专利名称：胸腺肽注射液的制备方法
技术领域：
本发明属于生物制药领域，具体涉及一种胸腺肽注射液的制备方法。
背景技术：
胸腺肽注射液，曾用名胸腺素注射液、胸腺因子注射液、胸腺因子D注射液，系由 健康猪或小牛胸腺组织中提取的分子量小于10000道尔顿的多肽水溶液。本品具有调节和 增强人体免疫功能的作用，能促使T-淋巴细胞成熟。用于治疗各种原发性或继发性T细胞 缺陷病、某些自身免疫性疾病、各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤的辅助治疗。目前，已公开了一些有关胸腺肽的制备工艺，是经冻融破细胞、离心分离、超滤、浓 缩等过程。通常包括以下方法(1)用绞肉机或勻浆器将新鲜的的胸腺勻浆，冻融，以破碎 细胞；⑵用水在酸性或中性环境中提取破碎细胞；⑶将提取液加热到80°C左右维持10 分钟，离心除蛋白沉淀；(4)离心液经10000分子量左右的超滤膜超滤得胸腺肽(5)根据 胸腺肽含量加注射用水配制各种浓度注射液制剂。上述的工艺方法仅经过热变性去除杂蛋白，不能充分有效的去除各类杂蛋白，杂 蛋白未有效去除易引起过敏反应；其次热变性时间短，不能有效去除各类动物源性病毒，使 制剂存在病毒污染风险；再者注射液中氨基酸、小肽类物质易发生聚合为大分子物质而析 出致使制剂不稳定，也易引起过敏反应。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胸腺肽注射液的制备方法，以克服上述技术的缺陷。本发明的胸腺肽注射液的制备方法的技术方案为它是将小牛或猪的胸腺组织去 除脂肪，洗净后，与0.9克/毫升的氯化钠水溶液按1 1的重量比例混合后利用胶体磨研 磨得到绞磨液，将绞磨液用体积浓度为20%的冰醋酸调节pH值3. 5-4. 5，在-15 _22°C温 度下冷冻冷；将冷冻后的绞磨液化冻升温至33-37°C勻浆得勻浆液，然后加温到80°C，保温 30分钟，再离心分离得第一上清液；将第一上清液按1 1的体积比加入无水乙醇，0-5°C 静置1 2小时以上，再离心分离得第二上清液；浓缩第二上清液至原勻浆液体积的1/4 1/6得浓缩液；浓缩液调节pH值7. 5-8. 5，然后加温至80°C，保温30分钟，再降温至10°C 0°C以下后，离心分离得第三上清液；第三上清液先后用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后 再利用5KD至8KD的超滤膜超滤得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水调节至每毫 升溶液中含胸腺肽2. 5mg或5mg或IOmg ；加入稳定剂，灭菌后即得胸腺肽注射液。本发明先后通过50KD、10KD，5KD超滤膜多级超滤，既能保证杂蛋白的彻底去除， 又能有效地去除高分子量物质；采用乙醇和酸碱沉淀去除杂蛋白，以及多级超滤，制得产品 高分子物质少于0. 5%，远远低于国家标准规定的少于5. 0%，能更有效地保证产品质量， 制剂配料过程中加入吐温-80作稳定剂，能有效得避免制剂在储存过程中氨基酸、小肽类 物质等聚合为大分子物质析出，影响制剂的澄明度，保证产品长时间储存过程的稳定，同时 降低过敏反应发生率。
具体实施例方式取新鲜的小牛(或猪)胸腺组织，剥离其附着的脂肪，用饮用水和纯化水先后分别
清洗三次。将小牛(或猪)胸腺组织与0. 9克/毫升的氯化钠水溶液即生理盐水(温度不高 于30°C)按1 1的重量比例混合后加入胶体磨反复绞磨两次，收集绞磨液。将绞磨液用用20%的冰醋酸调节PH值3. 5-4. 5，置于冷库冷冻7天以上。取出冷冻7天以上的绞磨液化冻后置反应罐在33-37°C勻浆4_5小时，然后加温到 80°C，保温30分钟，再离心(3000转/分钟，时间为30分钟)，弃沉渣取上清。在不断搅拌下将上清液按1 1的体积比加入无水乙醇，0_5°C静置12小时以上， 离心(3000转/分钟，时间为30分钟)，弃沉渣取上清。减压真空浓缩(温度35-45°C真空度-0. 03 _0. 08MPa)至原勻浆液体积的1/5。 浓缩的同时回收乙醇。将上清液用10%氢氧化钠溶液调节pH值7. 5-8. 5，然后将罐内温度加温至80°C， 保温30分钟，用冰水降温至10°C以下后，离心(3000转/分钟，时间为30分钟)，弃沉渣取上清。上清液用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后得澄清液。澄清液再用5KD-8KD超滤膜超滤得胸腺肽溶液。制剂将胸腺肽按质量标准方法测定多肽含量，加注射用水调节至每毫升含胸腺 肽2. 5mg(或5mg、10mg)，同时加入稳定剂吐温-80至每毫升含量为1_2%。，然后灌装、灭菌 后即得胸腺肽注射液。产品检测对上述制备的产品的检测结果如下表1检测结果表1:
权利要求
一种胸腺肽注射液的制备方法，它是将小牛或猪的胸腺组织去除脂肪，洗净后，与0.9克/毫升的氯化钠水溶液按1∶1的重量比例混合后利用胶体磨研磨得到绞磨液，将绞磨液用体积浓度为20％的冰醋酸调节pH值3.5 4.5，在 15～ 22℃温度下冷冻冷；将冷冻后的绞磨液化冻升温至33 37℃匀浆得匀浆液，然后加温到80℃，保温30分钟，再离心分离得第一上清液；将第一上清液按1∶1的体积比加入无水乙醇，0 5℃静置12小时以上，再离心分离得第二上清液；浓缩第二上清液至原匀浆液体积的1/4～1/6得浓缩液；浓缩液调节pH值7.5 8.5，然后加温至80℃，保温30分钟，再降温至10℃～0℃以下后，离心分离得第三上清液；第三上清液先后用50KD、10KD超滤膜逐级超滤澄清后再利用5KD至8KD的超滤膜超滤得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水调节至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入稳定剂，灭菌后即得胸腺肽注射液。
2.如权利要求1所述胸腺肽注射液的制备方法，其特征是加入稳定剂吐温-80至每毫 升溶液中的稳定剂重量含量为1-2%。。
全文摘要
本发明公开了一种胸腺肽注射液的制备方法。它是小牛或猪的胸腺组织与氯化钠水溶液混合后研磨后，调节pH值3.5-4.5，在-15～-22℃温度下冷冻冷；将冷冻后的绞磨液化冻升温至33-37℃匀浆得匀浆液，然后加温到80℃，保温30分钟，分离得上清液与乙醇混合，静置，再分离，浓缩；调节浓缩液pH值7.5-8.5，然后加温至80℃，保温30分钟，再降温离心分离得第三上清液；超滤膜逐级超滤澄清后，得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水调节至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入稳定剂，灭菌后即得胸腺肽注射液。制得产品高分子物质少于0.5％，远远低于国家标准规定。
文档编号A61P37/04GK101934068SQ20101029172
公开日2011年1月5日 申请日期2010年9月26日 优先权日2010年9月26日
发明者吕家燕 申请人:武汉华龙生物制药有限公司