专利名称：一种氯法齐明用于治疗结核病的药物新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药物的新用途，特别涉及一种氯法齐明的药物新用途。本申请是第200910131770. 9号专利申请的分案申请。
背景技术：
结核病是结核杆菌引起的慢性传染病，目前约有占世界1/3的人口感染过结核菌。我国结核病疫情也呈蔓延趋势，具有患病率高、耐药率高等特点，为全球结核病高负担国家之一。氯法齐明是10-(对-氯苯基)-2，10- 二氢-3-(对-氯苯氨基)-2-异丙亚胺基吩嗪，按干燥品计算，含C27H22Cl2N4不得少于98. 0%，曾用名为氯苯吩嗪，氯法齐明为棕红色或红褐色的结晶或结晶性粉末；无臭。氯法剂明为抗麻风药，对麻风杆菌、溃疡分枝杆菌有抑制和杀灭作用，此外还具有抗炎作用，对治疗和预防II型麻风反应结节性和多形性红斑等均有效。其抗菌作用可能通过干扰麻风杆菌的核酸代谢，与其DNA结合，抑制依赖DNA的 RNA聚合酶，阻止RNA的合成，从而抑制细菌蛋白的合成，发挥其抗菌作用。
发明内容
本发明的目的在于公开一种药物用于治疗结核病的新用途。本发明目的是通过如下技术方案实现本发明药物氯法齐明为10-(对-氯苯基)-2，10- 二氢-3-(对-氯苯氨基)-2-异丙亚胺基吩嗪，按干燥品计算，含C27H22Cl2N4不得少于98. 0%。按药剂学方法，将本发明药物氯法齐明制备成多种临床药物剂型作为治疗结核病的药物，包括胶丸、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、 速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。本发明药物是一种吩嗪染料，通过与分支杆菌的DNA结合抑制转录而产生抑制分支杆菌生长的效果；它的另外一个重要作用是与干扰素合用，可以恢复细胞吞噬和杀菌活性的作用，从而成为吞噬细胞的激发剂，属于免疫治疗的一部分。下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1氯法齐明治疗结核病的药效学实验1、实验目的观察氯法齐明(clofazimine，CLF)在体外及体内抗结核分枝杆菌的活性，为临床应用提供依据.2、实验材料菌株结核分枝杆菌H37Rv (ATCC27294)本研究室保存菌株；30株耐多药结核分枝杆菌临床分离株均为国家结核病参比实验室保存菌株。试剂培养基称取7H9培养基(美国Difico公司)4. 7g，溶于900ml蒸馏水中， 加入2. Oml甘油，121°C高压lOmin，待使用前加入0. 1体积分数的营养添加剂白蛋白-葡萄糖-过氧化氢酶(albumin dextrose catalase，ADC)。阿尔玛蓝(Alamar blue)；英国ktotec公司产品，4°C避光保存。二甲基亚砜(DMSO)分析纯，成都化学试剂厂产品。动物SPF级6-8周龄雌性BALB/C小鼠36只，体重为18_20g，购自首都医科大学实验动物中心。药物异烟胼(INH)、利福平(RFP)均为美国Sigma公司产品；氯法齐明为南京立业制药有限公司惠赠。3、实验方法(I)MIC测定；将200 μ 1灭菌水加入无菌96孔板四周边的各孔中，防止培养过程中孔内的成分蒸发。以DMSO或灭菌蒸馏水溶解药物制成初浓度，用7Η9培养基(不含 twecnSO)稀释成所需的浓度，加入无菌96孔板100 μ 1，测定对H97RvMIC的各药物终浓度分别为:INH :0. 0125,0. 025,0. 05,0. 1、0· 2、0· 4μ g/ml ；RFP :0. 0125,0. 025,0. 05,0. 1、0· 2、 0. 4 μ g/ml ；CLF :0. 03,0. 06,0. 12,0. 24,0. 48,0. 96,1. 92 μ g/ml 测定对耐多药结核分枝杆菌临床分离株MIC的各药物终浓度分别为:ΙΝΗ :1、5、10、20、40μ g/ml ；RFP :1、5、10、20、 40 μ g/ml ；CLF :0. 06,0. 12,0. 24,0. 48,0. 96、1. 92,3. 84 μ g/ml。选取 H37Rv 和 30 株耐多药临床分离菌株的培养物制成菌悬液，接种到含0. 05% tween80U0% ADC的7H9培养基中， 37°C静止培养1-2周，生长至浊度为MoFarland 1. 0 (相当于107CFU/ml)时，1 20稀释后加入各孔100 μ 1，菌液的终浓度为106CFU/ml。每板均设2个不含抗菌药的生长对照孔，96 孔板于37°C孵育。7d后加入生长对照孔20 μ 1 IOXAlamar blue和5% tween80 50 μ 1 的混合液，37°C孵育Mh，如果颜色从蓝色变为粉色，则在各实验药物的孔内加入上述量的 Alamar blue和tween80混合液，37°C孵育24h记录各孔的颜色，蓝色孔为无生长，粉红色孔为有生长。MIC定义为阻止颜色变化(从蓝色变为粉红色)的最低药物浓度。(2)小鼠结核病模型的建立及治疗选取结核分枝杆菌H37Rv2_3周的培养物制成浓度为(5X 105)CFU/ml的菌悬液，36只雌性BALB/C小鼠尾静脉注射0. 2ml/只，感染菌量 IO5CFU/只。于感染后第2天解剖6只小鼠以提供脾重、肺重及活菌数的基础值。将其余小鼠随机分成5组，每组6只。并于感染后第2天开始给药，空白对照组0. 5%羟甲基纤维素钠(CMC)，INH组(阴性对照组):25mg/kg,每周给药5次；CLF-I组:20mg/kg，每周给药5 次；CLF-2组10mg/kg，每周给药5次；CLF-3组20mg/kg，每周给药2次；异烟胼和氯法齐明均应用0. 5% CMC制成混悬液灌胃给药，给药至感染后30d。最后1次给药后的次日，将各组小鼠处死，进行小鼠脾、肺活菌计数。活菌计数方法记录小鼠体重，无菌操作下解剖， 取脾、肺分别勻浆，加入生理盐水制成组织混悬液，分别取小鼠脾、肺的组织混悬液系列10 倍稀释，取0. Iml接种于改良罗氏培养基，各样品的各浓度接种3支，37°C培养4周。观察细菌生长情况，计算活菌数(CFU)。(3)统计学处理数据以^ 士S表示，采用SPSS11.0软件，组间比较采用单因素方
差分析，LSD方差分析法，P <0.01为差异有统计学意义。4、实验结果(1)最低抑菌浓度结果氯法齐明对结核分枝杆菌H37Rv的MIC是0. 12-0. 24 μ g/ml ；异烟胼和利福平的 MIC分别是0. 025,0. 05 μ g/ml ；氯法齐明对30株耐多药结核分枝杆菌临床分离株的MIC范围为0. 12-1. 92 μ g/ml，具体数据见表1。表1氯法齐明对30耐多药结核分枝杆菌临床分离株的MIC ( μ g/ml)
权利要求
1.氯法齐明在制备治疗结核病药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种氯法齐明用于治疗结核病的药物新用途，氯法齐明为10-(对-氯苯基)-2，10-二氢-3-(对-氯苯氨基)-2-异丙亚胺基吩嗪，同时也公开了以氯法齐明为制药原料制备成胶丸、片剂、胶囊剂、滴丸、注射剂等药物制剂。大量试验证明本发明药物具有治疗结核病的作用，临床使用安全有效。
文档编号A61K31/498GK102406643SQ20111037909
公开日2012年4月11日 申请日期2009年4月1日 优先权日2008年4月1日
发明者余述南 申请人:立业制药股份有限公司