢性肝损伤，对肝脏起保护 作用，是一理想的微生态调节剂和肝脏保护剂。在提高药物疗效方面，古代医家认为只有将 五味子打碎后使用，才能取得五味子内含的五种滋味，而五种滋味是保证五味子能够充分 发挥疗效的根本。明代陈嘉谟在其《本草蒙筌》中曰“五味子，宜预捣碎(则五味俱)方投 煎。，，清代杨士泰在其《本草述钩元》中对此论述更详，认为“五味子皮肉甘酸，核中辛苦，五 味皆具，味全者真。入药必打碎核，方五味备...”。由此可见，使用五味子时必须打碎其核 (种子)，才能够确保五味子的疗效。李时珍在其《本草纲目》中云“五味子，酸咸入肺而补 肾，辛苦入心而补肺，甘入中宫而益脾胃”。不难看出，五味子的疗效是通过所含的五种滋味 相互结合协同作用而体现出来的，五味皆有其用，缺少其一即可能使五味子的疗效受到影 响。若不将其打碎则难以煎出其味，故必须捣碎入煎。综观健脾保肝方，含有四君子汤方之意，体现肝病容易传变，因此先安未受邪之脾 脏，使脾不受木邪来乘。健脾保肝全方具有补气升阳、益气健脾、保肝降酶等作用。该方单 独用于正常小鼠，都未显示其有升高转氨酶的活性和胆红素含量作用，该组小鼠肝脏结构 正常，肝细胞形态无明显异常。该方与高剂量桅子水提液同用，有效地防止了高剂量桅子造 成的肝细胞变性，降低了桅子导致的转氨酶活性和胆红素含量的升高，显示健脾保肝方作 为桅子减毒配伍方剂的价值。本发明的中药组合物经动物实验证实具有减轻肝损伤的作用，具有如下优点1)健脾保肝方性味酸、苦、甘具备，合于《金匮要略》肝病补用酸，助用焦苦，益以甘 味之药调之的原理；2)通过培土濡养后天之本以保肝，体现了中医“知肝传脾，当先实脾”和“治病必 求于本”的治则，先安未受邪之地的“治未病”思想；3)健脾保肝方既能减轻桅子对正常小鼠的肝损害，又能协助桅子预防治疗014所 致的小鼠急性肝损伤；4)健脾保肝方的组方中药均为药食两用之品，甚至桅子也被列入“既是食品又是 药品的物品名单”，可以按常规剂量放心使用。
下面结合附图与具体实施方式
对本发明作进一步详细的说明图1是实施例7中的各组小鼠肝脏的病理改变图(HE染色，X400)，其中，Ι-a为 正常组，Ι-b高剂量组，1-c高剂健脾组，Ι-d健脾保肝组；图2是实施例7中的连续造模6w各组生化指标的变化图，其中，2-a中，与同期正 常组比较，** =P < 0.01，与同期高剂量桅子水提液模型组比较，# :P < 0. 05 ；2-b中，与同 期正常组比较，* =P < 0. 05 ；2-c中，与同期正常组比较，* =P < 0. 05 ；2-d中，与同期正常组比较，** :P < 0. 01，* :P < 0. 05 ；图3是实施例8中的各组小鼠肝脏的病理改变及健脾保肝方对CCl4肝损伤的预 防结果图(HE染色，X200)，3-a为正常组，3-b为模型组，3-c为中剂量组，3-d为健脾保肝 组，3-e为桅子保肝组；图4是实施例8中的各组生化指标的变化图，其中，4-a中，与正常组比较，** :P < 0. 01，与模型组比较，#:P<0. 05, ## :P<0. 01 ；4-b中，与正常组比较，** :P < 0. 01，与 模型组比较，# =P < 0. 05, ## =P < 0. 01 ；4-c 中，与正常组比较，* =P < 0. 05，** =P < 0.01,
与模型组比较，没有差异性；4-d中，与正常组及同期模型组比较，没有差异性。
具体实施例方式实施例1称取原料药炙黄芪20g、白术10g、茯苓10g、甘草10g、五味子10g，加水煎煮2次， 可浓缩至浓度相当于生药0. 55g · Hir10实施例2称取原料药炙黄芪25g、白术12. 5g、茯苓12. 5g、甘草12. 5g、五味子12. 5g，加水 煎煮2次，可浓缩至浓度相当于生药0. 65g · HiF10实施例3称取原料药炙黄芪30g、白术15g、茯苓15g、甘草15g、五味子15g，加水煎煮2次， 可浓缩至浓度相当于生药0. 75g · Hir10实施例4称取原料药炙黄芪20g、白术10g、茯苓10g、甘草10g、五味子10g、桅子9g，加水 煎煮2次，可浓缩至浓度相当于生药0. 55g · HiF10实施例5称取原料药炙黄芪25g、白术12. 5g、茯苓12. 5g、甘草12. 5g、五味子12. 5g、桅子 13. 5g，加水煎煮2次，可浓缩至浓度相当于生药0. 65g · HiF10实施例6称取原料药炙黄芪30g、白术15g、茯苓15g、甘草15g、五味子15g、桅子18g，加水 煎煮2次，可浓缩至浓度相当于生药0. 75g · HiF10实施例7对桅子肝毒性的预防作用1.材料1. 1实验动物c57bl雄性小鼠60只，体重20 士 2g，SPF级，由上海中医药大学实验动物中心提供， 动物合格证号SCKK (沪)2007-0009。1. 2实验药物的制备高剂量桅子水提液取桅子200g，加入适量清水，煎煮2次，将2次煎煮的药液浓 缩成高浓度水提液，浓度0. 298g · mr1.0. 65g -πιΓ1健脾保肝方制法取甘草42g，白术42g，茯苓42g，炙黄芪84g，五味子 63g，加适量水煎煮2次，浓缩至浓度相当于生药0. 65g · πιΓ1.高剂量桅子合健脾保肝方取炙黄芪60g、白术30g、茯苓30g、甘草30g、五味子
745g，桅子108g，加适量水煎煮2次，浓缩至浓度相当于生药0. 606g · πιΓ1。中药提取液的制备由上海中医药大学科学实验中心协助完成。1. 3主要仪器和设备自动脱水机(ASP300)、轮转切片机(RM2035)、包埋机(EGl 160)、浸蜡机(HI 1210)、烤片机(HI 1220)均为德国Leica公司。低温冰箱(_70°C )，Forma scientific产品。层 析柜，Revco公司。台式离心机(microfuge lite)，Beckman公司产品。AA-200分析天平， Densere仪器公司产品。Olympus BX40光学显微镜，日本Olympus公司。煮药设备由校科 技实验中心提供。2.方法2. 1动物实验将小鼠随机分为正常组、高剂量桅子水提液组(以下简称高剂量组)、高剂量桅子 合健脾保肝方组(以下简称高剂健脾组)、健脾保肝方组(简称健脾保肝组)，每组均为15 只。正常组小鼠灌胃饮用水，其余各组小鼠每天灌胃相应药物，灌胃量为0. 2ml ·10Ρ，连续 6w(M )，6w后处死各组小鼠。每只小鼠予2% (2g/100ml)戊巴比妥钠按照0. 02ml · lOg-1 腹腔注射麻醉，眼球取血。将血液滴入1. 5ml EP管，室温静置2hr，以3000rpm，15min离 心。取血清，置于-70°C冰箱备用。将小鼠脊椎脱白处死，打开腹腔，取肝脏右叶，切取 0.6X0. 6X0. 2mm3组织2块，分别放入10% (体积百分数)甲醛固定液内。剩余肝脏组织 放入1. 5ml EP管，置于_70°C冰箱备用。2. 2观察指标2. 2. 1肝脏组织病理学观察将已固定的肝脏组织标本分别脱水、浸蜡、包埋、切片厚4μ m，作HE染色(苏木 精_伊红染色)，光镜下观察肝脏病理变化。 2. 2.2血清生化学指标检测ALT (谷丙转氨酶)活性采用赖氏法；AST (谷草转氨酶)活性采用赖氏法；Alb (白 蛋白)含量采用溴甲酚绿法；TBiL(总胆红素)含量采用苯甲酸钠-咖啡因比色法，由曙光 医院检验科自动生化分析仪检测。2. 3 统计利用SPSS12. 0软件中的ANOVA程序进行单因素方差分析，并用LSD程序进行两两 比较。3.结果3. 1各组小鼠肝脏显微观察正常组小鼠和健脾保肝方组小鼠的肝脏肝组织结构清晰，肝板呈放射状排列，肝 细胞形态正常。以高剂量桅子水提液造模6w后，模型组小鼠肝组织结构紊乱，肝细胞普遍 肿胀变性，多为严重的水样变甚至气球样变，少数样本以脂肪变为主，个别样本肝细胞变性 较轻，肝窦狭窄，枯否氏组细胞增生，淋巴细胞浸润。同时用健脾保肝方干预的高剂量桅子 合健脾保肝方组小鼠的肝组织结构破坏较轻，15个样本中有8个肝小叶结构正常，其余小 鼠肝细胞变性较轻，多为胞浆疏松的水样变，仅1例以脂肪变为主，受累肝细胞在半数以 下，多位于I带，肝窦狭窄少见多为扩张(见图1)。3. 2各组小鼠生化指标的变化
高剂量组小鼠的ALT和AST活性以及TBiL含量均明显比正常组升高，2组相比有 显著性差异(P < 0. 01，P < 0. 05)。健脾保肝组这些指标的变化不大，与正常组无明显差 异。高剂健脾组这些指标升高的幅度比高剂量组低，与正常组相比，无显著性差异(见表 1)。表16w各组小鼠ALT和AST活性、和TBiL和Alb含量的变化(mean士S) 注与正常组比较，*:P < 0. 05，** =P < 0. 01 ；与模型组比较，#:P<0. 05。由表1和图2可知，以高剂量桅子水提液连续灌胃小鼠6w后，高剂量组有明显的 肝损伤，损伤以水样变为主，少数样本以脂肪变为主，肝窦狭窄。高剂健脾组肝组织结构破 坏较轻，15个样本中有8个肝小叶结构正常，其余小鼠肝细胞变性较轻，多为胞浆疏松的水 样变，提示健脾保肝方可预防高剂量桅子水提液造成的肝伤害。健脾保肝方连续灌胃小鼠 6w后，小鼠肝脏病理与正常组无异，说明健脾保肝不会加重肝脏的负担，可以放心使用。实施例8对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的预防作用1.材料1. 1实验动物健康SPF级c57bl雄性小鼠48只，体重20士2g，由上海中医药大学实验动物中心 提供。动物合格证号SCKK (沪)2007-0011。1. 2实验药物四氯化碳溶液(Carbon tetrachloride, CCl4)，分析纯，分子量153. 82，上海国药 集团化学试剂有限公司，批号T20070323。橄榄油(Oliveoil)，化学纯，上海国药集团化学 试剂有限公司，批号F20070307。1. 2. 1中剂量桅子水提液及自拟方健脾保肝方的制备中剂量桅子水提液取250ml高剂量桅子水提液(参见实施例7)，加等量蒸馏水 稀释，制备成中浓度桅子水提液0. 149g · Hir10健脾保肝方取甘草42g，白术42g，茯苓42g，炙黄芪84g，五味子63g，加适量水煎 煮2次，浓缩至浓度相当于生药0. 65g · HiF101. 2. 2桅子合健脾保肝方的制备取炙黄芪20g、白术10g、茯苓10g、甘草10g、五味子15g，桅子18g，加适量水煎煮 2次，浓缩至浓度0. 55g · ml—1。中药提取由上海中医药大学科学实验中心协助完成。1. 3主要仪器和设备
自动脱水机(ASP300)、轮转切片机(RM2035)、包埋机(EGl 160)、浸蜡机(HI 1210)、 烤片机(HI 1220)均为德国Leica公司。低温冰箱(_70°C )，Forma scientific产品。层 析柜，Revco公司。台式离心机(microfuge lite)，Beckman公司产品。AA-200分析天平， Densere仪器公司产品。Olympus BX40光学显微镜，日本Olympus公司。煮药设备由校科 技实验中心提供。2.方法2. ICCl4模型的建立将小鼠随机分为正常组，CCl4组(以下简称模型组)、中剂量桅子水提液组( 以下 简称中剂量组)、健脾保肝组、桅子合健脾保肝方组(以下简称桅子保肝组)。除正常组为 8只小鼠外，其余每组均为10只。正常组小鼠灌胃饮用水，其余小鼠均以相应药物灌胃，灌 胃量均为0. 2ml · lOg—1，连续5d。第6d，除正常组小鼠，其余各组小鼠给予0. 5% (体积百 分数)CCl4/橄榄油溶液，0. Iml · log—1腹腔注射，腹腔注射后，所有小鼠禁食17hr，但仍给 予饮用水。17hr后，按照0.02ml · lOg—1剂量，小鼠予2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，眼球 取血。将血液滴入1. 5ml EP管，室温静置2hr，将装有血液的EP管，以3000rpm，15min离 心。抽取血清，置于-70°C冰箱备用。将小鼠脊椎脱臼处死，打开腹腔，取肝脏右叶，切取 0.6X0.6X0. 2mm3组织2块，分别放入10%甲醛固定液内。余肝脏组织放入1. 5ml EP管， 置于-70°C冰箱备用。2. 2观察指标2. 2. 1肝脏组织病理学观察将已固定的肝脏组织标本分别脱水、浸蜡、包埋、切片厚4 μ m，HE染色，光镜下观 察肝脏病理变化，自拟肝细胞变性分级标准(见表2)。表2肝细胞变性分级标准
^m\urn ^
m.无变性肝细胞
I级变性肝细胞占视野1/4以下II级变性肝细胞占视野1/4 1/2
III级变性肝细胞占视野1/2 3/4
IV级变性肝细胞占视野3/4以上2. 2. 2生化检测ALT活性采用赖氏法；AST活性采用赖氏法；Alb含量采用溴甲酚绿法；TBiL含量 采用苯甲酸钠_咖啡因比色法，由曙光医院检验科自动生化分析仪检测。2. 3 统计利用SPSS12. 0软件中的ANOVA程序进行单因素方差分析，并用LSD程序进行两两 比较。半定量分析采用Ridit方法统计。3.结果3. 1桅子水提液和健脾保肝方对急性肝损伤小鼠的治疗作用的病理观察3. 1. 1各组小鼠大体观察
注射CCl4前各组小鼠外观和活动度均无明显不同。第5d腹腔注射CCl4后，除正 常组外，各组小鼠的活动力降低。第6d模型组的小鼠活动力明显低于其他各组。3. 1. 2各组小鼠肝脏肉眼观察正常组小鼠肝脏肉眼观察色泽鲜红、质软、边缘锐利，模型组小鼠肝脏边缘稍钝， 肝脏稍有肿胀。其余各组肝脏大体变化不明显。3. 1. 3各组小鼠肝脏显微观察结果如图3所示，正常组小鼠肝小叶结构正常，肝板呈放射状排列，肝细胞形态正 常。模型组肝板排列紊乱，肝细胞普遍变性，水样变和以小泡性为主的脂肪变均明显，部分 肝细胞气球样变，变性肝细胞多位于肝腺泡I带和III带，严重者II带肝细胞也有变性。有散 在的点状或灶状坏死及炎细胞浸润。中剂量组肝细胞损伤情况较模型组轻，为在I带的小 泡性脂肪变或II带的水样变，气球样变和细胞坏死少见，肝窦狭窄。健脾保肝组肝损情况 是肝细胞脂肪变者多在I带，在II带内观察到的气球样变肝细胞很少。桅子保肝组肝细胞 的脂肪变性及肝细胞的气球样变性很少，肝细胞坏死情况未见，为4组中病理改变最轻者。3. 1. 4各组小鼠肝细胞变性半定量分析表3显示正常组小鼠肝细胞没有变性。模型组小鼠肝细胞变性严重，多为IV级，与 正常组比较差异显著(P <0.001)。中剂量的桅子水提液和健脾保肝方可以减轻CCl4造成 的肝细胞变性，这2组的肝细胞变形程度较模型组低，但是统计学差异不明显。桅子保肝组 的肝细胞变性明显较模型组轻(P < 0.01)，肝细胞I、II级变性的例数占多数，没有IV级变 性的样本。表3各组肝细胞变性程度
肝细胞变性程度
组别Π _
0IIIIIIW正常组880000模型组***1000127中剂量组1000343健脾保肝组1000235栀子保肝组##1003340注与正常组比较，***:Ρ< 0.001;与模型组比较，##:Ρ<0. 01。3. 2桅子水提液和健脾保肝方对急性肝损伤小鼠的治疗作用和肝毒性的生化指标 的观察由表4和图4所示，CCl4注射后，模型组小鼠ALT和AST活性及TBiL含量显著升 高，与正常组相比有显著性差异(均P<0.01)。中剂量组的ALT和AST活性也升高，但比 模型组低，有统计学差异(P < 0. 05, P < 0. 01)，TBiL含量升高与模型组相似。健脾保肝组 ALT活性和TBiL含量升高明显，与正常组有显著性差异(均P < 0. 01)，AST活性的升高幅
11度则较模型组明显低(P < 0. 05)桅子保肝组小鼠ALT和AST活性及TBiL含量也升高，但 比模型组明显低，其中转氨酶活性与模型组相比有显著性差异(均P<0.01)。Alb含量在 4组间无明显差异。表4各组小鼠ALT和AST活性、和TBiL和Alb含量的变化(mean士S) 注与正常组比较，*:P < 0. 05，** =P < 0. 01 ；与模型组比较# :P < 0. 05，## =P < 0. 01CCl4 一次注射后造成小鼠急性肝损伤，ALT和AST活性以及TBiL含量明显升高， 肝细胞变性严重，模型组与正常组相比差异显著(均P <0.01)。中剂量的桅子水提液能有 效地抑制CCl4导致的转氨酶活性升高，中剂量组ALT和AST活性均较模型组组明显低下(P < 0. 05，P < 0. 01)，病理观察也显示该组肝细胞变性轻于模型组，但统计学差异不明显，显 示桅子预防小鼠急性肝损伤具有一定的药效。健脾保肝方有降低急性肝损伤小鼠转氨酶活 性的作用，该组AST活性与模型组的相比有统计学差异(P < 0.05)，但是降酶幅度稍逊于 桅子，病理变化与中剂量组相似。该方与中剂量的桅子同用，降酶的幅度在3个用药组中最 大，与模型组统计学差异显著(P < 0. 01)，该组肝细胞变性在3个用药组中最轻，与模型组 同样有显著性差异(P <0.01)。健脾保肝方的作用可能体现在二个方面，与桅子的协同作 用或减少桅子的肝毒性。虽然本实施例无法对这二个作用加以鉴别，但可以提示中剂量的 桅子可有效地预防CCl4所致的小鼠急性肝损伤，健脾保肝方与桅子配伍可以使预防作用更 佳。
权利要求
一种保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物，其特征在于包括以下重量份的原料药制成炙黄芪20份～30份、白术10份～15份、茯苓10份～15份、甘草10份～15份、五味子10份～15份。
2.如权利要求1所述的保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物，其特征在于所述的中药 组合物重量份的原料药为炙黄芪20份、白术10份、茯苓10份、甘草10份、五味子15份。
3.如权利要求1所述的保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物，其特征在于所述的中药 组合物原料药还包括重量份为9份 18份的桅子。
4.如权利要求3所述的保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物，其特征在于所述的中药 组合物重量份的原料药为炙黄芪20份、白术10份、茯苓10份、甘草10份、五味子15份， 桅子18份。
5.如权利要求1至4任一项所述的保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物的制备方法，包括将所述重量份的原料药加水煎煮，浓缩至浓度相当于生药0. 55 0. 75g · HiF10
6.如权利要求1-4任一项所述的保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物在制备预防肝损 伤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种保护肝脏、预防肝损伤的中药组合物、其制备方法及应用，该组合物包括以下重量份的原料药制成炙黄芪20份～30份、白术10份～15份、茯苓10份～15份、甘草10份～15份、五味子10份～15份；其制备将所述重量份的原料药加水煎煮，浓缩至浓度相当于生药0.55～0.75g·ml-1。经动物实验肝脏病理学研究证实，本发明的健脾保肝方本身没有肝毒性，且有一定的预防CCl4所致的小鼠急性肝损伤的作用。该方既能减轻栀子对正常小鼠的肝损害，又能协助常规剂量的栀子预防治疗CCl4所致的小鼠急性肝损伤。本发明安全、有效、价廉，适合化学性和药物性肝损伤患者服用。
文档编号A61K36/744GK101869603SQ20091005713
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月24日 优先权日2009年4月24日
发明者徐列明, 林庆勋 申请人:上海中医药大学附属曙光医院