专利名称：一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法
技术领域：
本发明提供了一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法。
背景技术：
促黄体激素LH是一种糖蛋白激素，与FSH(促卵泡素α注射剂，FSH) —样是诱发排卵的主要因素之一。在雌性哺乳动物，LH的主要作用是与FSH协同促进卵泡生长成熟， 参与内膜细胞合成雌激素，并可诱发排卵，促进黄体生成，另外还有增加血流量的作用(张冬杰，等，促黄体激素基因(LH)与产仔数性状关系的初步研究，《黑龙江畜牧兽医》，2005年 5期)。在保证卵巢类固醇激素合成及触发排卵发生中的作用是众所周知的。张云山，等， LH在卵泡发育及卵巢刺激中的作用，国外医学计划生育分册2002年21卷第3期。目前尚无采用LH制备恒河猴卵巢及卵泡生成模型的相关报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法。本发明提供了一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法，它是由雌性恒河猴为试验对象，经皮下注射促黄体激素LH，60IU/只/次，每天2次，连续7天，制备成恒河猴卵巢及卵泡生成模型。本发明还提供了促黄体激素LH在制备激活卵巢及其卵泡发育的药物中的用途。本发明造模方法使用动物为猴，其生理学、血液学、血液生化等背景数据丰富易得，并且猴与人生物学背景相似，猴的结果能较好地预示药物在临床上反应；LH临床通常用于诱导同期排卵，给药后对卵巢的作用效果确实、稳定，其重现性较好；本模型从动物体内试验、激素水平、B超影像、细胞水平等多方面、多角度评估，结果能较好、客观地反应药物对生殖系统的药效作用，此外，本模型使用的动物(猴)及仪器(B超仪、显微镜、细胞培养装置等)简单易得，具有通用性。
图1大卵泡数与总卵泡数柱形图
具体实施例方式实验例1本发明动物模型的制备以4只适繁期雌性恒河猴(Α、B、F、H)为试验对象，标准的FSH(Gonal F)(促卵泡素α注射剂，FSH)为参照，完全随机化设计，于相同的生殖生理周期，自月经周期的2天开始，分别对A、H猴经皮下注射LH、60IU/只/次、每天2次、连续7天，B、F猴经皮下注射 Gonal F、60IU/只/次、每天2次、连续7天，于月经周期第9天对受试猴卵巢状态作B超检测，于月经周期第10天一次性肌注1000国际单位(IU)的人绒膜促性腺激素(hCG)，并在注射hCG后30小时作手术采卵、成熟培养与体外受精。通过综合分析比较B超检测、手术采卵、成熟培养及体外受精等试验结果，可以初步判定(推断)受试验药物LH的促卵巢及其卵泡发育的的主要药效学指标已达到或超过Gonal F (只平总卵泡数33/15 ；只平> 5mm卵泡数16/9)；卵母细胞体外成熟培养的成功率组间亦无明显差异(0.825/0.875)。1、试验目的以适繁期雌性恒河猴为试验对象，标准的FSH(G0nal F)为参照，完全随机化设计， 于相同的生殖生理周期，对猴只分别施以受试验药物FSH类似物LH和标准的FSH(Gonal F) 治疗处理，综合分析比较B超检测、手术采卵、成熟培养及体外受精等试验结果，以判定受试验药物LH的促卵巢及其卵泡发育、成熟的效果与影响以及不同药物间可能存在的差异趋势。2、试验材料2.1供试品2. 1.1基本信息LH, Gonal F 各 4 支，1. 5mL/支，600IU/ml ；稀释剂 2 支，40mL/支；HCG 4 支，ImL/ 支，2000IU/ml。均为无色透明液体，由前沿生物技术公司提供，于-80°C保存。2. 1.2配制方法LH、Gonal F分别于首次给药当天解冻(稀释剂亦同期解冻)，室温下按每只猴用量一次性稀释配制完成，并在每次用后于4°C保存待用；HCG于月经期第10天(即B超检测后次日)解冻，生理盐水稀释(0. 5mm)。2. 2实验动物普通级健康恒河猴4只，雌性，体重5. O 8. Okg，由四)I丨成都平安动物繁育研究基地引进。入室前一周经结核菌素、寄生虫、沙门氏菌、致贺氏菌检查阴性。恒河猴饲养于国家成都中药安全性评价中心普通动物房，实验前动物适应环境并进行体内外驱虫，检测体温、 血液学、血生化、电解质、粪尿和心电图指标二次。受试动物于不锈钢猴笼分笼饲养，饲养条件符合国标GB 14925-2001，室温21 士 5 °C，相对湿度55 士 15 %，10/14小时明暗交替。猴精饲料喂养，自来水装瓶自由饮用，每日添加VE、水果、蔬菜。2. 3试剂及仪器设备凸阵超声诊断仪(WEUC-602)、体视显微镜(Leica S6E)、倒置显微镜(Nikon， ECLIPSE TS100)、照相或录像设备、CO2培养箱(SANYO，MC0175)、离心机(TD3)、水浴锅(华普达，HH-4)、恒温台(KITAZATO, MP-30DM)、微量移液器(印pendof，1000 μ L)、移液枪架、 酒精灯、超净工作台(ESC0，AVC-6A1)、自制移卵针(橡皮管、玻璃珠)、表面皿、玻璃培养皿(60mm)、一次性培养皿C35mm) ,Eppendorf离心管、枪头、记号笔、标签纸、封口膜、酒精棉球、托盘、载玻片、盖玻片、血细胞计数板、工作服、手套、口罩、帽子、烧杯等。表1主要试剂
权利要求
1.一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法，其特征在于它是由雌性恒河猴为试验对象，经皮下注射促黄体激素LH，60IU/只/次，每天2次，连续7天，制备成恒河猴卵巢及卵泡生成模型。
2.促黄体激素LH在制备激活卵巢及卵泡发育的药物中的用途。
全文摘要
本发明提供了一种恒河猴卵巢及卵泡生成模型的制备方法，它是由雌性恒河猴为试验对象，经皮下注射促黄体激素LH，60IU/只/次，每天2次，连续7天，制备成恒河猴卵巢及卵泡生成模型。本发明还提供了促黄体激素LH在制备激活卵巢及其卵泡发育的药物中的用途。本发明造模方法使用动物为猴，其生理学、血液学、血液生化等背景数据丰富易得，并且猴与人生物学背景相似，猴的结果能较好地预示药物在临床上反应；多方面、多角度评估，结果能较好、客观地反应药物对生殖系统的药效作用，此外，本模型使用的动物(猴)及仪器(B超仪、显微镜、细胞培养装置等)简单易得，具有通用性。
文档编号A61K38/24GK102370973SQ20101026338
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月26日 优先权日2010年8月26日
发明者刘斌, 岳焕勋, 李宏霞, 王汉蓉, 王莉, 陈波 申请人:四川大学华西医院, 国家成都中药安全性评价中心, 成都华西海圻医药科技有限公司