专利名称：附子提取物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明 涉及一种附子提取物及其应用，可在包括参附汤、四逆汤、人参四逆汤及四逆类方等具有抗炎、镇痛或回阳救逆作用的药物制剂中广泛应用。
背景技术：
附子为毛莨科多年生草本植物乌头(Aconitum carmichaeli Debx)子根的加工品，始载于《神农本草经》，味辛甘，性大热，有毒，归心、肾、脾经，为有毒中药的代表。具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效，被历代医家视为补火助阳之要药，也被誉为“回阳救逆第一品药”。但因附子性刚烈迅捷，历代医家及本草著作皆言附子“有毒”、“有大毒”，用之不当，易出现严重的毒副作用，因此，现代临床汤剂一般使用制附子，且久煎减毒。在成品药物制剂中一般也使用制附子入药，但在张仲景《伤寒论》中四逆类方如干姜附子汤、四逆汤、人参四逆汤等8首方剂中的附子均为生用。附子主要毒/效成分均为生物碱，包括双酯型生物碱(如乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等)、单酯型生物碱(如苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱等)和醇胺型生物碱(如乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱等)，此外还含有少量的脂类生物碱 (lipo—alkaloid)，如 lipoaconitine, lipomesaconitine, Iipohypaconitine 等。越白告等报道采用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术，从生附片中分析鉴定出48个成分，其中双酯型生物碱8个(主要成分)、单酯型生物碱7个、脂类生物碱29个(化学学报，2008,66 (2) 211-215)。现在已知，附子的毒性成分主要为双酯型生物碱，其毒性与结构中的酯键直接相关。此类生物碱的酯键不稳定，加热水解可使其断裂。在附子的炮制过程中，首先是水解掉乌头碱8位上的乙酰基生成苯甲酰乌头原碱，其毒性为乌头碱的1/200 ；再进一步水解掉其 14位的苯甲酰基生成乌头原碱，其毒性仅为乌头碱的1/2000 ；同时还伴随发生脱氧反应， 生成塔拉乌头胺。新乌头碱、次乌头碱也会发生类似反应。另外，乌头碱类生物碱8位上的乙酰基也会被一些脂肪酰基置换生成毒性较小的脂类生物碱(lipo-alkaloid)，以及附子在炮制过程中使生物碱被破坏和流失，从而使毒性降低。附子为有毒中药，通过上述的炮制可达到减毒的目的。实验显示，附子经上述炮制，80%以上的总生物碱会流失在泡、浸、漂的过程中，再经蒸制还可进一步使双酯型生物碱水解转化为单酯型和醇胺型生物碱。其结果是，毒性虽然大大降低，但其药理活性亦随之减弱或消失。因此，附子的炮制存在有过度之嫌。公开号CN1935201A中国专利报道了一种生附子提取物，取生附子药材饮片，第一次加9 11倍量水，浸泡2(Γ40分钟，煎煮5. 5飞.5小时，第二次加 Γ 1倍量水，煎煮3. 5^4. 5 小时，滤过，浓缩，干燥，即得。吴平报道了一种附子生物碱的提取分离纯化方法(成都中医药大学硕士学位论文，2007年)，将生附子用酸水提取，提取液经大孔树脂柱吸附，先用水洗去杂质，再用60% 乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，药液在120°C和0. 2Mpa条件下水解2小时，水解后药液用氨水调节PH值至l(Tll，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，即得附子生物碱提取物。由于制附子在加工炮制过程中使总生物碱有效成分的损失可达80%以上，水溶性的有效成分基本已损失殆尽，使药理活性大大减弱，因此目前附子加工炮制及制附子的使用存在诸多缺陷，使如参附汤(参附注射液)、中国药典四逆汤等药物制剂中以制附子入药的药效作用受到了影响。
发明内容
针对上述情况，本发明提供了一种含有单酯型生物碱的附子提取物，不含剧毒成分双酯型生物碱，不仅毒性小，而且能更好地发挥附子的药效作用。该提取物可以在以附子的有效药物成分制备的具有抗炎、镇痛或回阳救逆作用的药物制剂，包括在传统的参附汤、 四逆汤、人参四逆汤等药物制剂中得到广泛应用。
本发明的附子提取物，是按下述方式制备得到
1’ 将生附子用水充分煎煮后，取煎煮液。其中的生附子可以为常规的生附子药材饮片或其粗粉；
2’ 剩余药渣用？!1值< 4的酸水继续充分煎煮后，取煎煮液；
3’ 合并上两步煎煮液，加入乙醇，使混合液的含醇比例达509Γ80% (ν/ν)后静置，固液分离，液体除去乙醇后浓缩，即为所说的附子提取物。上述制备方式中所说的充分煎煮，可以按目前已有报道和/或使用的方式进行，例如根据生附子的含水程度，一般用生附子重量5 15倍的水煎煮广4小时即可。生附子经水充分煎煮，可以使其中所含的双酯型生物碱能水解转化为单酯型生物碱，起到减毒作用。如上述，生附子煎煮前如先用水充分浸泡后再用水煎煮，能缩短煎煮时间，有利于双酯型生物碱的充分溶出和水解转化，也有利于单酯型生物碱的提取。实验显示，生附子在煎煮前的浸泡一般可不超过10小时。例如在夏季可浸泡广4小时，冬季浸泡时间可以适当延长至5 10小时。上述对生附子进行浸泡和/或煎煮，特别是煎煮时，一般宜保持有足够的水量，但水量过多也会增加后续处理的负担。实验显示，浸泡和/或煎煮时，优选用生附子重量5 15 倍的水煎煮1、小时。实验表明，生附子经水充分煎煮并固液分离后的药渣，再用酸水煎煮，不仅能使附子中的脂类生物碱进一步水解转化为单酯型生物碱，而且有利于单酯型生物碱的稳定，减少煎煮受热过程中单酯型生物碱的破坏损失，因而能提取得到更多的单酯型生物碱。其中更优选的方式，是用生附子重量5 15倍的酸水煎煮广2次，每次广4小时。所说的ρΗ值 ^ 4的酸水可以为药学中允许使用的盐酸、硫酸或枸橼酸等常用酸的水溶液，其中优选使用盐酸水溶液，方便易得。将水煎和酸水煎两步的煎煮液合并后，加入乙醇至所说的含醇比例，充分搅拌后静置沉淀，然后经固液分离，可除去淀粉、多糖等无效成分或杂质，提取以单酯型生物碱为主的有效活性成分。固液分离后的液体，可按药学中可以接受的常规方式先调节PH值至 4-7，再减压回收乙醇和浓缩，即得到以单酯型生物碱为主要活性成分(不含双酯型生物碱) 的本发明所说附子提取物。
在此基础上，为减小用乙醇处理时的药液体积，节省乙醇用量和方便处理，水煎煮液和酸水煎煮液合并后，可以根据处理需要先将合并的药液适当浓缩后，再按所说方式加入乙醇处理。由于两步煎煮液合并后的药液仍呈酸性，实验显示，酸性条件下有利于单酯型生物碱等有效成分受热稳定。一般情况下浓缩至相对密度约为1. l(Tl. 30即可。由于本发明上述的附子提取物中不含剧毒成分双酯型生物碱，不仅毒性小，而且制备过程有利于主要活性成分的单酯型生物碱的稳定，减少了其被破坏的损失，能更好地发挥附子的药效作用。因而该提取物在以附子的有效药物成分制备的具有抗炎、镇痛或回阳救逆作用的药物制剂，包括传统的参附汤(人参、附子)、四逆汤(附子、干姜、炙甘草)、人参四逆汤(附子、干姜、炙甘草、人参)及四逆类方等药物制剂中得到广泛应用。以下通过实施例的具体实施方式
再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。
具体实施例方式实施例1
取生附子饮片100kg，加水10倍，浸泡10小时，煎煮1小时，滤过，水煎液备用；药渣再加PH 1的盐酸水溶液8倍，煎煮2次，每次4小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为 1. 2，加乙醇使含醇量达70%，充分搅拌，静置，固液分离，用氢氧化钠水溶液调pH值至4，减压回收乙醇，浓缩，即得所述的附子提取物。实施例2
取生附子粉碎成粗粉100kg，加水15倍，浸泡6小时，煎煮1. 5小时，滤过，水煎液备用； 药渣再加PH 1. 5的盐酸水溶液5倍，煎煮2次，每次3小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为1. 1，加乙醇使含醇量达80%，充分搅拌，静置，固液分离，用氢氧化钠水溶液调pH 值至6，减压回收乙醇，浓缩，即得所述的附子提取物。实施例3
取生附子饮片100kg，加水5倍，浸泡1小时，煎煮3小时，滤过，水煎液备用；药渣再分别加pH 1和pH 3的盐酸水溶液各8倍，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为1. 3，加乙醇使含醇量达50%，充分搅拌，静置，固液分离，用氢氧化钠水溶液调PH值至7，减压回收乙醇，浓缩，即得所述的附子提取物。实施例4
取生附子粉碎成粗粉100kg，加水15倍，浸泡3小时，煎煮2小时，滤过，水煎液备用； 药渣再加PH 2的盐酸水溶液15倍，煎煮3小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为 1.25，加乙醇使含醇量达60%，充分搅拌，静置，固液分离，减压回收乙醇，浓缩，即得所述的附子提取物。实施例5
取生附子饮片100kg，加水8倍，煎煮4小时，滤过，水煎液备用；药渣再分别加PH 0. 5 和pH 4的盐酸水溶液各10倍，煎煮2次，每次1小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为1. 2，加乙醇使含醇量达70%，充分搅拌，静置，固液分离，用氢氧化钠水溶液调pH值至4-6，减压回收乙醇，浓缩，S卩得所述的附子提取物。实施例6
生附片10kg，加水10倍，浸泡4小时，煎煮2小时，滤过，水煎液备用；药渣再分别加PH 1和PH 3的盐酸水溶液各8倍，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为1. 2，加乙醇使含醇量达60%，充分搅拌，静置，固液分离，用氢氧化钠水溶液调pH值至 5，减压回收乙醇，浓缩，即得所述的附子提取物。实施例7
生附片10kg，加水10倍，浸泡4小时，煎煮1小时，滤过，水煎液备用；药渣再分别加PH 1和PH 3的盐酸水溶液各8倍，煎煮2次，每次4小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为1. 2，加乙醇使含醇量达60%，充分搅拌，静置，固液分离，用氢氧化钠水溶液调pH值至 5，减压回收乙醇，浓缩，即得所述的附子提取物。实施例8
取人参(红参)2. 5^5kg,加入其重量5 12倍量的509Γ80%乙醇，回流提取2 3次， 每次广2小时，滤过，合并乙醇提取物，减压回收除尽乙醇，过大孔吸附树脂柱(D101或 HPD-100)，先用水洗涤除杂，再用50-70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩， 即得到人参提取物。取实施例7的附子提取物(相当于生药原料5kg)，加入上述人参提取物，混合均勻，再加入药用辅料适量，混勻，干燥，粉碎，按常规方法制成胶囊剂或片剂，即得到所述的参附药物制剂。以下通过有效成分的含量和药效作用为评价指标，进一步说明本发明附子提取物所具有的有益效果。分别以实施例6和实施例7作为本发明制备方法的附子提取物I和附子提取物II 进行下述有效成分的检测和药效比较实验。传统制备方法
取生附片或白附片各10kg，分别加水10倍，浸泡4小时，煎煮2小时，滤过，水煎液备用；药渣再分别加水8倍，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并水煎液，浓缩至相对密度约为 1.2，加乙醇使含醇量达60%，充分搅拌，静置，固液分离，减压回收乙醇，浓缩，即得生附子提取物或制附子提取物。文献报道方法(公开号CN1935201A中国专利)
生附片10kg，加水10倍，浸泡40分钟，煎煮6小时，滤过，水煎液备用；药渣再加水10 倍，煎煮4小时，滤过，合并水煎液，浓缩，即得公开号CN1935201A中国专利的附子提取物。1、有效成分的含量测定
参照中国药典2010年版一部177页附子项下的双酯型和单酯型生物碱的检测方法，分别测定附子提取物(I )(实施例6)、附子提取物(II)(实施例7)，传统制备方法的生附子提取物、制附子提取物，以及文献报道方法的附子提取物中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱的含量，结果见表1。
表1附子提取物中双酯型和单酯型生物碱的含量测定结果(g·^1，以生药计)
权利要求
1.附子提取物，其特征是按下述方式制备得到1’ 将生附子用水充分煎煮后，取煎煮液；2’ 剩余药渣用？!1值< 4的酸水继续充分煎煮后，取煎煮液；3’ 合并上两步煎煮液，加入乙醇，使混合液的含醇体积比例达5(Γ80%后静置，固液分离，液体除去乙醇后浓缩，即为所说的附子提取物。
2.如权利要求1所述的附子提取物，其特征是第1’步的生附子煎煮前，先用水充分浸泡后再用水煎煮。
3.如权利要求2所述的附子提取物，其特征是所说的生附子浸泡时间为<10小时。
4.如权利要求1至3之一所述的附子提取物，其特征是第1’步的生附子煎煮用其重量 5 15倍的水煎煮1、小时。
5.如权利要求1至3之一所述的附子提取物，其特征是第2’步中ρΗ值<4的酸水为盐酸水溶液。
6.如权利要求5所述的附子提取物，其特征是第2’步用生附子重量5 15倍的酸水煎煮广2次，每次1、小时。
7.如权利要求1至3之一所述的附子提取物，其特征是水煎煮和酸水煎煮两步煎煮液合并后，先浓缩至相对密度1. l(Tl. 30后，再加入乙醇处理。
8.权利要求1至7之一的附子提取物在以附子的有效药物成分制备的具有抗炎、镇痛或回阳救逆作用的药物制剂中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征是用于配制参附汤、四逆汤、人参四逆汤及四逆类方药物制剂。
全文摘要
附子提取物及其应用。所说的附子提取物是按下述方式制备得到将生附子用水充分煎煮后，取煎煮液；剩余药渣用pH值≤4的酸水继续充分煎煮后，取煎煮液；合并两步的煎煮液，加入乙醇，使混合液的含醇体积比例达50~80%后静置，固液分离，液体除去乙醇后浓缩即得。该提取物中不含剧毒成分双酯型生物碱，不仅毒性小，而且有利于主要活性成分的单酯型生物碱的稳定，减少其被破坏的损失，能更好地发挥附子的药效作用。该提取物在以附子的有效药物成分制备的具有抗炎、镇痛或回阳救逆作用的药物制剂，包括传统的参附汤、四逆汤、人参四逆汤等药物制剂中得到广泛应用。
文档编号A61K36/714GK102283913SQ20111026394
公开日2011年12月21日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者刘云华, 刘倩伶, 刘玉红, 易进海, 陈燕, 黄志芳 申请人:四川省中医药科学院