专利名称：芦丁的新用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，涉及芦丁的新用途。
背景技术：
肝移植是治疗终末期肝病最有效的手段，肝移植体低温保存再灌注损伤是肝移植 术后肝原发性无功能(PFN)的重要原因，与细胞凋亡密切相关。目前人们针对凋亡发生的 各个环节，探索各种防治方法，从而减轻肝移植体保存再灌注损伤成为了研究的热点。芦丁，异名芸香甙、维生素P、紫槲皮甙(Rutosidejiolaquereitrin)存在于芸香 科植物芸香Ruta graveolens L.全草挥发油；或豆科植物槐花kphora japonica L.果实 (槐角)的主要成分；或金丝桃科植物红旱莲Hypericum aseyron L.全草；或鼠李科植物 光枝勾儿茶 Berchemia polyphylla Wall, var leioclada Hand. -Mazζ.；或大戟科植物野 梧桐的叶；或蓼科植物荞麦I^agopyrum esculentum Moench籽苗中。具有抗炎作用；维生素 P样作用，即具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性等作用，对脂肪浸润的肝有祛脂 作用，与谷胱甘酞合用祛脂效果更明显；抗病毒作用；抑制醛糖还原酶作用。目前尚无报道 称芦丁具有保肝作用。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供芦丁的新用途，即芦丁在制备治疗保肝药中的用 途。通过药学实验证明芦丁可以有效地减轻肝移植体的低温保存再灌注损伤，对供肝有保 护作用。应用时是以芦丁为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的制剂，可制成 片剂、胶囊剂或口服液。芦丁每日服用量为0. 5-2mgo
具体实施例方式以下通过对药理实验证明芦丁如何发挥保肝作用的。一、材料与方法1、材料封闭群雄性SD大鼠1 只，供体体重200 250g，受体体重340 380g， 实验动物购于四川大学实验动物中心。SSW-3X显微外科手术器械包。Q550CW自动病理图 像分析仪。芦丁。Bcl-2、Bax免疫组化试剂盒、AST、ALT、LDH试剂盒(北京中山生物技术 有限公司)。2、实验分组及处理封闭群SD大鼠(n = 126)随机分为3个组Α组(n = 6，假手 术组)、B组(n = 30 X 2，肝移植对照组)、C组(n = 30 X 2，TMP干预组)；B、C组再根据再 灌注后0. 5h,3h,6h,24h,48h不同时相，又分为5个亚组。3、制备大鼠肝移植模型参照Delriviere和Kamada等[1]方法建立大鼠肝移植 模型。安体醚吸入麻醉，供体肝上上腔静脉结扎，供体肝下上腔静脉与受体右肾静脉按照 Delriviere等[2]方法行袖套吻合(套管内径为2. 0-2. 2mm、外径为2. 8-3. 0mm)；供肝门静脉与受体门静脉行袖套吻合(套管内径为1. 5-1. 8mm、外径为2. 0-2. 2mm)；结扎受体肝固有 动脉；最后将供肝胆管与受体胆管采用套管法重建(内径为0. 65mm、外径0. 96mm硬膜外导 管)。B组灌洗及保存液为4°C冷平衡盐溶液(含肝素钠5u/ml) ；C组灌洗及保存液为冷 平衡盐溶液中加TMP(320g/L) ；A组开腹后游离肝周韧带，分离胆总管及门静脉，关腹。4、标本的采集和检测B、C组观察术后的一般情况，并分别于肝移植再灌注后 0. 5h,3h,6h,24h,48h取腹主动脉血待测肝功能(AST、ALT、LDH)，同时取移植肝一小块肝组 织待制石蜡标本；A组于关腹后池取标本作为正常对照。采用全自动生化分析仪进行肝功 能测定；利用免疫组织化学染色的方法结合病理图像分析测定各切片中细胞凋亡调控基因 Bcl-2、BaX表达情况。取部分切片进行常规HE染色，光镜下观察肝组织的病理形态学变化。5、免疫组化染色方法石蜡切片常规脱蜡至水；3%过氧化氢阻断内源性过氧化酶 活性；微波修复抗原，加封闭用羊血清，37°C孵育15min ；加1 50 Bcl_2或1 50 Bax抗 体工作液，4°C孵育过夜；滴加生物素的羊抗兔IgM(l 100)，37°C孵育30min;每张切片滴 加50 μ 1 SP复合物，于37°C孵育30min ；以新鲜配制的DAB显色，苏木素复染，封片，显微镜 下观察。镜下可见阳性染色主要位于胞浆内，少数为核膜，呈浅黄、棕黄或棕褐色颗粒。每 张切片内中外随机选取6个视野，运用病理图像分析仪显微镜下观察并测定阳性细胞的辉 度值(与Bcl-2、Bax表达成反比)。6、统计学方法所有计量资料数据以均数士标准差(χ士 S)表示，在计算机上用 SPSS11. 0软件包处理，方差齐性分析后，组间比较用均数t检验，组内比较用单因素方差分 析，组内不同时点间两两比较采用q检验，指标间相关分析用直线相关分析，P < 0. 05为差 异有显著性。二、结果1、一般情况本实验肝移植60例，供体手术时间、血管袖套准备时间、受体手术时 间、无肝期分别为(29. 65士3. 18)min、(9. 05士2. 12)min、(42. 64士4. 07)min、(5. 18士 1. 23) min。手术成功率为88. 33% (53/60)。本实验发现，肝移植TMP干预组较肝移植对照组在 供肝恢复血流后，其表面很快呈鲜红色，无花斑状表现，门静脉不扩张，肝脏无肿胀，肠管无 淤血，肠系膜动脉搏动有力，胆汁源源不断流出，上述表现明显优于肝移植对照组。2、肝组织形态学变化假手术组(A组)无明显形态学改变；肝移植对照组(B组) 术后肝组织随着再灌注时间的延长，病理变化逐渐加重肝细胞排列紊乱，细胞浊肿，变性 呈颗粒状，肝窦变窄，中性粒细胞附壁，继而出现细胞核染色加深及部分核浓缩，部分还出 现点状或小片状坏死，以术后他最严重，他后，病理变化随着再灌注时间的延长逐渐减轻； 肝移植TMP干预组(C组)病理变化较B组相应时点明显减轻轻度的组织水肿，肝窦内皮 渗出较少，小叶结构基本完好，炎症细胞浸润较少。3、大鼠各组AST、ALT、LDH含量与A组比较，B、C组各时点AST、ALT、LDH含量均显 著性增加(P < 0. 01)；与B组相应的时点比较，C组各时点AST、ALT、LDH含量显著性降低 (P < 0. 01) ；B、C组内各时点间AST、ALT、LDH含量单因素方差分析差异显著(P < 0. 01)， 且每两个时点间q检验有显著性时效关系。4、各组Bcl-2、Bax表达辉度值变化与A组比较，B、C组于肝移植缺血再灌注后 0. 5h、3h、6h Bcl-2表达显著性增加(P < 0. 01)，Bax表达显著性降低(P < 0. 01) ’与B组 比较，C组0. 5h、3h、6h Bcl-2表达显著性上调(P < 0. 01)，Bax表达差异无显著性；并且B、C组内各时点Bcl-2、Bax表达差异有非常显著性(P < 0. 01)，且每两个时点间q检验有显 著性时效关系(24h与48h间例外)。5、肝功能(AST、ALT、LDH)水平与Bcl_2、Bax表达的相关性AST、ALT、LDH水平与 Bcl-2的表达呈显著性负相关，r值分别为-0. 39 (P < 0. 05)、-0. 51 (P < 0. 01)、-0. 52 (P < 0.01) ；AST、ALT、LDH水平与Bax的表达呈显著性正相关，r值分别为0. 71、0. 54、 0. 75，P < 0. 01 ；AST、ALT、LDH水平与Bcl-2/Bax表达呈显著性负相关，r值分别 为-0. 73、-0. 72、-0. 86，P < 0. 01。综上所述，芦丁可以通过上调Bcl-2或Bcl-2/Bax表达而有效地减轻肝移植体的 低温保存再灌注损伤，对供肝有保护作用。但其上调Bcl-2或Bcl-2/Bax表达的具体机制 尚有待进一步研究。参考文献1、Kamada N, Calne RY. Orthotopic liver transplantation in the rat techniqueusing cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation,1979, 28(1) :47-50.。2、Delriviere L,Kamada N,Goto S,et al. Retransplantation of the liver in therat. Microsurgery,1993,14(S) :416_419。
权利要求
1.芦丁在制备治疗保肝药中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征是所述保肝药是以芦丁为活性成分，加入药学 上可接受的辅料制备而成的制剂。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征是所述制剂是片剂、胶囊剂或口服液。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征是每日服用芦丁 0. 5-2mgo
全文摘要
本发明属于医药领域，涉及芦丁的新用途。即芦丁在制备治疗保肝药中的用途。通过药学实验证明芦丁可以有效地减轻肝移植体的低温保存再灌注损伤，对供肝有保护作用，每日服用量为0.5-2mg。
文档编号A61K31/7048GK102068449SQ20091021633
公开日2011年5月25日 申请日期2009年11月25日 优先权日2009年11月25日
发明者冯科 申请人:冯科