专利名称：茅苍术抗胃癌有效组分的制备方法及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及从茅苍术中抗提取胃癌有效组分的提取及其药物制剂，属于中药制剂领域。
背景技术：
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率居各类肿瘤的首位。胃癌的发病率约为整个消化道癌肿的40%-50%，占消化道癌肿的第一位。胃癌是由于正气内虚，加之饮食不节、情志失调等原因引起的，以气滞、痰湿、瘀血蕴结于胃，胃失和降为基本病机，以脘部饱胀或疼痛、纳呆、消痩、黑便、脘部积块为主要临床表现的ー种恶性疾病。西医对胃癌按组织学分类，分为腺癌、未分化癌、粘液癌、特殊类型癌(包括腺鳞癌、鳞状细胞癌、类癌等)。胃癌可发生于胃的任何部位，但半数以上见于胃窦部，尤其是沿小弯侧，其次是贲门，再次为胃底及胃体等部位。目前，胃癌的治疗仍以外科为主，化疗和放疗为辅的治疗手段，虽然近年来治疗方法不断改进，胃癌的治疗效果还不够满意。目前应用中医药治疗胃癌在临床中占有重要地位，不仅表现在中医中药能预防和治疗因化疗和放疗引起的毒性反应和副作用，而且临床实验证明胃癌术后单独采用中药也能有效防止复发和转移，具有延长生存期以及提高胃癌病人生存质量的优势。茅苍术为菊科植物茅苍术/aflcea (Thunb. ) DC.干燥根莖,具有燥湿健脾，祛风散寒，明目的功效，主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒感冒、脾胃不和，泄泻等症。苍术根茎中主要含苍术酮、苍术素、3-β羟基苍术酮、3-β-こ酰基苍术酮、苍术素醇、こ醚苍术素醇、苍术烯内酯甲、苍术烯内酯丙、β-谷甾醇、榄香烯、S-愈创术烯、芹子烯、α -愈创术烯、绿叶烯、I，9-马兜铃ニ烯、榄香醇、3 β -羟基苍术醇、3 β -醋酸基苍术醇等。苍术所含挥发油有驱风健胃作用，所含苦味也有健胃、促进食欲的作用。实验证明苍术有明显的抗副交感神经介质こ酰胆碱引起的肠痉挛。对正常家兔离体小肠的自发运动，苍术使小肠张カ降低。对交感神经介质肾上腺素引起的兔肠肌松弛，苍术制剂能促进肾上腺素抑制作用的振幅恢复，此外，苍术也可通过对抗胆碱作用而对抗盐酸所致大鼠急性胃炎及幽门结扎所致大鼠胃溃疡；另苍术醇有促进胃肠运动作用，对胃平滑肌也有轻微收缩作用。因此，苍术常与其他中药组成复方治疗和预防胃癌，中国专利CN1903346A公开了ー种治疗胃癌的药物，其中包括苍术，但是该药方采用大量的中药材原料进行配制，苍术的抗癌作用成分及机制尚不清楚。本发明提供一种以茅苍术有效组分制备及药物制剂的方法，该有效组分和制剂对胃癌细胞存活有显著的抑制效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种制备方法简单、生产エ艺简洁的从茅苍术提取抗胃癌活性组分的方法并制备出疗效良好的药物制剂。为解决上述技术问题，本发明目的提供一种从茅苍术中提取抗胃癌活性组分的方法。本发明的另ー个目的是提供以茅苍术有效组分制备药物的方法。
本发明所述的茅苍术中抗胃癌活性组分的提取方法，按照下述步骤进行
(O取茅苍术粉末，加入8 12倍质量的蒸馏水，回流提取f 3小时，提取f 3次，合并滤液，减压浓缩至广2 g/mL生药量的茅苍术水提液；
(2)将提取制得的茅苍术水提液转入分液漏斗中，加入O. 5^1. 5倍体积的石油醚，轻轻振摇，静置，待溶液完全分层后，放出下层水溶液，收集石油醚部分；共萃取3飞次，合并石油醚萃取液，在40°C下减压浓缩回收石油醚，浓缩液干燥即为茅苍术水提液的石油醚部位；石油醚萃取后的剰余水溶液按上述方法再依次用こ酸こ酷、正丁醇萃取3飞次；こ酸こ酯萃取液在40°C下减压浓縮，正丁醇萃取液在60°C下减压浓縮，得こ酸こ酯部位，正丁醇部位。
(3)其中上述茅苍术的石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位即为茅苍术中提取抗胃癌活性组分。本发明的另ー个目的是提供了茅苍术有效组分的药物制剂。茅苍术抗胃癌有效组分的药物制剂，由质量百分比的1% — 99%的茅苍术抗胃癌有效组分和99% — 1%的赋形剂组成，优选由质量百分比的30% — 80%的茅苍术有效组分和70%-20%的药用赋形剂组成，最好由质量百分比的50% — 70%的茅苍术有效组分和50% — 30%的赋形剂组成。其中所述的赋形剂为聚こニ醇、硬脂酸、明胶、石蜡、滑石粉、微晶纤维素、こ基纤维素、淀粉、糖粉等。按药剂学方法，可以将本发明的茅苍术有效组分制备成多种临床药物剂型作为抗肿瘤药物，包括ロ服制剂或非肠道给要得剂型。所说的ロ服制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剤、颗粒剂、混悬剂、滴丸、ロ服液体制剂中的任何ー种；所说的非肠道给药剂型选自于气雾剂、或皮下给药剂型当中的ー种。本发明的抗胃癌药物中的放疗是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐齐U、着色剂、粘合剂等。本发明的优点本发明可提供一种制备方法简单、生产エ艺简洁的从茅苍术提取抗胃癌活性组分的方法并制备出疗效良好的药物制剂。
具体实施例方式本发明的茅苍术有效组分具有抗胃癌作用，是通过以下药效实验得到证实的。为了检测本发明所得的抗胃癌活性组分的性能，将本发明所得的抗胃癌活性组分按照配制成0.5 1.5 mg/mL药液，用于胃癌细胞处理，检测提取物对胃癌细胞的抑制活性。抑癌实验证实，本发明所得的抗胃癌活性组分对胃癌细胞存活有显著的抑制效果。实施例I茅苍术有效组分提取
I)以20g茅苍术粉末为原料，加入160 mL蒸馏水，加热回流提取I h，提取液离心抽滤、浓缩I g/mL，得茅苍术水提液。2)将步骤I)所得的提取液加入等体积石油醚，萃取3次，合并石油醚部。将步所得的水部位按照上述石油醚萃取的相同方法依次采用こ酸こ酷、正丁醇萃取，即得こ酸こ酷部位、正丁醇部位。3)将石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位配置成浓度为O. 5 mg/mL的溶液，得抗胃癌活性组分溶液。将上述实施例3所得的抗胃癌活性组分溶液经O. 22 μ m无菌滤膜过滤，所得滤液用于胃癌细胞(BGC-823和SGC-7901)处理，采用MTT法测胃癌细胞的存活率。结果该抗癌活性组分对胃癌细胞的抑制率为BGC-823 :石油醚部位71. 6%，こ酸こ酯部位53. 4 %，正丁醇42. 2 % ；SGC-7901 :石油醚部位73. 7%，こ酸こ酯部位62. 5 %，正丁醇40. 9 %。结果表明这三个组分均具有抗胃癌活性。实施例2茅苍术有效组分提取
I)以20g茅苍术粉末为原料，加入 200 mL蒸馏水，加热回流提取2 h，提取液离心抽滤、浓缩I. 5 g/mL，得茅苍术水提液。2)将步骤I)所得的提取液加入等体积石油醚，萃取4次，合并石油醚部。将步所得的水部位按照上述石油醚萃取的相同方法依次采用こ酸こ酷、正丁醇萃取，即得こ酸こ酷部位、正丁醇部位。3)将石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位配置成浓度为I. O mg/mL的溶液，得抗胃癌活性组分溶液。将上述实施例2所得的抗胃癌活性组分溶液经O. 22 μ m无菌滤膜过滤，所得滤液用于胃癌细胞(BGC-823和SGC-7901)处理，采用MTT法测胃癌细胞的存活率。结果该抗癌活性组分对胃癌细胞的抑制率为BGC-823 :石油醚部位80. 3%，こ酸こ酯部位65. 6 %，正丁醇51. 3 % ；SGC-7901 :石油醚部位84. 7%，こ酸こ酯部位74. 5 %，正丁醇52. 9 %。结果表明这三个组分均具有抗胃癌活性。实施例3茅苍术有效组分提取
I)以20g茅苍术粉末为原料，加入240 mL蒸馏水，加热回流提取3 h，提取液离心抽滤、浓缩2 g/mL，得茅苍术水提液。2)将步骤I)所得的提取液加入等体积石油醚，萃取5次，合并石油醚部。将步所得的水部位按照上述石油醚萃取的相同方法依次采用こ酸こ酷、正丁醇萃取，即得こ酸こ酷部位、正丁醇部位。3)将石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位配置成浓度为2. O mg/mL的溶液，得抗胃癌活性组分溶液。将上述实施例3所得的抗胃癌活性组分溶液经O. 22 μ m无菌滤膜过滤，所得滤液用于胃癌细胞(BGC-823和SGC-7901)处理，采用MTT法测胃癌细胞的存活率。结果该抗癌活性组分对胃癌细胞的抑制率为BGC-823 :石油醚部位81. 5%，こ酸こ酯部位63. 5 %，正丁醇50. I % ；SGC-7901 :石油醚部位82. 6%，こ酸こ酯部位73. 6 %，正丁醇53. 8 %。结果表明这三个组分均具有抗胃癌活性。实施例4滴丸的制备
分别称取300 g聚こニ醇4000，在水浴上熔化，再分别加入茅苍术有效组分原料(石油醚部位)，こ酸こ酯部位，正丁醇部位)350 g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80— 90で下滴入冷却过的液体石蜡中(温度±4°C )，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，再加入少量滑石粉，混匀，得茅苍术有效组分滴丸1000粒。こ酸こ酯部位，正丁醇部位的滴丸制备方法同石油醚部位。实施例5微囊片的制备分别称取硬脂酸30 g和40 mL明胶作为复方囊材，分别称取茅苍术有效组分(石油醚部位，乙酸乙酯部位，正丁醇部位)100 g作为囊心物，以压缩空气空气通过喷雾冻结法成囊，囊径为8 —100 Um0然后将微囊与微晶纤维素混匀，加10%乙基纤维素醇溶液混合制成囊材，通过18目尼龙筛制成颗粒，于35°C以下烘干，在放置干燥器内24小时，加1% — 2%硬脂酸镁压片，得茅苍术有效组分微囊片，片重为0. 3g。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的微囊片制备方法同石油醚部位。实施例6胶囊剂的制备
茅苍术有效组分石油醚部位原料1000 g，与药用淀粉500 g混合均匀，装入0#胶囊，每粒0. 35g。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的胶囊剂制备方法同石油醚部位。
实施例7片剂的制备
茅苍术有效组分石油醚部位原料lOOOg，淀粉500g，混合均匀，用适量乙醇制粒，经整粒机整粒，压片，每片0.25 g。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的片剂的制备方法同石油醚部位。实施例8颗粒剂的制备
茅苍术有效组分石油醚部位原料1500g，淀粉lOOOg，糖粉400g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装即得。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的滴丸制备方法同石油醚部位。实验例茅苍术有效组分的体外对胃癌细胞的抑制作用
细胞人胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901，由江苏大学生命科学院医学分子生物学实验室提供。试药及药材DMEM培养基、胎牛血清(FBS)(Gibco公司);四甲基偶氮唑蓝(MTT)、胰蛋白酶、DMSO (Sigma公司)；茅苍术药材采于江苏句容。仪器MK3 型酶标仪(Thermo Labsystems 公司)；FACS Calibur 流式细胞仪(BD公司，美国)；Nikon TS100型倒置显微镜(Nikon公司)；Ti-2000荧光倒置显微镜(Nikon公司)；超净工作台(苏州净化设备厂)；INC02/108型C02培养箱(德国MEMMERT公司)。方法 MTT法取对数生长期胃癌BGC-823和SGC-7901细胞移入96孔培养板，细胞密度为lX105/mL，每孔加入200 ML。将培养板移入细胞培养箱继续培养24 h，吸弃孔内原培养液，加入梯度浓度药物，设空白对照，移入细胞培养箱继续培养24 h和48 h，每组药物设5个平行复孔。分别培养24 h后，每孔加入5 mg mL—1 MTT溶液20 ML，继续培养4 h后终止培养，小心吸弃孔内上清液，每孔加入DMSO 150 ML，使结晶充分溶解，用酶标仪测定吸光度(OD)值，检测波长为490 nm，计算细胞增殖抑制率抑制率(％)= (I 一 OD药物/OD空白对照)X 100%。表I MTT法测定两种胃癌细胞的抑制率(%)
权利要求
1.茅苍术中抗胃癌活性组分的提取方法，其特征在于按照下述步骤进行 (O取茅苍术粉末，加入8 12倍质量的蒸馏水，回流提取f 3小时，提取f 3次，合并滤液，减压浓缩至f 2 g/mL生药量的茅苍术水提液； (2)将提取制得的茅苍术水提液转入分液漏斗中，加入O.5^1. 5倍体积的石油醚，轻轻振摇，静置，待溶液完全分层后，放出下层水溶液，收集石油醚部分；共萃取3飞次，合并石油醚萃取液，在40°C下减压浓缩回收石油醚，浓缩液干燥即为茅苍术水提液的石油醚部位；石油醚萃取后的剰余水溶液按上述方法再依次用こ酸こ酷、正丁醇萃取3飞次；こ酸こ酯萃取液在40°C下减压浓縮，正丁醇萃取液在60°C下减压浓縮，得こ酸こ酯部位，正丁醇部位； (3)其中上述茅苍术的石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位即为茅苍术中提取抗胃癌活性组分。
2.茅苍术抗胃癌有效组分的药物制剂，其特征在于由质量百分比的1%— 99%的权利要求I制备得到的茅苍术抗胃癌有效组分和99% — 1%的赋形剂组成，其中所述的赋形剂为聚こニ醇、硬脂酸、明胶、石蜡、滑石粉、微晶纤维素、こ基纤维素、淀粉或糖粉。
3.根据权利要求2所述的茅苍术抗胃癌有效组分的药物制剂，其特征在于由质量百分比的30% — 80%的茅苍术有效组分和70%-20%的药用赋形剂组成。
4.根据权利要求3所述的茅苍术抗胃癌有效组分的药物制剂，其特征在于由质量百分比的50% — 70%的茅苍术有效组分和50% — 30%的赋形剂组成。
全文摘要
本发明茅苍术抗胃癌有效组分的制备方法及其药物制剂，属于属于中药制剂领域。茅苍术提取物的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位提取物具有明显的体外抗胃癌作用。本发明涉及了茅苍术抗胃癌有效组分的提取方法，并用体外细胞实验证实三种组分对胃癌细胞具有较好的抑制作用，同时也公开了以茅苍术抗胃癌有效组分为主要原料制备成片剂、胶囊剂、滴丸等药物制剂。
文档编号A61P35/00GK102670686SQ201210047728
公开日2012年9月19日 申请日期2012年2月29日 优先权日2012年2月29日
发明者吴燕, 杨兵, 欧阳臻, 王庆庆, 赵明, 韩邦兴 申请人:江苏大学