专利名称：一种忍冬藤多糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别是一种忍冬藤多糖的制备方法。
背景技术：
中药忍冬藤(Casulis Lonicerae)为忍冬科植物忍冬Loflicera的干燥茎枝，资源丰富，价廉易得。中医用于治疗温病发热，热毒血痢，痈肿疮疡，风湿热痹，关节红肿热痛。具有清热解毒，疏风通络的功能。目前对忍冬藤的研究仅限于有机酸类、黄酮类、 鞣质、生物碱等化合物的研究，而对忍冬藤多糖的研究在国内外均无人涉足，目前已有研究报道表明，忍冬的花蕾金银花的多糖具有较好的提高免疫和抗氧化活性，是一种在治疗肿瘤及抗衰老方面的潜力药。作为忍冬藤茎的忍冬藤，其多糖极有可能与金银花多糖具有相同的功效，因此，如何研制出一种从忍冬藤中提取忍冬藤多糖，且多糖得率高的忍冬藤多糖制备方法为众所期待。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种忍冬藤多糖的制备方法，可有效解决忍冬藤多糖的制备问题。本发明解决的技术方案是，包括以下步骤
(1)将忍冬藤干燥、粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末f3kg备用；
(2)称取忍冬藤粉末重量体积O.5% 2. 5%的酶，在酶中加入10-20倍酶重量体积的 30 60°C的水，溶解，30 60°C水浴活化5 45分钟，得活化的酶溶液，备用；
(3)将上述称取的忍冬藤粉末与水以I:10 20的重量体积比混合，40 90°C水浴， 浸泡20 120分钟，冷却至18 25°C，用盐酸调pH至4. O 5. 5，摇匀，水浴加热至40 55°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2 12小时；
(4)将第(3)步所得溶液用80 95°C水浴回流提取2 5次，每次2 5小时，过滤， 合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1-2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1-2倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖；
所述的酶为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、β_葡聚糖酶、蛋白酶中的一种或两种以上的混合。本发明操作简单、方便、快速，多糖得率高，初始反应物便宜易得，大大减少了制备成本，提取的忍冬多糖纯度高，并且保留了较高的生物活性，是忍冬藤多糖制备上的创新， 经济和社会价值显著。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明的具体实施方式
作详细说明。
实施例I
(1)将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末Ikg备用；
(2)称取5g的纤维素酶，在纤维素酶中加入50ml32°C温水，溶解，32°C水浴活化28分钟，得活化的酶溶液，备用；
(3)将上述称取的忍冬藤粉末与10000ml水混合，40°C水浴，浸泡120分钟，冷却至 18°C，用盐酸调pH至5. 3，摇匀，水浴加热至55°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2小时；
(4)将第(3)步所得溶液用80 95°C水浴回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液， 浓缩至忍冬藤粉末重量体积的2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的I倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。实施例2
(1)将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末2kg备用；
(2)称取果胶酶30g，在果胶酶中加入450ml 45°C温水，溶解，45°C水浴活化20分钟， 得活化的酶溶液，备用；
(3)将上述称取的忍冬藤粉末加水30000ml混合，70°C水浴，浸泡50分钟，冷却至 200C，用盐酸调pH至4，摇匀，水浴加热至47°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解5小时；
(4)将第(3)步所得溶液用95°C水浴回流提取3次，每次5小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的I倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的I倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。实施例3
(1)将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末3kg备用；
(2)称取木聚糖酶75g，在木聚糖酶中加入1500ml58°C温水，溶解，58°C水浴活化8分钟，得活化的酶溶液，备用；
(3)将上述称取的忍冬藤粉末加水60000ml混合，80°C水浴，浸泡20分钟，冷却至 250C，用盐酸调pH至4. 5，水浴加热至40°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解11小时；
(4)将第(3)步所得溶液用95°C水浴回流提取4次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的I倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；
(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的I倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。所述的酶为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶中的一种或两种以上的混合。所述的重量体积是固体按照g计,液体按照ml计。本发明制备的忍冬藤多糖，经检测多糖含量达到50%以上。方法稳定，可靠，经多次试验均取得了相同或相近的结果，其目的物经鉴定和分析为忍冬藤多糖，经过大量常规动物实验，其目的物具有清热解毒，疏风通络的疗效，并且显著提高了实验动物的免疫及抗衰老能力。本发明操作简单、方便、快速，多糖得率高，初始反应物便宜易得，大大减少了制备成本，提取的忍冬多糖纯度高，并且保留了较高的生物活性，是忍冬藤多糖制备上的创新， 经济和社会价值显著。
权利要求
1.一种忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将忍冬藤干燥、粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末f3kg备用；(2)称取忍冬藤粉末重量体积O.5% 2. 5%的酶，在酶中加入10-20倍酶重量体积的 30 60°C的水，溶解，30 60°C水浴活化5 45分钟，得活化的酶溶液，备用；(3)将上述称取的忍冬藤粉末与水以I:10 20的重量体积比混合，40 90°C水浴， 浸泡20 120分钟，冷却至18 25°C，用盐酸调pH至4. O 5. 5，摇匀，水浴加热至40 55°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2 12小时；(4)将第(3)步所得溶液用80 95°C水浴回流提取2 5次，每次2 5小时，过滤， 合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的1-2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的1-2倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖；所述的酶为纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、β_葡聚糖酶、蛋白酶中的一种或两种以上的混合。
2.根据权利要求I所述的忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末Ikg备用；(2)称取5g的纤维素酶，在纤维素酶中加入50ml32°C温水，溶解，32°C水浴活化28分钟，得活化的酶溶液，备用；(3)将上述称取的忍冬藤粉末与10000ml水混合，40°C水浴，浸泡120分钟，冷却至 180C，用盐酸调pH至5. 3，摇匀，水浴加热至55°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解2小时；(4)将第(3)步所得溶液用80 95°C水浴回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液， 浓缩至忍冬藤粉末重量体积的2倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的I倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
3.根据权利要求I所述的忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末2kg备用；(2)称取果胶酶30g，在果胶酶中加入450ml 45°C温水，溶解，45°C水浴活化20分钟， 得活化的酶溶液，备用；(3)将上述称取的忍冬藤粉末加水30000ml混合，70°C水浴，浸泡50分钟，冷却至 200C，用盐酸调pH至4，摇匀，水浴加热至47°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解5小时；(4)将第(3)步所得溶液用95°C水浴回流提取3次，每次5小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的I倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的I倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
4.根据权利要求I所述的忍冬藤多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将忍冬藤干燥，粉碎过20目筛，得忍冬藤粉末，称取忍冬藤粉末3kg备用；(2)称取木聚糖酶75g，在木聚糖酶中加入1500ml 58°C温水，溶解，58°C水浴活化8分钟，得活化的酶溶液，备用；(3)将上述称取的忍冬藤粉末加水60000ml混合，80°C水浴，浸泡20分钟，冷却至 250C，用盐酸调pH至4. 5，水浴加热至40°C，加入上述活化的酶溶液，混匀，酶解11小时；(4)将第(3)步所得溶液用95°C水浴回流提取4次，每次3小时，过滤，合并滤液，浓缩至忍冬藤粉末重量体积的I倍，再加入乙醇至含醇量达到80%，静置12小时，离心去除上清液，得忍冬藤多糖沉淀物；(5)依次向忍冬藤多糖沉淀物中加入沉淀物重量体积的I倍量的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，去除上清液后的沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖。
全文摘要
本发明涉及忍冬藤多糖的制备方法，可有效解决忍冬藤多糖的制备问题，其解决的技术方案是，将忍冬藤干燥、粉碎，备用；在酶中加入水，溶解，水浴活化，得活化的酶溶液，备用；将忍冬藤粉末与水混合，水浴，浸泡，调pH至4.0～5.5，摇匀，水浴加热，加入活化的酶溶液，混匀，酶解，水浴回流提取，过滤，浓缩，加入乙醇至含醇量达到80%，静置，离心去除上清液，得多糖沉淀物；依次向多糖沉淀物中加入无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，离心去除上清液，沉淀物真空干燥，得忍冬藤多糖；本发明操作简单、方便、快速，多糖得率高，初始反应物便宜易得，大大减少了制备成本，提取的忍冬多糖纯度高，并且保留了较高的生物活性，经济和社会价值显著。
文档编号A61P39/00GK102603914SQ20121011767
公开日2012年7月25日 申请日期2012年4月20日 优先权日2012年4月20日
发明者刘富岗, 卫冰, 杨云, 许闽 申请人:河南中医学院