专利名称：免疫性习惯性流产的药物治疗及检测方法
技术领域：
本发明涉及ー种治疗反复自然流产的药物和方法。
背景技术：
流产是妊娠28周前，胚胎及其附属物被孕妇体内排除的现象。根据流产发生时间，12周以前发生者称为早期流产，12周以后发生者称为晚期流产。根据发生原因分为自然流产和人工流产两类，人工流产是指通过手术或药物终止妊娠的方法；自然流产是指没有人エ干预，由于某种疾病引起的妊娠終止，包括偶然自然流产和反复自然流产两类。反复自然流产(recurrent spontaneous abortion, RSA)是指连续2次以上在同一妊娠周内发生胎停育继而流产的现象。在孕妇中反复自然流产的发病率为2-3%。根据流产发生的时间，可分为早期RsA和晩期RSA ;根据流产前有无正常怀孕史，可分为原发性RSA和继发性RSA。临床上将两种分类结合起来，将RSA分为早期原发RSA，晩期原发RSA，早期继发RSA和晚期继发RSA。多种病因可以引起反复自然流产，其中有染色体异常、内分泌失调、生殖器官解剖结构异常、细菌或病毒感染、母婴血型不合、环境污染等。但还有一半左右的反复自然流产没有明确病因，被称为不明原因的反复自然流产(unexplained RsA)。近年来随着对生殖免疫机制认识的深入，以及免疫学检查方法的进步，免疫因素被认为是不明原因反复自然流产的主要病因[Ksouri H, Zitouni M, Achour ff, Maknib, Ben Hassen A. , Recurrent pregnancy loss related to immune disorders,Ann Med Interne (Paris) 2003s 印；154 (4) :233-47.]。与免疫因素有关的 RSA 被称为免疫性 RSA。流行病学调查显示早期继发RSA多为免疫性RSA。关于引起RsA的免疫学机制，几种代表性观点如下(I)夫妇HLA的相容性高(increased sharing of human leukocyte antigens (HLA)),抑制母体产生抗配偶细胞毒性抗体(anti-paternal cytotoxicantibodies, APCA)、抗个体基因型抗体(anti-idiotypic antibodies, Ab2)、混合淋巴细胞反应阻断抗体(mixed lymphocyte reaction blocking antibodies, MLR-Bf)等阻止母亲免疫系统对胚胎攻击的封闭抗体(blocking antibodies, BA) ； (2)辅助T细胞I(Thl)来源的细胞因子和自然杀伤细胞的(natural killer cells, NK)过度活化(Overactivity of T helper-1 (Th-I) cytokines) ； (3)抗憐脂抗体(antiphosphokipidantibodies APA)水平的异常增高抗磷脂抗体是ー组自身免疫性抗体，其中包括抗心憐月旨抗体、各良疮饥 7疑抗体(i.e., lupus anticoagulants and anticardiolipin [aCL]antibodies)等。由于对母体和胎儿之间的免疫相容机制缺乏透彻的了解，现在对反复自然流产的免疫学发病机制还没有准确的认识，至今还没有疗效十分确定的治疗方法。现在应用比较广泛的免疫性RSA的治疗方法是淋巴细胞免疫治疗。自Taylor和Faulk于1981年首次给不明原因RSA患者输注取自配偶的混合白细胞悬液后，RSA的免疫治疗在国内外均已开肢[batenby PA,しameron K, bimes RJ. Treatment of recurrent spontaneous abortionby immunization with paternal lymphocytes results of a controlled trial. Am JReprod Immunol. 1993Mar ；29(2) :88-94.]。免疫原多采用丈夫的淋巴细胞。方法为从配偶的静脉血中分离提取淋巴细胞，皮内注射；也可以用丈夫的浓缩白细胞或全血进行静脉注射；如果先用200radX射线照射灭活细胞再行皮内注射，可减少抗宿主反应。通常在妊娠前免疫2 4次，毎次间隔2周，妊娠后加强免疫I 3次。在淋巴细胞免疫治疗RSA开展20年后的今天，经国内外学者大量研究，发现该治疗方法治疗效果不确定，副作用大。有学者检索了 1981 1994. 9间发表的大部分RSA免疫治疗的文献，发现有严格实验对照和具有分析价值的6份研究结果中中仅ー份显示RSA免疫治疗有效，其余研究中治疗组与对 照组相比无统计学差异(颜建化、朱锡华，论反复自然流产免疫治疗的科学性与研究対策，科学，1994. 6 59-62)。Charles A. Omwandho 等(Recurrent Pregnancy Losses and theRole of Immunotherapy. Review Article, Arch Gynecol Obstet (2000) 264 :3-12)发现，虽然ー些实验数据看起来支持淋巴细胞免疫治疗的有效性，但与用非免疫方法例如心理支持、关爱等治疗的对照组相比，临床治愈率没有统计学差异。用失活的细菌或融血后UV照射的自身血液对RSA患者进行免疫治疗，取得了同样高的治愈率。这些实验结果置疑了淋巴细胞免疫治疗的有效性。此外，淋巴细胞治疗有ー些严重的副作用，例如红细胞致敏、血小板減少、胎儿宫内生长迟缓等。而且由于该方法使用的是具有完整核物质的活细胞，因此ー些通过血液传播的疾病如AIDS等可以从ー个个体转移到另ー个个体。因此，本领域迫切需要ー种疗效确切、副作用小的针对免疫性RSA的治疗方法。本发明人在对免疫性早期继发RSA的发病机理的深入研究基础上，建立了ー种高效、安全的RSA免疫治疗方法。发明概述本发明提供I) 一种用于治疗个体反复自然流产的药物组合物，其特征在于含有治疗有效量的来自所述个体配偶的2号染色体或其含有纤连蛋白(fibronectin，FN)编码基因的片段。2) 一种用于治疗个体反复自然流产的药物组合物，其特征在于其含有治疗有效量的来自多个男性个体的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段的混合物。3)作为药物的男性2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段。4)能够降低体内抗核抗体水平的物质、特别是来自男性的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段在制备治疗反复自然流产的药物中的应用。5) ー种治疗个体反复自然流产的方法，其包括给予需要治疗的个体治疗有效量的能够降低体内抗核抗体水平的物质。6)根据上述5)的治疗方法，其中所述能够降低体内抗核抗体水平的物质是来自所述个体配偶的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段。7)根据上述5)的治疗方法，其中所述能够降低体内抗核抗体水平的物质是来自多个男性个体的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段的混合物。本发明提供的RSA治疗药物组合物和治疗方法经临床验证，疗效确切(有效率在95%以上)，未发现明显副作用。发明详沭本发明人对早期继发RSA进行了临床流行病学研究，发现在多种相关因素中人流与早期继发RSA的相关性最高，并且其中大多数继发自然流产发生的妊娠周与人流的妊娠周相同或相近，与对照组相比具有显著的统计学差异(结果见表I)。因此，本发明人推測人流是早期继发RSA的诱因。表I早期继发RSA的流行病学调查
项目病例数(N)人流时间一致
例数百分比(％) 例数百分比(％ )
_ RSA3532 __ 913086
对照__MO__28— _20 _ ——— ——_
_x2 _ _52.4_ _
P _ <0.01 _ __ _为了探询早期继发RSA的发病机制，本发明人对有人流病史的早期继发RSA患者的再次怀孕进行监测，当发现胚胎停育后，通过药物流产获得具有完整胎盘绒毛的RSA胚胎标本。无反复自然流产患者药物流产所获得的胚胎标本作为对照。对所获得的胚胎绒毛组织进行显微水平和超微水平的观察，并进行免疫组化研究。结果发现，在光镜下这两种绒毛结构没有差别，但在电镜下，对照标本的滋养层细胞外有一层致密的蛋白网结构，而RSA患者标本的滋养层细胞是裸露的(结果见图I和图2)。免疫组化显示，对照标本的滋养细胞层与蜕膜之间存在纤连蛋白带，并且滋养细胞之间也存在纤连蛋白帯，而RSA患者标本的滋养层细胞外没有纤连蛋白。因此本发明人认为滋养细胞层外的纤连蛋白带是构成胎盘免疫屏障的主要结构，该纤连蛋白带缺失所导致的免疫屏障功能破坏是免疫性RSA的病因。为了研究免疫性RSA患者滋养细胞层外的纤连蛋白带缺陷的原因，本发明人用检测纤连蛋白抗体的试剂盒检测了 30例有人流病史的早期继发RSA患者血清中的抗FN抗体，结果与对照组相比无统计学差异。但令人惊异的是，本发明人发现这些患者血清中抗2号染色体(含FN编码基因)的抗核抗体水平(按实施例2所述方法測定)与对照组相比明显升高(见表2)。因此本发明人对免疫性RSA的发病机制提出如下假说在对妊娠进行人工干预例如人工流产的过程中，胚胎细胞破裂，配偶来源的处于表达状态的FN编码基因作为抗原被递呈给母体的免疫系统，产生抗FN编码基因的抗核抗体。与同一配偶再次怀孕时，抗FN编码基因的抗核抗体进入滋养细胞，与处于表达状态的FN基因结合，封闭该基因，使胚胎滋养层细胞外的纤连蛋白不能正常形成，胎盘免疫屏障的完整性被破坏，从而母体对胚胎产生排斥反应，胚胎停止发育，流产发生。 FN是ー种大分子多功能糖蛋白，存在于结缔组织、细胞表面、细胞浆和其它体液中。已有研究发现胚胎滋养细胞外存在FN带，但认为它仅在胎盘与蜕膜的连接[RonaldF. Femberg, Harvey J. Kiiman, ana しharles J. Lockwood, Is Oncofetal Fibronectma Trophoblast Glue for Human Implantation American Journal of Pathology,Vol. 138，No. 3，March 1991]、滋养细胞在蜕膜中的移动和侵袭中起作用[Chakraborty C，Gleeson LM, McKinnon T, Laia PK. , Regulation of numan trophoblast migration andinvasiveness. Can J Physiol Pharmacol. 2002 Feb ；80 (2) :116-24. Review.]。还有研究认为检测孕妇宫颈分泌物中的FN水平能够预测早产[Koenn ME. ,Fetal fibronectin,ClinLab Sci. 2002 Spring ；15(2) :96_8，115]。但现有技术对于FN在胚胎免疫屏障中的作用没有明确的认识。1995年通过放射自显影技术证实了人类FN基因位于2号染色体长臂3区4 带(2q34)。本发明人在上述对免疫性RSA发病机制的研究基础上，进行了进ー步的深入研究，试图寻找对免疫性RSA的有效治疗方法。结果惊人地发现，给免疫性早期继发RSA患者怀孕前注射配偶来源的含FN编码基因的2号染色体，可以有效地降低患者外周血中抗2号染色体的抗核抗体水平(表2)。更令人异的是，通过孕前和/或孕中显著降低所述抗核抗体水平，可以使免疫性RSA患者正常妊娠和生育。表2治疗前后免疫性RSA患者血清抗核抗体水平的变化
权利要求
1.一种用于治疗个体反复自然流产的药物组合物，其特征在于其含有治疗有效量的来自所述个体配偶的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段。
2.根据权利要求I的药物组合物，其特征在于其含有分离的完整2号染色体。
3.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于所述2号染色体是分离自M期体细胞的2号染色体。
4.一种用于治疗个体反复自然流产的药物组合物，其特征在于其含有治疗有效量的来自多个男性个体的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段的混合物。
5.根据权利要求4的药物组合物，其特征在于其含有分离的完整2号染色体。
6.根据权利要求5的药物组合物，其特征在于所述2号染色体是分离自M期体细胞的2号染色体。
7.根据权利要求4的药物组合物，其特征在于所述多个男性个体是指3名以上男性个体。
8.根据权利要求4的药物组合物，其特征在于所述多个男性个体是指10名以上男性个体。
9.根据权利要求4的药物组合物，其特征在于所述多个男性个体是指20名以上男性个体。
10.作为药物的男性2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段。
11.能够降低体内抗核抗体水平的物质在制备治疗反复自然流产的药物中的应用。
12.权利要求11的应用，其中所述能够降低体内抗核抗体水平的物质是来自男性的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段。
13.ー种治疗个体反复自然流产的方法，其包括给予需要治疗的个体治疗有效量的能够降低体内抗核抗体水平的物质。
14.根据权利要求13的方法，其中所述能够降低体内抗核抗体水平的物质是来自所述个体配偶的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段。
15.根据权利要求14的方法，其特征在于其中给予分离的完整2号染色体。
16.根据权利要求15的方法，其特征在于所述2号染色体是分离自M期体细胞的2号染色体。
17.根据权利要求13的方法，其中所述能够降低体内抗核抗体水平的物质是来自多个男性个体的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片段的混合物。
18.根据权利要求17的方法，其特征在于其中给予分离的完整2号染色体的混合物。
19.根据权利要求18的方法，其特征在于所述2号染色体是分离自M期体细胞的2号染色体。
20.根据权利要求17的方法，其特征在于所述多个男性个体是指3名以上男性个体。
21.根据权利要求20的方法，其特征在于所述多个男性个体是指10名以上男性个体。
22.根据权利要求21的方法，其特征在于所述多个男性个体是指20名以上男性个体。
全文摘要
本发明公开了一种治疗个体的免疫性反复自然流产的药物组合物，其含有治疗有效量的能够降低体内抗核抗体水平的物质，特别是来自所述个体配偶的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片断，或者治疗有效量的来自多个男性个体的2号染色体或其含有纤连蛋白编码基因的片断的混合物。还公开了治疗免疫性反复自然流产的方法。
文档编号A61K48/00GK102657876SQ20121010874
公开日2012年9月12日 申请日期2004年2月20日 优先权日2004年2月20日
发明者陈凤林 申请人:北京新景安太医疗技术服务有限公司