专利名称：山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物及其制备方法和用途。
背景技术：
目前流行性感冒病毒日益严重，并且流行性感冒病毒与呼吸道疾病及引起的全身性疾病密切相关，我国是流感高发国家之一，不但人口众多，而且生活习惯也有利于流感病毒的转播，每年人平均发病次数达到O. 3 O. 7次不等，重点人群达到2 4次。流感对人类存在严重威胁，尤其是新发品种流感病毒，其不但引起继发性其它微生物感染，而且会直接导致器官破坏和变态反应致人死亡。但目前并没有有效的治疗流行性感冒病毒及其疾病(流感)的方法和治疗手段，如针对临床症状进行炎症反应治疗，治标不治本。目前最常见的预防和治疗流行性感冒病毒的方法是使用流感病毒疫苗接种，非特异性抗病毒中药或西 药磷酸奥司他韦(达菲) 神经氨酸酶抑制剂。然而流感病毒疫苗预防接种弊端在于接种人群有选择性，不是人人可以接种。此外，流感病毒疫苗保护率不高，保护时间也较短(3 6个月)。目前大多数非特异性抗病毒中药虽然宣称有抗病毒作用，但是并非针对流感病毒，且抗病毒作用机理不清楚。在我们以往研究的许多种治疗外感风寒，西医所认为的感冒的中药组方并没有直接抗流感病毒的作用。简单的说，不是所有的治疗感冒的中药组方都有明确的抑制流感病毒的作用。西药“磷酸奥司他韦(达菲，(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨基-3(1-丙氧乙酯)-1_环己烯-I羧酸乙酯磷酸盐)”是神经氨酸酶抑制剂，对流感病毒进入细胞有特异性抑制作用，但是不仅价格昂贵，而且有一些患者服用后出现呕吐、恶心、失目民、头痛、腹痛、腹泻、头晕、疲劳、鼻塞、咽痛和咳嗽等副反应。达菲是在体内被位于肝脏和肠道的酯酶转化为活性代谢产物而起着抑制神经氨酸酶作用，如果患者肝脏和肠道器官功能不正常也将影响其药效。此外，肾功能不全患者也要慎用。因此，针对性抑制流感病毒复制、抑制流感病毒神经氨酸酶水解细胞表面唾液酸，从而导致流感病毒不能与细胞表面受体结合而进入细胞内，以及减少流感病毒在细胞内的产生将是治疗流感病毒性感冒的病因。
发明内容
本发明的目的是提供一种山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，抑制流感病毒神经氨酸酶水解细胞表面唾液酸，导致流感病毒不能与细胞表面受体结合而进入细胞内，从而能有效的抑制流感病毒复制，更重要地是克服药物的副反应弊端。本发明的另一目的是提供了一种山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物的制备方法。本发明的另一目的是提供了山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物制备预防和治疗流感及其并发症疾病的药物的用途；本发明的另一目的是提供了含有山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物的药物组合物。本发明的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，通过将山香圆叶用乙醇回流提取得至丨J，其中提取方法是取山香圆叶，加5 15倍体积的30 % 90 %乙醇回流提取I 3次，每次回流提取I 3小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用25 90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。优选的，具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 13倍体积的40% 85%乙醇回流提取2 3次，每次回流提取I 2. 5小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用30 85%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。更优选的，具体的提取方法如下具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 11倍体积的50% 80%乙醇回流提取2 3次，每次回流提取I 2小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用35 80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。更优选的，具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 10倍体积的55% 75%乙 醇回流提取2 3次，每次回流提取I I. 5小时，滤过；合并滤液,滤液回收乙醇,水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用40 75%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。更优选的，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用6 9倍体积的60 75%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用45 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。优选的，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用7倍体积的65%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用50 65%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。更优选的，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用8倍体积的70%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。更优选的，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用8倍体积的70%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用15%的乙醇洗脱除去杂质，再用55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中总黄酮含量50%以上。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中还包含黄酮类化学成分及其医学上可以接受的酚酸类成分，黄酮类化学成分含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一种或多种。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达4. 5%U. 2%、2· 5%以上。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷总量达23%以上。本发明还提供了山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物用于制备预防和治疗流感及其并发症疾病的药物的用途，用于抑制流感病毒、流感病毒FM1、抑制神经氨酸酶，并发症是指肾功能衰竭，其并发症是指脾损伤或/和肺损伤。本发明还提供了一种山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物制剂，该制剂以所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物为主要活性成分。本发明的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物能够提取出有效的抑制神经氨酸酶成分，山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物随着使用剂量大小变化，其抑制神经氨酸酶活性的能力，即神经氨酸酶抑制率的高低也相应发生变化，并且成正相关，山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物能够通过抑制流感病毒表面神经氨酸酶，进而抑制流感病毒进入细胞里面、抑制已经进入细胞里面的流感病毒复制、增殖，从而减少了流感病毒对细胞的感染、生长，以及预防和治疗流感及其并发症。
具体实施例方式本发明的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其是通过将山香圆叶加乙醇提取得到的，具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 15倍体积的30% 90%乙醇回流提取I 3次，每次回流提取I 3小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用25 90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中总黄酮含量50%以上。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中还包含黄酮类化学成分及其医学上可以接受的酚酸类成分，黄酮类化学成分含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一种或多种。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达4. 5%U. 2%、2· 5%以上。优选的，所述的山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷总量达23%以上。实施例I制备方法取山香圆叶，用5倍体积的90%乙醇作为提取溶剂，回流提取I次，3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用10%的乙醇洗脱除去杂质，再用7倍量柱体积的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中总黄酮含量51.6%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达 15%,5%,4%0实施例2制备方法取山香圆叶，每次用14倍体积的45%乙醇作为提取溶剂，回流提取I次，2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用15%的乙醇洗脱除去杂质，再用6倍量柱体积的50%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，其中总黄酮含量55. 1%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达8%、12%、5%。
实施例3制备方法取山香圆叶，每次用12倍体积的50%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次I. 5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用18%的乙醇洗脱除去杂质，再用5倍量柱体积的55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量59.6%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达11%、7%、9%。实施例4制备方法取山香圆叶，每次用11倍体积的60%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%的乙醇洗脱除去杂质，再用5. 5倍量柱体积的60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量63.5%，含女贞苷、野漆树苷、 金丝桃苷分别达10%、8%、5%。 实施例5制备方法取山香圆叶，每次用10倍体积的65%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%的乙醇洗脱除去杂质，再用6倍量柱体积的60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量66.8%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达7%、10%、7%。实施例6制备方法取山香圆叶，每次用9倍体积的70%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%的乙醇洗脱除去杂质，再用6倍量柱体积的60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量74.9%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达17%、3%、4%。实施例7制备方法取山香圆叶，每次用8倍体积的70%乙醇作为提取溶剂，回流提取3次，每次I小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用18%的乙醇洗脱除去杂质，再用7倍量柱体积的45%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量80.3%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达12%、2%、3%。实施例8制备方法取山香圆叶，每次用7倍体积的75%乙醇作为提取溶剂，回流提取3次，每次I. 5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用19%的乙醇洗脱除去杂质，再用5倍量柱体积的60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量66.6%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达6 %、5 %、10 %。实施例9制备方法取山香圆叶，每次用6倍体积的80%乙醇作为提取溶剂，回流提取3次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用17%的乙醇洗脱除去杂质，再用6倍量柱体积的65%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量58. 1%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达10%,7%,11%0实施例10制备方法取山香圆叶，每次用5倍体积的85%乙醇作为提取溶剂，回流提取3次，每次2. 5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用15%的乙醇洗脱除去杂质，再用4倍量柱体积的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物，总黄酮含量53.0%，含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达13%、8%、15%。
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实验数据I、提取工艺优化研究山香圆叶主要含黄酮类、有机酸等化合物，黄酮类化合物以乙醇提取效果较佳，因此，我们以乙醇浓度(A)、加乙醇量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)四项作为考察因素，每一因素设三个水平，按L9(34)正交表进行正交实验设计(表I、表2)对提取工艺进行优化研究，考察指标为总黄酮提取率。表I因素水平表
权利要求
1.山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物在制备抑制神经氨酸酶的药物中的用途，所述山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物是通过将山香圆叶用乙醇回流提取得到，其中提取方法是取山香圆叶，加5 15倍体积的30% 90%乙醇回流提取I 3次，每次回流提取I 3小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用25 90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇,浓缩,干燥,得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
2.如权利要求I所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 13倍体积的40% 85%乙醇回流提取2 3次，每次回流提取I 2. 5小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用30 85 %乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩,干燥,得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
3.如权利要求2所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 11倍体积的50% 80%乙醇回流提取2 3次，每次回流提取I 2小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用35 80%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
4.如权利要求3所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，加5 10倍体积的55% 75%乙醇回流提取2 3次，每次回流提取I I. 5小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用40 75 %乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩,干燥,得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
5.如权利要求4所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用6 9倍体积的60 75%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用45 70%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
6.如权利要求5所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用7倍体积的65%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用50 65%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
7.如权利要求5所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用8倍体积的70%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20%以下的乙醇洗脱除去杂质，再用55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
8.如权利要求7所述的用途，具体的提取方法如下取山香圆叶，每次用8倍体积的70%乙醇作为提取溶剂，回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用15%的乙醇洗脱除去杂质，再用55%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
9.如权利要求I 8任一项所述的用途，其中山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物的总黄酮含量50%以上，其中还包含黄酮类化学成分及其医学上可以接受的酚酸类成分，黄酮类化学成分含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷以及槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一种或多种，其中女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷分别达4. 5%U. 2%,2. 5%以上。
10.如权利要求9所述的用途，其中含女贞苷、野漆树苷、金丝桃苷总量达23%以上。
全文摘要
本发明涉及一种山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物在制备抑制神经氨酸酶的药物中的用途，所述山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物是通过将山香圆叶用乙醇回流提取得到，其中提取方法是取山香圆叶，加5～15倍体积的30％～90％乙醇回流提取1～3次，每次回流提取1～3小时，滤过；合并滤液，滤液回收乙醇，水溶液用非极性大孔吸附树脂吸附，用20％以下的乙醇洗脱除去杂质，再用25～90％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩，干燥，得山香圆叶总黄酮乙醇回流提取物。
文档编号A61K36/185GK102920751SQ20111033284
公开日2013年2月13日 申请日期2010年4月13日 优先权日2010年4月13日
发明者唐春山, 王燕平, 张华敏, 谢宁, 吕武清, 杨小玲, 刘地发, 李志勇, 程帆 申请人:江西山香药业有限公司