专利名称：片仔癀外用制剂的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物的检测方法，特别涉及中药片仔癀外用制剂的检测方法。
背景技术：
片仔癀外用制剂为全国独家生产及中保品种1998年收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十八册》(标准编号WS3-B-3441-98)，目前尚需要具备更好稳定性、重现性和专属性的质量检测方法对该品种的质量进行有效的控制。发明内容
本发明目的在于提供中药片仔癀外用制剂的检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的
片仔癀外用制剂检测方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种
鉴别取片仔癀外用制剂3_8g，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇5_15ml，振摇使溶散，超声处理25-35分钟后，置冰浴中冷却，取出，迅速过滤，取滤液3-6ml，水浴浓缩至 Ι-aiil，作为供试品溶液；另取胆酸、去氧胆酸对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇 (18-22 22-27 1-3 2-4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
含量测定人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，以0. 2%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱(见下表)，从0到75分钟乙腈-0. 2%磷酸 (15 85) — (35 65)，从 75 到 95 分钟乙腈-0.2%磷酸(35 65) — (70 30)；柱温 200C ；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)
0 7515—3585-6575 9535-7065—30
对照品溶液的制备，取人参皂苷对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，用甲醇制成每Iml含人参皂苷Rgl 0. lmg、人参皂苷Rbl 0. Img的混合溶液，即得；供试品溶液的制备，取片仔癀外用制剂4-8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇20-40ml，超声处理20-40分钟，振摇使分散均勻，加热回流0. 5-1小时，取出，置冰浴中冷却，迅速过滤于50ml量瓶中，用甲醇洗涤数次，放置至室温，用甲醇至刻度，摇勻，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；片仔癀外用制剂每克含人参皂苷Rgl (C42H72014)和人参皂苷Rbl (C21ffi8N202 -2HC1)的总量计，不得少于 0. 70mgo
本发明质量检测方法优选如下鉴别和/或含量测定的一种或几种
鉴别取片仔癀外用制剂5g，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇10ml，振摇使溶散，超声处理30分钟后，置冰浴中冷却30分钟，取出，迅速过滤，取滤液細1，水浴浓缩至anl， 作为供试品溶液；另取胆酸、去氧胆酸对照品，加无水乙醇制成每Irnl各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇 (20 25 2 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光斑点。
含量测定人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0. 2 %磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，从0到75分钟乙腈-0. 2 %磷酸 (15 85) — (35 65)，从 75 到 95 分钟乙腈-0.2%磷酸(35 65) — (70 30)；；柱温20°C ；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000。
对照品溶液的制备，取人参皂苷Rgl对照品和人参皂苷Rbl对照品适量，精密称定，用甲醇制成每Iml含人参皂苷RglO. lmg、人参皂苷RblO. Img的混合溶液，即得；供试品溶液的制备，取片仔癀外用制剂约6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇30ml，超声处理 (功率250W，频率33kHz) 30分钟，振摇使分散均勻，加热回流1小时，取出，置冰浴中冷却20 分钟，迅速过滤于50ml量瓶中，用甲醇洗涤数次，放置至室温，用甲醇至刻度，摇勻，即得； 测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得 ’片仔癀外用制剂每克含人参皂苷Rgl(C42H72014)和人参皂苷Rbl (C21ffi8N202 · 2HC1)的总量计，不得少于0. 70mg。
本发明片仔癀外用制剂是由如下重量份的原料药组成
片仔癀粉220 450重量份、蛇药片200 500重量份。
本发明中药组合物原料药优选如下重量份
片仔癀粉250重量份、蛇药片450重量份；或
片仔癀粉330重量份、蛇药片350重量份；或
片仔癀粉400重量份、蛇药片250重量份。
所述片仔癀粉和蛇药片均可从市场购得。所述蛇药片是指季德胜蛇药片， 收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十五册107页，标准编号 WS3-B-2914-98。
取上述本发明中药组合物原料药，按常规工艺，加入或不加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种外用剂型，如膏剂、擦剂、膜剂或酊剂等。
本发明片仔癀外用制剂软膏剂的制备方法为
按重量比例称取片仔癀粉，蛇药片；片仔癀粉，溶解，备用；蛇药片提取1-3小时， 取上清液备用；称取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐， 加入蛇药提取的上清液，加热至沸腾，边搅拌边加入上述片仔癀粉液，再次加热至沸腾，混勻成水相，备用；称取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、轻质液状石蜡500 750重量份，投入油相配料罐，加热至全部熔化，搅勻，备用；油相和水相乳化均勻后冷却，出料；灌装，即得膏剂。
图1 复方片仔癀外用制剂中胆酸、去氧胆酸的薄层色谱图2 三七皂苷R1对照品、复方片仔癀外用制剂样品色谱图3 人参皂苷和Rb1对照品、复方片仔癀外用制剂样品色谱图
图4 人参皂苷标准曲线图
下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1鉴别
实验考察用样品的规格为IOg/支；
薄层板(10X 20cm)实验室自制板，500 μ m，105°C活化 30min。
供试品色谱中，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，方法可行。结果见图1。
1、样品(批号081009)
2、样品(批号081110)
3、样品(批号081111)
4、缺胆酸、去氧胆酸和蛇药片阴性样品(来源厂家提供)
5、胆酸对照品(批号100078-200414来源中国药品生物制品检定所)
6、去氧胆酸对照品(批号110724-200207来源中国药品生物制品检定所)
7、胆酸、去氧胆酸混合对照品
实验例2含量测定
1仪器与试药
Waters高效液相色谱仪e26951998。超声波清洗器(型号KQ_300型，昆山市仪器有限公司)。色谱柱Waters SunFire C18 5ym 4. 6X250mm。人参皂苷！^对照品和人参皂苷Rb1对照品由中国药品生物制品检定所提供。方法学验证采用复方片仔癀外用制剂样品批号为081009。
2含量测定指标
根据高效液相实验结果发现样品中三七皂苷R1的含量比较低，同一样品浓度下其峰面积与人参皂苷Rg1和Rb1的峰面积相差较大(保留时间=R1 = 31.466minRgl = 35. 083min Rb1 = 65. 430min ；峰面积=R1 = 38495 Rg1 = 221890 Rb1 = 162336，见图 2)，而且分离度也不是很好，尚未达到基线分离，认为样品的三七含量以人参皂苷Rg1和人参皂苷 Rb1的总量计是合理的。
3对照品溶液的制备
由于对照品的峰面积是样品峰面积的两倍多，故将“加甲醇制成每Iml含 0. 15mgRgl和0. ISmgRb1的混合溶液……”改为“加甲醇制成每Iml含0. ImgRg1和0. ImgRb1 的混合溶液……”
4.重复性、稳定性和回收率等方法学考察验证。
4. 1专属性实验
供试品色谱中，在与人参皂苷和Rb1对照品色谱保留时间相应处，呈相同的色谱峰，结果见图3。该方法可行。
4. 2 线性
分别精密称取人参皂苷对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇溶解，制成每Iml含人参皂苷Rg1O. 2152mg和人参皂苷Rb1O. 1944mg混合对照品溶液(I)。精密吸取对照品溶液(I) Iml置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇勻即得混合对照品溶液(II)。 精密吸取对照品溶液(II)Iml置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度线，摇勻即得混合对照品溶液(III)。分别精密吸取对照品溶液⑴50μ 1、10μ 1、5μ 1，对照品溶液(ΙΙ)10μ1和对照品溶液(ΙΙΙ)20μ 1，同本发明方法色谱条件进行测定，结果见表1。以对照品进样量 X(Ug)为横坐标，峰面积积分值(mAU)为纵坐标，绘制标准曲线，结果见图4，人参皂苷Rg1 回归方程Y = 293364X+1806. 2，相关系数r = 0. 9999，表明人参皂苷在0. 04304 μ g 4. 304 μ g范围内呈良好的线性关系。人参皂苷Rb1回归方程Y = 240654X+1798.8，相关系数r = 1，表明人参皂苷在0. 03888 μ g ~ 3. 888 μ g范围内呈良好的线性关系。
表1人参皂苷Rg1, Rb1线性关系考察表人参皂苷Rg1对照品人参皂苷Rg,峰面积平人参皂苷Rb1对照品人参皂苷1 ,峰面积
权利要求
1.一种片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种鉴别取片仔癀外用制剂3-8g，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇5-15ml，振摇使溶散，超声处理25-35分钟后，置冰浴中冷却，取出，迅速过滤，取滤液3-6ml，水浴浓缩至Uml，作为供试品溶液；另取胆酸、去氧胆酸对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以18-22 22-27 1-3 2_4的正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，在105°C加热至斑点显色清晰，365nm置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；含量测定人参皂苷Rgl、人参皂苷Rbl照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0. 2%磷酸溶液为流动相 B，进行梯度洗脱，从0到75分钟乙腈-0.2%磷酸15 85 — 35 65，从75到95分钟乙腈-0.2%磷酸35 65 — 70 30 ；柱温20°C ；检测波长为203nm ；理论板数按人参皂苷Rgl 峰计算应不低于6000 ；对照品溶液的制备，取人参皂苷Rgl对照品和人参皂苷Rbl对照品适量，精密称定，用甲醇制成每Iml含人参皂苷Rgl 0. lmg、人参皂苷Rbl 0. Img的混合溶液，即得；供试品溶液的制备，取片仔癀外用制剂4-8g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇20-40ml，超声处理 20-40分钟，振摇使分散均勻，加热回流0. 5-1小时，取出，置冰浴中冷却，迅速过滤于50ml 量瓶中，用甲醇洗涤数次，放置至室温，用甲醇至刻度，摇勻，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；片仔癀外用制剂每克含人参皂苷Rgl (C42H72014)和人参皂苷Rbl (C21H28N202 · 2HC1)的总量计，不得少于0. 70mg ； 片仔癀外用制剂是由如下重量份的原料药组成 片仔癀粉220 450重量份、蛇药片200 500重量份；取上述本原料药，按常规工艺，加入或不加入常规辅料制备成软膏剂、擦剂、膜剂或酊剂。
2.如权利要求1所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种鉴别取片仔癀外用制剂5g，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇10ml，振摇使溶散，超声处理30分钟后，置冰浴中冷却30分钟，取出，迅速过滤，取滤液細1，水浴浓缩至anl，作为供试品溶液；另取胆酸、去氧胆酸对照品，加无水乙醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以20 25 2 3的正己烷-乙酸乙酯-醋酸-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇，在105°C加热至斑点显色清晰，365nm置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；含量测定人参皂苷Rgl、人参皂苷 Rbl照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.2%磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，从0到75分钟乙腈-0.2%磷酸 15 85 ^ 35 65，从 75 到 95 分钟乙腈-0. 2%磷酸；35 65 — 70 30;；柱温 20°C ； 检测波长为203nm ；理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000 ；对照品溶液的制备，取人参皂苷Rgl对照品和人参皂苷Rbl对照品适量，精密称定，用甲醇制成每Iml含人参皂苷RglO. lmg、人参皂苷RblO. Img的混合溶液，即得；供试品溶液的制备，取片仔癀外用制剂约6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇30ml，超声处理(功率250W，频率33kHz) 30分钟，振摇使分散均勻，加热回流1小时，取出，置冰浴中冷却20分钟，迅速过滤于50ml量瓶中，用甲醇洗涤数次，放置至室温，用甲醇至刻度，摇勻，即得；测定法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；片仔癀外用制剂每克含人参皂苷Rgl(C42H72014)和人参皂苷Rbl (C21ffi8N202 · 2HC1)的总量计，不得少于0. 70mg。
3.如权利要求1或2所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中原料药组成为片仔癀粉250重量份、蛇药片450重量份。
4.如权利要求1或2所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中原料药组成为片仔癀粉330重量份、蛇药片350重量份。
5.如权利要求1或2所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中原料药组成为片仔癀粉400重量份、蛇药片250重量份。
6.如权利要求1或2所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中片仔癀软膏剂由如下方法制成按重量比例称取片仔癀粉，蛇药片；片仔癀粉，溶解，备用；蛇药片提取1-3小时，取上清液备用；称取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇药提取的上清液，加热至沸腾，边搅拌边加入上述片仔癀粉液，再次加热至沸腾，混勻成水相，备用；称取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、轻质液状石蜡 500 750重量份，投入油相配料罐，加热至全部熔化，搅勻，备用；油相和水相乳化均勻后冷却，出料；灌装，即得膏剂。
7.如权利要求3所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中片仔癀软膏剂由如下方法制成按重量比例称取片仔癀粉，蛇药片；片仔癀粉，溶解，备用；蛇药片提取1-3小时，取上清液备用；称取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇药提取的上清液，加热至沸腾，边搅拌边加入上述片仔癀粉液，再次加热至沸腾，混勻成水相，备用；称取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、轻质液状石蜡 500 750重量份，投入油相配料罐，加热至全部熔化，搅勻，备用；油相和水相乳化均勻后冷却，出料；灌装，即得膏剂。
8.如权利要求4所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中片仔癀软膏剂由如下方法制成按重量比例称取片仔癀粉，蛇药片；片仔癀粉，溶解，备用；蛇药片提取1-3小时，取上清液备用；称取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇药提取的上清液，加热至沸腾，边搅拌边加入上述片仔癀粉液，再次加热至沸腾，混勻成水相，备用；称取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、轻质液状石蜡500 750重量份，投入油相配料罐，加热至全部熔化，搅勻，备用；油相和水相乳化均勻后冷却，出料；灌装，即得膏剂。
9.如权利要求5所述的片仔癀外用制剂的质量检测方法，其特征在于该方法中片仔癀软膏剂由如下方法制成按重量比例称取片仔癀粉，蛇药片；片仔癀粉，溶解，备用；蛇药片提取1-3小时，取上清液备用；称取甘油750 1100重量份、三乙醇胺60 100重量份，投入水相配料罐，加入蛇药提取的上清液，加热至沸腾，边搅拌边加入上述片仔癀粉液，再次加热至沸腾，混勻成水相，备用；称取白凡士林850 1200重量份、硬脂酸200 420重量份、轻质液状石蜡 500 750重量份，投入油相配料罐，加热至全部熔化，搅勻，备用；油相和水相乳化均勻后冷却，出料；灌装，即得膏剂。
全文摘要
本发明公开一种片仔癀的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定，鉴别片仔癀细粉制成作为供试品溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1或胆酸、去氧胆酸制成对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法测定，片仔癀外用制剂每克含人参皂苷Rg1(C42H72O14)和人参皂苷Rb1(C21H28N2O2·2HCl)的总量计，不得少于0.70mg。
文档编号A61P17/02GK102475727SQ20091009239
公开日2012年5月30日 申请日期2009年9月11日 优先权日2009年9月11日
发明者于娟, 夏松, 洪绯, 王少婷, 陈啟兰, 陈纪鹏 申请人:漳州片仔癀药业股份有限公司