专利名称：一种复方远志酸体外杀精子药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及药品，是一种复方远志酸体外杀精子药物。
背景技术：
申请人:近几年致力于采用中药提取体外杀灭精子的药物研究，以解决现有宫内节 能器、输卵管结扎、输精管结扎、避孕套、口服避孕药等避孕措施及用西药避孕产生的副作 用。申请人2006年研究的成果之一是采用远志中含有的萜类皂甙对于体外杀精子的药物 作用。在进一步的研究中发现，远志提取物虽然有较好的体外杀精子的作用，但是这种提取 物是一种复合物质，在使用时要达到较好效果时，则需要使用较大的剂量，对于用缓释胶囊 置入节育器内携带时，带来较多不便。另外，进一步的研究表明，体外杀精子的同时配以抗 菌药物时，对人体健康具有较大益处，虽然，现有的体外杀精子药物中有抗菌组份，但是，这 些药物均为西药，对阴道粘膜具有较强的刺激作用，同时经人体吸收后将对肝脏产生较大 的损害，长期使用，严重影响人体健康。
发明内容
本发明的目的是，提供一种复方远志酸体外杀精子药物，它全部采用中药原料制 成，在具有体外杀灭精子效果好、速度快的前提下，抗菌效果显著，没有任何毒副作用。本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现一种复方远志酸体外杀精子药 物，包括下述重量比的原料远志酸3-7毫克，补骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫 克，防风提取物2-4毫克和0. 9%的生理盐水130-170毫升。所述的一种复方远志酸体外杀精子药物，由下述重量比的原料组成远志酸5毫 克，补骨脂提取物3毫克，覆盆子提取物4毫克，防风提取物3毫克和0. 9%的生理盐水150毫升。所述的一种复方远志酸体外杀精子药物剂型是乳剂、栓剂或缓释胶囊。所述的一种复方远志酸体外杀精子药物的制备方法，按重量比取远志酸3-7毫克 备用，用0. 9 %的生理盐水提取补骨脂，得到补骨脂提取物2-4毫克备用，用0. 9 %的生理盐 水提取覆盆子，得到覆盆子提取物3-5毫克备用，用0. 9%的生理盐水提取防风，得到防风 提取物2-4毫克备用，然后将远志酸、补骨脂提取物、覆盆子提取物及防风提取物置入容器 内混合均勻，再加入130-170毫升0. 9%的生理盐水，摇勻，制成药剂。本发明组份中的远志酸是中药原料远志的提取物，远志中的其它提取物远志皂 甙A、B、E、F、G、远志碱、远志糖醇、N-乙酰-D-氨基葡萄糖、氧杂蒽酮和桂皮酸的衍生物等对 杀灭精子的作用均甚微，并且杀灭精子速度较慢。研究表明，远志酸杀灭精子的速度比远志 的其它提取物速度快3倍以上，效果极好，对人体无任何刺激，对肝脏无损害，无毒副作用。本发明药物中的远志酸用于杀灭精子，防风提取物用于抗菌、抗炎及抗病原微生 物，覆盆子提取物用于防止阳痿早泄、遗精滑精，补骨脂提取物用于抗炎、抗菌，上述各组份 组合后的功效为能够快速实现体外杀灭精子的目的，并具有较好的抑菌杀菌作用，可使本发明药物制成乳剂、栓剂等剂型，用于阴道外用避孕的目的，也可制成缓释胶囊，放置在节 育器内被携带进入人体，增加节育器的避孕效果。本发明药物的动物试验表明，对常见致病菌有非常明显的抑制作用。本发明药物的抗菌试验菌液的制备取形态相同的菌落(标准菌株为金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜 绿假单胞菌，肺炎克雷伯菌)5 10个接种于培养管内，36°C，4 6小时后纠正浓度，使其 混浊度相当于0.5麦氏比浊管，约为1.5X108菌落形成单位(CFU)/ml，立即用于实验。最低抑菌浓度(MIC)测定方法参照《全国临床检验操作规程》关于最低抑菌浓度 的检测方法用胨水或琼脂将药物配成所需浓度。琼脂平皿稀释法选用直径为IOcm的玻璃平皿，将本发明的药物按比例添加到培 养基。用微量加样器接种，每个平皿接种7种菌，每个接种点接种20微升(μ 1)稀释好的 菌液，形成一个直径为8 10微米的小液滴，最终接种菌量约每个接种点含IO7个菌。放置 10分钟(min)，待菌液稍干后倒置放入37°C恒温培养箱培养24h，观察结果。以培养皿上菌 落生长完全被抑制的最低药物浓度为本发明药物对该菌的MIC。试管法每组排列无菌试管13只，于第2 12号管内放相应培养基2ml，取制备 好的药液分别加入2mll号2号管，第2管混勻后取2ml加入第3号管，如此依次对倍稀释 至第10号管，吸出2ml弃去。这样第1 10号管内含药液浓度倍量稀释，浓度分别为每毫 升含药64，32，16,8,6,4,2,1,0. 5,0. 25mg，第11和第12号管内为无菌培养基，第13号管内 加入1 25的84消毒液2ml，作为阳性对照。除第11号管外，每管内接种菌液100微升， 37°C恒温摇床震荡24h观察结果。肉眼未见细菌生长的最低药物浓度为本发明药物对该菌 的 MIC。本发明药物对常见致病菌的最低抑制浓度如下表所示。表中可看出对金黄色葡萄 球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，肺炎克雷伯菌有很好的抑制作用。本发明药物对常见致病菌的最低抑制浓度
菌种_琼脂平板(mg.mr1) 试管法(mg.mr1)
标准菌株
金黄色葡萄球菌2. 11.0
大肠埃希菌2. 11.2
铜绿假单胞菌1.01.0
肺炎克雷伯菌2. 11.5
临床分离菌株
金黄色葡萄球菌2. 11.0
大肠埃希菌4. 12.2
铜绿假单胞菌_LO_1.0 试验小鼠为8 10周龄性成熟昆明小鼠(购自北京试验动物中心)。雌鼠体重 29.32g。60只清洁级小鼠腹腔注射标准菌株2X107CFU/ml 2ml，7天(d)后感染发生，试验 组30只开始注射本发明药物20mg/kg，每天1次，连续3d，另30只注射生理盐水(无药物) 作为对照。治疗后第7d,实验组30只小鼠均存活，其精神状态佳、活拨、毛发光泽、能自主进食、无畏光流泪等现象。本发明药物解脲脲原体抑制实验解脲脲原体液体培养基按照Roberson等(Roberson JA, Stcmke Gff. Expandedserotyping scheme for Ureaplasma urealytleum strains i solated from humansf. JClin Mierobiol，1982 ;15 :812.)方法进行，方法配制1 1 牛心消化液、10% 新鲜酵母液、20%新生小牛血清、0. 002%酚红、青霉素20000单位/升。解脲脲原体培养基 加0.1%尿素，？!1调至6.0。人型支原体培养基加0. 精氨酸，pH调至6. 5。支原体株30 株。解脲脲原体(UU)和30株人型支原体(MH)临床株为泌尿生殖道感染患者 标本中分离 获得，经菌落形态、底物分解、PH值、生长速度初步鉴定为，液体传代3次后，-70°C短期保存 备用。实验菌液保存的备用菌液，室温下融化，用解脲脲原体液体培养基或人型支原体液 体培养基按1 100稀释，37°C培养24 48h后达IO6颜色变化单位/0.1ml作为接种物。 实验方法采用液体培养基稀释法。加培养基在96孔(8X12)聚苯乙烯板上，用微量加样器 向每一孔内均加入100微升培养基。往第一孔内加入配制好的本发明药物100微升，充分混 勻后取100微升加入第二孔，再吹打混勻吸出100微升加入第三孔，依次类推，直至第十一 孔，充分混勻后，弃去100微升。由此将药液倍比稀释至10 20微克/ml。第十二孔不加 药物作为对照。加菌液用支原体培养基按1 100稀释UU与MH培养物，混勻取100微升 加入每一个孔内。将加好的96孔板盖上板盖，轻摇混勻，置于湿盒内，37°C培养箱孵育。根 据培养基颜色变化判断结果培养基由黄色变为红色表明有支原体生长。24h内观察UU生 长变化，如加药孔出现与对照孔相同的颜色变化，表示所加药物的对应浓度对UU无抑制作 用，24h仍不出现颜色变化为有效抑制UU生长的药物浓度；24 48h内观察MH生长变化， 如加药孔出现与对照孔相同的颜色变化，表示所加药物的对应浓度对MH无抑制作用，48h 仍不出现颜色变化为有效抑制MH生长的药物浓度。加药组以不出现颜色变化的最小浓度 为最小有效抑制支原体生长的药物浓度(MIC)。实验采用UUl，UU2，UU3，UU4和MH标准株 作参照。抗支原体效位实验结果表明，本发明药物对解脲脲原体的MIC50分别为1.024mg/ ml，0. 512mg/ml,0. 512mg/ml 和 0. 256mg/ml ；对人型支原体的 MIC50 分别为 1. 024mg/ml, 0. 512mg/ml,0. 512mg/ml 及 0. 256mg/ml。本发明药物急性毒性和致突变实验实验方法采用霍恩氏法研究灌胃给予小鼠本发明药物的半数致死量(LD50)。选 用健康昆明种小鼠40只，雌雄各半，体重17 22g，随机分为4个受试药物剂量组1. 00， 2. 15,4. 64，10. 00克/公斤体重，灌胃给药，观察7天，记录中毒和死亡情况，计算得出 LD50。采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)研究其致突变性，小鼠精子畸变试验 和小鼠骨髓细胞微核试验研究其致畸变性。结果小鼠口服本发明药物的LD50大于10. 0 克/公斤体重；各剂量组小鼠灌胃后未见明显中毒症状，亦无死亡。Ames试验阴性、未发现 对小鼠精子产生畸变作用、对小鼠骨髓细胞染色体未见损伤。在急性毒性、小鼠精子畸变和 小鼠骨髓细胞微核试验中，从试验开始到结束，小鼠体重增重情况良好，说明本发明药物无 明显急性毒性作用和致突变作用。本发明药物比西药壬苯醇醚杀精子速度快。试验如下实验用精液标本选自25-35岁健康男性38例，禁欲3_5d，手法取精液于干净灭菌 的25ml小烧杯内，精液量2-4ml, pH 7. 0-8. 0，液化时间< 30min，精子活动率70-92%，活动力a+b级50% -80%，精子密度> 60 X 106/ml，畸形精子率< 20%。 取对照品壬苯醇醚(0.9%生理盐水稀释，壬苯醇醚浓度为分别配制成0. 1%、 0. 01 %及0. 001 %三种不同浓度)及生理盐水各0. 5ml，加入同样0. 5毫升精液(同一份精 液)，即刻混勻，迅速取1小滴于载玻片上，倒置显微镜(37°C恒温)下观察精子活动情况， 连续观察10个高倍视野，以精子全部失去活动能力为终点。从精子接触药物时起至全部失 活的时间为杀精子时间。每次实验反复进行2-3次。配制0. 1 %浓度的本发明药物为稀释液1，配制0. 01 %浓度的本发明药物为稀释 液2，配制0. 001%浓度的本发明药物稀释液3，实验方法同上。实验结果表明，稀释液1对 人精子体外杀灭使用最短时间为3秒钟，最长时间为5秒钟；稀释液2对人精子体外杀灭作 用最短时间为3秒钟，最长时间为7秒钟；稀释液3对人精子体外杀灭作用最短时间为42 秒钟，最长时间为90秒钟。壬苯醇醚1毫克/毫升对人精子体外杀灭作用最短时间为5秒 钟，最长时间为12秒钟；0. 1毫克/毫升对人精子体外杀灭作用最短时间为38秒钟，最长 时间为426秒钟；0. 01毫克/毫升对人精子体外杀灭作用最短时间为19分钟，最长时间为 35分钟。上述稀释液1是指1毫升本发明药物，加0. 9%生理盐水1毫升，混合均勻后配制 成0. 浓度的本发明药物，稀释液2是指1毫升本发明药物，加0. 9%生理盐水10毫升， 混合均勻后配制成0. 01%浓度的本发明药物，稀释液3是指1毫升本发明药物，加0. 9%生 理盐水100毫升，混合均勻后配制成0. 001%浓度的本发明药物。
具体实施例方式本发明的一种复方远志酸体外杀精子药物，包括下述重量比的原料远志酸3-7 毫克，补骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫克，防风提取物2-4毫克和0. 9%的生理 盐水130-170毫升，其中远志酸的分子式为C29H44O6,为白色粉末。本发明药物中的各原料重量比可有下述多种组合1、远志酸5毫克，补骨脂提取物3毫克，覆盆子提取物4毫克，防风提取物3毫克 和0. 9%的生理盐水150毫升。2、远志酸3毫克，补骨脂提取物2毫克，覆盆子提取物3毫克，防风提取物2毫克 和0. 9%的生理盐水130毫升。3、远志酸7毫克，补骨脂提取物4毫克，覆盆子提取物5毫克，防风提取物4毫克 和0. 9%的生理盐水170毫升。本发明所述的一种复方远志酸体外杀精子药物的制备方法，按重量比取远志酸 3-7毫克备用，用0. 9%的生理盐水提取补骨脂，得到补骨脂提取物2-4毫克备用，用0. 9% 的生理盐水提取覆盆子，得到覆盆子提取物3-5毫克备用，用0. 9%的生理盐水提取防风， 得到防风提取物2-4毫克备用，然后将远志酸、补骨脂提取物、覆盆子提取物及防风提取物 置入容器内混合均勻，再加入130-170毫升0. 9 %的生理盐水，摇勻，制成药剂。本发明所述药物的剂型是乳剂、栓剂或缓释胶囊。本发明药物所述的中药原料防风、覆盆子及补骨脂的提取方法均采用0. 9%生理 盐水提取方法，例如防风提取物的提取方法是，取5克防风中药原料，加0. 9%生理盐水50 毫升，在100°C加热60分钟，过滤纸过滤得到防风提取液，低温冷冻干燥离心，得防风干燥粉末1.12克，即为防风提取物。补骨脂提取物的提取方法是取5克补骨脂中药原料，加0. 9%生理盐水50毫升，在iocrc加热60分钟，过滤纸过滤得到补骨脂提取液，低温冷冻干燥离心，得补骨脂干燥粉 末1.18克，即为补骨脂提取物。覆盆子提取物的提取方法是取5克覆盆子中药原料，加0. 9%生理盐水50毫升， 在iocrc加热60分钟，过滤纸过滤得到覆盆子提取液，低温冷冻干燥离心，得覆盆子干燥粉 末1. 20克，即为覆盆子提取物。
权利要求
一种复方远志酸体外杀精子药物，其特征在于包括下述重量比的原料远志酸3-7毫克，补骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫克，防风提取物2-4毫克和0.9％的生理盐水130-170毫升。
2.根据权利要求1所述的一种复方远志酸体外杀精子药物，其特征在于由下述重量 比的原料组成远志酸5毫克，补骨脂提取物3毫克，覆盆子提取物4毫克，防风提取物3毫 克和0. 9%的生理盐水150毫升。
3.根据权利要求1所述的一种复方远志酸体外杀精子药物，其特征在于所述剂型是 乳剂、栓剂或缓释胶囊。
4.权利要求1所述的一种复方远志酸体外杀精子药物的制备方法，其特征在于按重 量比取远志酸3-7毫克备用，用0. 9%的生理盐水提取补骨脂，得到补骨脂提取物2-4毫克 备用，用0. 9 %的生理盐水提取覆盆子，得到覆盆子提取物3-5毫克备用，用0. 9 %的生理盐 水提取防风，得到防风提取物2-4毫克备用，然后将远志酸、补骨脂提取物、覆盆子提取物 及防风提取物置入容器内混合均勻，再加入130-170毫升0.9%的生理盐水，摇勻，制成药 剂。
全文摘要
本发明公开了一种复方远志酸体外杀精子药物，包括下述重量比的原料远志酸3-7毫克，补骨脂提取物2-4毫克，覆盆子提取物3-5毫克，防风提取物2-4毫克和0.9％的生理盐水130-170毫升，将远志酸、补骨脂提取物、覆盆子提取物及防风提取物混合均匀，再加入130-170毫升0.9％的生理盐水，摇匀，制成药剂。本发明全部采用中药原料制成，能够快速实现体外杀灭精子的目的，并具有较好的抑菌杀菌作用，可使本发明药物制成乳剂、栓剂等剂型，用于阴道外用避孕的目的，也可制成缓释胶囊，放置在节育器内被携带进入人体，增加节育器的避孕效果，没有任何毒副作用。
文档编号A61K31/58GK101804109SQ20101012792
公开日2010年8月18日 申请日期2010年3月19日 优先权日2010年3月19日
发明者王磊光, 邱毅 申请人:山东省计划生育科学技术研究所