专利名称：一种从莼菜老叶中提取分离体内碱溶性多糖的方法
技术领域：
本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种从莼菜老叶中提取分离体内碱 溶性多糖的方法。
背景技术：
莼菜，一种原始花被亚纲睡莲科，莼菜属多年生淡水水生草本植物 [Braseniaschreberi] 0又名马蹄草、湖菜、水葵、露葵。该植物主要分布于浙江、江苏两省 太湖流域，湖北省西部利川市境内。4月下旬至10月下旬采摘带有卷叶的嫩稍。民间对莼 菜的传统应用历史和现代药理研究表明莼菜多糖通常具有降胆固醇、降血糖、降血脂、抗氧 化、抗炎症、抗病毒和免疫调节等功效，莼菜嫩叶体内多糖有一定的还原能力，同时对超氧 阴离子自由基和羟自由基也具有一定的清除能力。目前关于莼菜多糖的提取、分离方法研 究主要集中在莼菜嫩叶体外多糖的提取、分离。相关的专利文献有莼菜的凝胶技术(CN 03113443. 2)，莼菜多糖粘胶生产菌及莼菜多糖粘胶生产工艺(CN :94112514. 9)；莼菜多糖 方面的相关文献①莼菜多糖的提取、分离及某些生物活性的研究(王淑如等，中国药科大 学学报，1987，No. 3)；②莼菜多糖的提取及其功能特性的研究(王倩等，江南大学，2009)；
③莼菜体外胶质分离及组成成分的初步分析(周毅峰，等，食品与发酵工业，2005，No.4)；
④莼菜多糖提取工艺研究中的顶光谱分析(顾小曼等，武汉化工学院学报，1997，No.1)；⑤ 莼菜水溶性多糖提取工艺优化研究(唐巧玉等，北方园艺，2008，No. 3)；⑥莼菜多糖提取工 艺中的^、UV光谱分析(余世鑫等，湖北化工，1996，No.3)；⑦莼菜多糖的提取分离工艺技 术(今日科技，1999，NO. 1)；⑧分光光度法测定莼菜多糖中的葡萄糖醛酸(余世鑫等，分析 化学，1997，No. 9)。以莼菜嫩叶为原料进行莼菜体外多糖提取、分离，其资源利用率低，附加值不高， 势必影响综合开发利用莼菜资源的经济效益。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从莼菜加工后剩下的老叶和10月下旬田间不再利用 的莼菜老叶中提取分离体内多糖的方法。本发明一种从莼菜老叶中提取分离体内碱溶性多糖的方法，其特征在于包括以下 步骤a.原料处理新鲜莼菜老叶干燥、粉碎过100目筛；b.浸提莼菜原料粉末以重量1 20料液比，经100°C热水提取60min，趁热在 4000rpm下离心15min，对滤渣重复提取1次，滤渣以重量1 20料液比，经0. 02M NaOH溶 液，温度80°C，提取60min，4000rpm离心15min，收集上清液，对滤渣重复提取1次，合并两 次上清液；c.浓缩分离将上清液在50-60°C下减压浓缩至原体积的1/3-1/5，再调节pH为7 左右，然后加入3倍体积的95 %乙醇，边加乙醇边搅拌，放置8-24h后，4000rpm离心15min，收集沉淀；d.洗涤沉淀经95%乙醇洗涤后，得莼菜碱溶性粗多糖；e.纯化粗多糖加20倍重量的0. 02M NaOH稀碱溶液复溶；用sevag法脱蛋白；再 调节多糖溶液PH至pH8，于50°C下滴加等体积的20%双氧水脱色后，加入3倍体积的95% 乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀；再加20倍重量的0. 02M NaOH溶液复溶沉淀，得多糖溶液， 用多糖溶液3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，用20倍重量的0. 02M NaOH溶 液溶解沉淀，调节PH为7. 0左右，然后边搅拌边喷雾干燥，得莼菜碱溶性多糖。本发明针对从莼菜加工后剩下的老叶和10月下旬田间不再利用的莼菜老叶，采 用热水浸提后，再用稀碱溶液提取莼菜老叶体内碱溶性多糖，经多次醇沉、脱蛋白、脱色、喷 雾干燥，获得莼菜碱溶性多糖，该方法成本低，提取得率较高，环保，适合工业化连续生产， 可实现莼菜资源的综合开发利用和经济效益的提高。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1原料处理新鲜莼菜老叶干燥、粉碎过100目筛，备用；碱溶性多糖浸提原料粉末03kg，加IOL蒸馏水，加热至100°C，提取60min，趁 热4000rpm离心15min，对滤渣加蒸馏水10L，加热至100°C下重复提取1次，滤渣加入IOL 0. 02M NaOH溶液，加热至80°C，提取60min，4000rpm离心15min，收集上清液，对滤渣重复提 取1次，合并两次上清液；浓缩分离将上清液在60°C下减压浓缩至原体积的1/3，再调节pH为7，然后加入 3倍体积的95%乙醇，边加乙醇边搅拌，放置24h后，4000rpm离心15min，收集沉淀；纯化沉淀经95%乙醇洗涤后，得莼菜碱溶性粗多糖，加IOOOml 0. 02M NaOH溶液 复溶得多糖液，以sevag法脱蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混合液G氯仿1正丁醇， ν/ν)脱蛋白1次，再调节多糖溶液pH至ρΗ8，于50°C下滴加等体积的20%双氧水脱色后， 加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀；再加IOOOml 0. 02M NaOH溶液复溶后， 加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，加IOOOml 0. 02M NaOH溶液溶解，调 节PH为7. 0左右，然后边搅拌边喷雾干燥，得初步纯化的莼菜碱溶性多糖，产品得率约11 % (葡萄糖醛酸作标样，咔唑法测定)。实施例2原料处理新鲜莼菜老叶干燥、粉碎过100目筛，备用；碱溶性多糖浸提原料粉末1kg，加IOL蒸馏水，加热至100°C，提取60min，趁热 4000rpm离心15min，对滤渣加蒸馏水10L，加热至100°C下重复提取1次，滤渣中加入20L 0. 02M NaOH溶液，加热至80°C，提取60min，4000rpm离心15min，收集上清液，对滤渣重复提 取1次，合并两次上清液；浓缩分离将上清液在60°C下减压浓缩至原体积的1/3，再调节pH为7，然后加入 3倍体积的95%乙醇，边加乙醇边搅拌，放置24h后，4000rpm离心15min，收集沉淀；纯化沉淀经95%乙醇洗涤后，得莼菜碱溶性粗多糖，加2000ml 0. 02M NaOH溶液 复溶得多糖液，以sevag法脱蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混合液(4氯仿1正丁醇，ν/ν)脱蛋白1次，再调节多糖溶液ρΗ至ρΗ8，于50°C下滴加等体积的20%双氧水脱色后， 加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀；再加2000ml 0. 02M NaOH溶液复溶后， 加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，加2000ml 0. 02M NaOH溶液溶解，调 节PH为7. 0左右，然后边搅拌边喷雾干燥，得初步纯化的莼菜碱溶性多糖，产品得率约11 % (葡萄糖醛酸作标样，咔唑法测定)。实施例3原料处理新鲜莼菜老叶干燥、粉碎过100目筛，备用；碱溶性多糖浸提原料粉末^ig，加IOL蒸馏水，加热至100°C，提取60min，趁热 4000rpm离心15min，对滤渣加蒸馏水10L，加热至100°C下重复提取1次，滤渣向水提后的 莼菜残渣中加入40L 0. 02M NaOH溶液，加热至80°C，提取60min，4000rpm离心15min，收集
上清液，对滤渣重复提取1次，合并两次上清液；浓缩分离将上清液在60°C下减压浓缩至原体积的1/3，再调节pH为7，然后加入 3倍体积的95%乙醇，边加乙醇边搅拌，放置24h后，4000rpm离心15min，收集沉淀；纯化沉淀经95%乙醇洗涤后，得莼菜碱溶性粗多糖，加4000ml 0. 02M NaOH溶液 复溶得多糖液，以sevag法脱蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混合液G氯仿1正丁醇， ν/ν)脱蛋白1次，再调节多糖溶液pH至ρΗ8，于50°C下滴加等体积的20%双氧水脱色后， 加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀；再加4000ml 0. 02M NaOH溶液复溶后， 加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，加4000ml 0. 02M NaOH溶液溶解，调 节PH为7. 0左右，然后边搅拌边喷雾干燥，得初步纯化的莼菜碱溶性多糖，产品得率约11 % (葡萄糖醛酸作标样，咔唑法测定)。
权利要求
1. 一种从莼菜老叶中提取分离体内碱溶性多糖的方法，其特征在于包括以下步骤a.原料处理新鲜莼菜老叶干燥、粉碎过100目筛；b.浸提莼菜原料粉末以重量1 20料液比，经100°C热水提取60min，趁热在4000rpm 下离心15min，对滤渣重复提取1次，滤渣以重量1 20料液比，经0. 02M NaOH溶液，温度 80°C，提取60min，4000rpm离心15min，收集上清液，对滤渣重复提取1次，合并两次上清 液；c.浓缩分离将上清液在50-60°C下减压浓缩至原体积的1/3-1/5，再调节pH为7左 右，然后加入3倍体积的95%乙醇，边加乙醇边搅拌，放置8-24h后，4000rpm离心15min，收集沉淀；d.洗涤沉淀经95%乙醇洗涤后，得莼菜碱溶性粗多糖；e.纯化粗多糖加20倍重量的0.02M NaOH稀碱溶液复溶；用sevag法脱蛋白；再调节 多糖溶液PH至pH8，于50°C下滴加等体积的20%双氧水脱色后，加入3倍体积的95%乙醇 沉淀多糖，离心，收集沉淀；再加20倍重量的0. 02M NaOH溶液复溶沉淀，得多糖溶液，用多 糖溶液3倍体积的95%乙醇沉淀多糖，离心，收集沉淀，用20倍重量的0. 02M NaOH溶液溶 解沉淀，调节pH为7. 0左右，然后边搅拌边喷雾干燥，得莼菜碱溶性多糖。
全文摘要
本发明公开了一种从莼菜老叶中提取分离体内碱溶性多糖的方法；本发明主要解决莼菜嫩叶加工后剩下的老叶和10月下旬田间不再利用的莼菜老叶体内多糖提取、分离技术。本发明包括以下技术步骤将新鲜莼菜老叶干燥粉碎；热水提取、水提后的残渣，用稀碱溶液提取、离心收集上清液；将上清液减压浓缩，醇沉，离心收集沉淀；沉淀经纯化，喷雾干燥，得莼菜老叶体内碱溶性多糖。该方法成本低，产品得率较高，环保，适合工业化生产。
文档编号A61P39/06GK102086236SQ20101058148
公开日2011年6月8日 申请日期2010年12月6日 优先权日2010年12月6日
发明者刘长怀, 周大寨, 周毅峰, 唐巧玉, 罗袓友, 艾训儒, 高明茂 申请人:湖北民族学院