专利名称：用于预防或治疗肝癌的包含乌参提取物的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种制备乌参的方法，其包含将超过四年的绿参分离成人参主体和人参根须，将它们干燥成白参并且将蒸煮和干燥 步骤反复几次。更具体地，本发明涉及一种制备乌参的方法，所述乌参具有增加的苯并芘稳定性和Rg3成分并且有效的预防或治疗肝癌。
背景技术：
人参是一种多年生草本植物，属双子叶植物纲伞形目的辽东惚木族。人参生长在偏远山区的森林中。人参作为药用植物种植。人参具有人形的根，所以叫做人参。人参根的形成取决于年龄，当根生长4至6年时，收获它。当它成熟时收获的人参叫做绿参，干燥的绿参叫做白参。蒸煮绿参变成红色，它叫做红参。蒸煮红参并且干燥几次变成黑色，它叫做乌参。已知当蒸煮干燥这样的红参和乌参时，改变它们的药用成分，从而，与绿参相比，对人的健康有益的活性成分增加。已知红参和乌参的主要生理成分是包含在皂苷中的人参皂苷 Rb1' Rb2、Re、Rd> Re、Rg1^ Rg2> Rg3> Ro 等等。尤其已知与乌参相比人参皂苷-Rg3成分增加更多的乌参。最近乌参已经发展成为一种新产品，因而没有将它记录为普通食品。然而，由于乌参包含人参皂苷-Rg3成分，可以将它加工成小袋或浓缩物并且归类成红参的加工食品。通过消费者体验，已经证实乌参提高免疫力并且有效地提高抗癌功能和性功能。此外，通过体验和本发明人的研究结果证实乌参对肝炎、糖尿病和肝硬化是有效的。本发明人已经研发了一种能够增加乌参的人参皂苷成分的方法(见韩国专利no. 10-529475)。此外，他们研发了一种尤其能够增加人参皂苷成分中的Rg3的方法。与已知的增加人参皂苷Rg3的韩国未经审查的专利公开no. 840003相比，本发明提供一种能够增加更多Rg3成分的新方法。本发明提出一种制备乌参的方法，该方法能够去除苯并芘至安全标准水平以下，已知制备乌参期间在加热步骤中产生苯并芘。苯并芘是黄色结晶固体，它属于多环芳烃(PAHs)的组。食品中，当碳氢化合物、蛋白质、脂肪等在300 600°C的温度下分解时，由于不完全燃烧产生已知的苯并芘。最近，已经报道甚至在不超过100°C的温度下在加工的食品中产生苯并芘。国际癌症研究机构(IARC)在1989年进行了第一次苯并芘毒性检测在2006年8月进行了第二次检测，从而将苯并芘归类成第一组人类致癌物。韩国未经审查的专利公开no. 2009-93310公开了乌参的制备和苯并芘的减少。已经设计这种方法以便通过控制干燥温度，苯并芘没有增加。然而，已经设计本发明的方法以便当干燥步骤增加时去除苯并芘。因此，本发明的方法与韩国未经审查的专利公开no. 2009-93310的方法不同。此外，本发明人发现了本发明的乌参提取物显示了对抗肝癌的选择性的良好效果。关于乌参提取物的抗癌效果，韩国未经审查的专利公开no. 2006-83301公开了对抗大肠癌的效果，并且韩国未经审查的专利公开no. 2008-106077公开了对抗癌症疾病和氧化有关的疾病的效果，但是这些效果与本发明中的对抗肝癌的选择性效果无关。
发明内容
技术问题本发明的目的是提供一种使用四年以上的绿参制备乌参主体和乌参根须的方法，它们具有增加的人参皂苷Rg3并且通过控制蒸煮温度和时间减少苯并芘。本发明的另一个目的是提供一种制备乌参主体和乌参根须的方法，它们有效地预防或治疗肝癌。技术方案本发明涉及一种通过反复蒸煮和干燥绿参制备乌参的方法，该方法包含(第一过程)清洗人参并且将它分离成人参主体和人参根须的步骤； (第二过程)干燥清洗的人参主体和人参根须使得它们的水分含量不超过14%的步骤；(第三过程)在80 90°C的温度下分别蒸煮干燥的人参主体和人参根须8 10小时的步骤；(第四过程)在25 50°C的温度下分别干燥蒸煮的人参主体和人参根须3 5小时的步骤；(第五过程)连续5 12次重复第三过程中的蒸煮和第四过程中的25 50°C干燥的步骤；和(第六过程)在25 50°C的温度下干燥从第五过程的重复蒸煮和干燥得到的乌参主体和根须，使得它们的水分最终不超过10%的步骤。第一过程中使用的人参可以是4至6年的人参。在第一过程中分离人参主体和人参根须时，不剥离它们的表面。因此，应该避免了人参主体和表面间的形成的阜苷的损失。第二过程中的干燥人参的水分优选适当地是约5 14%。第三过程的蒸煮温度优选是80 90°C。当温度低于80°C时，人参皂苷Rg3成分没有太大增加并且没有很好的去除苯并芘。然而，温度超过90°C，Rg3成分也没有太大增加并且没有将苯并芘去除到安全标准水平。完成第三和第五过程后，另外五至十二次蒸煮加上一次初始蒸煮，总蒸煮次数优选是6至13。当总蒸煮次数小于六时，人参皂苷Rg3成分没有太大增加并且没有将苯并芘去除到安全标准水平。随着总蒸煮次数增加，Rg3成分增加，但是其它人参皂苷成分降低或消失。因此，应该很好的控制蒸煮次数和时间。在功能药物的制备中可以使用根据本发明的乌参主体和根须的粉状材料和溶剂(纯净水或乙醇)提取物，功能药物包含具有抗癌功能的保健食品或片剂、胶囊、丸剂、液体
坐坐寸寸o制备上述乌参主体和根须提取物，包含将干燥的乌参主体或根须压成细粉的步骤；将上述粉状乌参主体或根须与每Ikg上述粉状乌参主体或根须5 120L温度是70 90°C的纯净水混合，然后在50 70rpm的转速下搅拌该混合物5 10小时的步骤；沉淀该搅拌提取物2 14小时并且将沉淀物分离成液体和固体的步骤；和
过滤上述提 取物以得到没有固体的滤液的步骤。通过冷冻干燥、热风干燥或喷雾干燥等可以将乌参主体和根须提取物以粉末的形式加入制备的药物制剂或食品中。本文定义的人参是多年生草本植物,属于人参属，并且包括人参(Panaxginseng)、西洋参(Panax quinquefolia)、三七(Panax notoginseng)、越南人参(Panaxvietnamensis)、秀_人参(Panax elegatior)、狭叶竹节参(Panaxwangianus)、羽叶三七(Panax bipinratifidus)，优选人参或西洋参。通过对乌参主体和根须的提取物进行冷冻干燥、热风干燥或喷雾干燥，可以使用包含根据本发明的可以用作治疗癌症的药剂的乌参主体和根须的医药组合物，按照常用方法以口服制剂、外用制剂、栓剂和消毒注射液例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆或气溶胶的形式配制它们。包含乌参主体和根须的组合物中可以包括的载体、辅料和稀释剂包括，例如，蔗糖、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸钠、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油。使用经常使用的稀释剂或辅料，例如填料、补充剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂和表面活性剂制备所述制剂。用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等等。通过混合上述提取物与至少一种辅料，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖、明胶等制备这样的固体制剂。此外，除了简单的辅料，还使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石粉。用于口服给药的液体制剂包括悬浮剂、液体内容物、乳液、糖浆等。除了水和液体石蜡，它们是经常使用的简单稀释剂，可以包括几种辅料，例如保湿齐U、甜味剂、气味剂、防腐剂等。用于非口服给药的制剂包括消毒水溶液、非水溶剂、悬浮齐U、乳液、冷冻干燥剂和栓剂。可以使用植物油，例如丙二醇、聚乙二醇和橄榄油或者可注射的酯，例如油酸乙酯作为非水溶剂或悬浮剂。可以使用海藻酸钠(witepsol)、聚乙二醇(macrogol)、吐温61、可可黄油、亮叶肉实(Iaurinum)、甘油明胶作为栓剂基础。活性成分的用量取决于将要进行治疗的受试者的年龄、性别和体重，将要进行治疗的某些疾病或病理状态、疾病或病理状态的严重性、给药途径和处方的判定。本领域技术人员的水平内测定基于这些参数的用量。所述用量通常在0. OOlmg/kg/天至约2000mg/kg/天的范围内，更优选lmg/kg/天至100mg/kg/天。可以一天一次或分几次进行给药。不以任何方式将用量限制在本发明范围内。相对于组合物的总重量，根据本发明的用于预防或治疗与肝癌有关的疾病的药物组合物包含0. I至50重量％乌参提取物。可以通过几种途径将本发明的提取物给药至哺乳类动物，例如鼠、牛和人类。可以预测所有的给药途径。例如，可以通过口服、直肠、静脉注射或肌肉注射、皮下注射、宫内硬脑膜注射或脑血管注射给药。本发明的提取物基本没有毒性并且无副作用，因此对用于预防目的的长期给药有把握使用的药物。本发明还提供一种保健功能食品，它与合乎科学的可接受的食品饮食补充添加剂一起改善癌症的治疗，它包含乌参和乌参根须。本发明的保健功能食品包括例如片剂、胶囊齐U、丸剂或液体的形式。使用可以添加到本发明化合物中食品，例如几种食品、饮料、口香糖、茶叶、复合维生素、保健功能食品等等。
发明效果已经鉴定与常用技术制备的乌参相比，本发明制备的乌参包含大幅增加的人参皂苷Rg3。也鉴定了随着蒸煮次数的增加人参皂苷Rg3逐渐增加。根据温度和干燥条件，这些东西的生产是敏感的。在本发明的温度和蒸煮条件下通过反复的蒸煮步骤减少已知为致癌物质的苯并芘的含量，将它去除到低于安全标准水平，可以证实在本发明的初始步骤中，检测苯并芘超过I. Oppb，其高于标准水平，但是苯并芘含量减少至低于标准水平。认为在原材料人参中剩余的农药中产生苯并芘。因而，通过本发明的反复蒸煮和干燥条件出去产生的苯并芘。实际上，甚至在蒸煮前检测人参中的苯并芘。只有使用上述人参制备乌参时检测苯并芘。从开始没有检测到苯并芘，在制备乌参的过程中也没有检测到苯并芘。此外，已经证实,与红参相比，具有增加的人参阜苷Rg3的乌参对抗肝癌具有优异的抗癌效果。正因为如此，已经研发了可以制备有效治疗肝癌相关疾病和致癌物质安全的乌参的方法。
图I是显示根据优选实施例I的方法制备乌参的方法的流程图。图2是显示根据实验性实施例2-1的关于肝癌细胞HepG2的存活细胞的MTT法检测结果的图。
具体实施例方式下面详细描述本发明优选的实施例。然而，本发明不局限于本文描述的实施例，可以表现其它形式。提供本文介绍的实施例，以便可以彻底完全的理解说明书并且可以与本领域技术人员交流本发明的技术理念。实施例I〈使用相同的条件蒸煮温度是85°C，干燥温度是50°C，总蒸煮次数是13，制备乌参主体和根须，并且制备提取物>收集六年的人参，去除土壤和异物。然后用纯净水清洗该人参，并且去除水分。将上述绿参分离成主体和根须(根)。分离的人参的主体和根须各空气干燥10kg，以便它们的水分含量不大于14%，从而制备人参。将干燥的人参分成人参主体和人参根须，在85°C的温度下蒸煮10小时，然后在50°C的温度下干燥4小时。蒸煮和干燥同样重复12次(总共13次蒸煮)。重复蒸煮和干燥时，干燥的白参变成红参并且红参变成乌参。通过这样做，制备乌参的主体和根须。持续最后的干燥直至水分不大于10%。此后，为了制备乌参的主体和根须的提取物，分别研磨乌参的主体和根须。在80°C的温度下，研磨的乌参的主体和根须分别放在100L纯净水中，在60rpm的转速下搅拌8小时,然后沉淀3小时。过滤沉淀的提取物以去除固体。冷冻干燥滤液并且最终将乌参的主体和根须制备成粉末。实施例2〈蒸煮温度>2-1.蒸煮温度 80°C除了蒸煮温度是80°C外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。2-2.蒸煮温度 90°C
除了蒸煮温度是90°C外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。实施例3〈蒸煮次数>3-1.蒸煮六次(重复蒸煮和干燥5次)除了总蒸煮次数是六次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-2.蒸煮七次(重复蒸煮和干燥6次)除了总蒸煮次数是七次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-3.蒸煮八次(重复蒸煮和干燥7次)除了总蒸煮次数是八次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-4.蒸煮九次(重复蒸煮和干燥8次)除了总蒸煮次数是九次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-5.蒸煮十次(重复蒸煮和干燥9次)除了总蒸煮次数是十次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-6.蒸煮^^一次(重复蒸煮和干燥10次)除了总蒸煮次数是i^一次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-7.蒸煮十二次(重复蒸煮和干燥11次)
除了总蒸煮次数是十二次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。实施例4〈干燥温度25 °C >除了干燥温度是25°C外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。对比实施例1〈蒸煮温度>1-1.蒸煮温度 7(TC除了蒸煮温度是70°C外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。1-2.蒸煮温度 75 °C除了蒸煮温度是75°C外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。1-3.蒸煮温度 95 °C除了蒸煮温度是95°C外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。对比实施例2〈总蒸煮次数>2-1.蒸煮一次(重复蒸煮和没有干燥)
除了总蒸煮次数是一次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。2-2.蒸煮两次(重复蒸煮和干燥一次)除了总蒸煮次数是两次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。2-3.蒸煮三次(重复蒸煮和干燥两次)除了总蒸煮次数是三次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。2-4.蒸煮四次(重复蒸煮和干燥三次)除了总蒸煮次数是四次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的 提取物。2-5.蒸煮五次(重复蒸煮和干燥四次)除了总蒸煮次数是五次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。2-6.蒸煮十四次(重复蒸煮和干燥十三次)除了总蒸煮次数是十四次外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。对比实施例3〈干燥温度>3-1. 20 0C除了在20°C下进行干燥外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。3-2. 55 0C除了在55°C下进行干燥外，在与实施例I相同的条件下制备乌参的主体和根须的提取物。对比实施例4〈制备红参和红参根须>商购获得6年的红参根(红参主体)和红参根须，并且在80 V下使用纯净水以与实施例I相同的方式制备红参根和红参提取物。实验性实施例1〈乌参的成分分析>关于通过实施例1-4和对比实施例1-3的方法制备的乌参提取物和对比实施例4的红参提取物，已经分析其人参皂苷成分。已知人参皂苷成分更多的包含在小根中。因此，在本实验中分别使用乌参根须和红参根须。人参皂苷成分的分析中，根据食品规范[第4节.食品标准和要求一16.人参产品一16-10.浓缩红参的测试方法(I)红色成分鉴定测试，高速液相色谱]进行人参皂苷的检测方法。表I显示分析乌参和红参的人参皂苷含量的数值。表I的结果证实随着蒸煮次数增加，乌参的人参皂苷R3明显增加；特别地，大于八次蒸煮下，人参皂苷R3大量增加；在大于九次蒸煮下，人参皂苷R3的含量保持在几乎相似的水平。还证实，80至89°C接近85 °C的温度下，人参皂苷Rg3和Rhl增加的最多。证实如果在太低的温度(20°C)下进行干燥，制备完全低品质的乌参。反之，人参皂苷Rg3和Rhl的含量表现出显著的低水平。
仅供参考，已经证实分析实施例I的乌参的总粗阜苷量为508. 9mg/g ;在初始蒸煮中，上述粗皂苷的粗皂苷水平与对比实施例4的红参相似，但是它随着蒸煮次数增加而增加(表中没有显示)。表I乌参的分析结果
权利要求
1.一种制备乌參提取物的方法，其中人參皂苷Rg3含量大于130mg并且苯并芘的检测量不大于I. Oppb,其包含 第一过程，清洗人參并且将它分离成人參主体和人參根须的步骤； 第二过程，干燥清洗的人參主体和人參根须使得它们的水分含量不超过14%的步骤；第三过程，在80 90°C的温度下分别蒸煮干燥的人參主体和人參根须8 10小时的步骤； 第四过程，在25 50°C的温度下分别干燥蒸煮的人參主体和人參根须3 5小时的步骤； 第五过程，连续5 12次重复第三过程中的蒸煮和第四过程中的25 50°C干燥的步骤；和 第六过程，在25 50°C的温度下干燥从第五过程的重复蒸煮和干燥得到的乌參主体和根须，使得它们的水分最終不超过10%的步骤。
第七过程，用溶剂提取第六步骤的乌參，从提取物中去除溶剂并且干燥它以制备乌參提取物的步骤。
2.根据权利要求I的制备乌參的方法，其中第一过程的人參是4至6年的人參。
3.根据权利要求I的制备乌參的方法，其中是多年生草本植物，属于人參属，并且包括人參、西洋參、三七、越南人參、秀丽人參、狭叶竹节參或羽叶三七。
4.用于预防或改善肝癌的保健食品，其包含作为有效成分的权利要求I的乌參。
5.用于预防或治疗肝癌的药物组合物，其包含作为有效成分的权利要求I的乌參。
全文摘要
本发明涉及一种特别增加乌参的人参皂苷成分中的Rg3成分的方法。本方法制备的乌参提取物表现出对人类肝癌细胞的高抗癌活性。此外，已经证实本发明的方法对减少已知主要在加热期间产生的苯并芘的含量有效。
文档编号A61P1/16GK102711779SQ201080055459
公开日2012年10月3日 申请日期2010年10月4日 优先权日2009年10月7日
发明者金恒钟 申请人:金恒钟