专利名称：染料木素衍生物在制备治疗学习记忆障碍疾病药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于化学制药技术领域，具体涉及染料木素衍生物4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮在制备治疗学习记忆障碍药物中的应用。 ニ背景技术：
随着人口的老龄化及精神压カ的増大，学习 认知障碍成为严重的社会问题。雌激素及植物雌激素在改善学习记忆方面有突出作用(Barbara BS. Estrogen and cognitiveaging in women. TRENDS in Pharmacological Sciences. 2002;23(11):527-534. ;CraigMC and Murphy DG. Oestrogen, Cognition and the Maturing Female Brain. Journal ofNeuroendocrinology 2006; 19:1-6)。除绝经期及围绝经期女性外,有人曾给男性记忆障碍患者服用小剂量雌激素，成功地改善了其学习记忆功能(Sex steroids modify workingmemory. Janowsky JS, Chavez B, Orwoll E. J Cogn Neurosci. 2000;12(3):407-14)。因雌激素广泛作用于ER α和ER β，剂量控制不好会导致雌激素相关的肿瘤(HorwitzKB,Koseki Y, McGuire WL. Estrogen control of progesterone receptor in numanbreast cancer:role of estradiol and antiestrogen. Endocrinology. 1978;103(5) : 1742-51)。为增加雌激素对靶点的专属性，尽最大可能降低不良反应，对植物雌激素染料木素进行结构改造，首次得到染料木素衍生物4’，5’ - ニ羟基-7-[4-(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮(简称GS 14)。4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮对ER β有更强的结合力，能更好地改善学习记忆降低不良反应，目前改善学习记忆方面的药物中尚无此类结构的报道。
发明内容
本发明需要解决的问题是研究植物雌激素染料木素衍生物4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮在制备改善学习记忆药物中的应用。本发明所述4’，5’-ニ羟基-7-[4-(队トニこ氨基)丁氧基]异黄酮的结构式如下
化W^>OH本发明发现，4’，5’ - ニ羟基-7-[4_(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮可一定程度上促进依赖雌激素生长的人乳腺癌细胞株MCF-7的増殖，该增殖可被雌激素受体的拮抗剂ICI182670所抑制，说明4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮依旧具有雌激素活性。当给予雌性去势小鼠(行卵巣切除木)4’，5’ ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮后，在水迷宫实验中，小鼠的潜伏时间显著缩短；Y迷宫实验中，小鼠的错误次数显著降低。说明4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮能够有效改善学习记忆能力。这种学习记忆的改善是和CaMKII磷酸化的增强相一致的。本发明的有益效果是本发明所述染料木素衍生物4’，5’ - ニ羟基-7-[4_(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮有很好的改善学习记忆的作用，可用于制备改善学习记忆的药物。目前上市的改善学习记忆的药物中，尚未见此结构的报道，故该结构开发为改善学习记忆药物将有重要的意义及深远的影响。本发明提供了一种疗效好、エ艺简单、成本低廉的新药，填补了此类治疗药物的空白。
四
图I. 4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮(GS14)增加了小鼠大脑皮层CaMKII和pCaMKII的表达。Sham:假手术组；0VX:卵巢切除术组；GSL:GS 14低剂量(lmg/kg) ；GSH:GS 14 高剂量(5mg/kg)。X=Mean土SD, n=10。##P<0. Olvs Sham ；*P<0. 05, **P<0. Olvs OVX。
五具体实施例方式I. 4’，5’ - ニ羟基-7-[4-(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮的合成及鉴定见专利(申请号201010573851. 7谭仁祥、史大华、吴俊华、宴志强、张丽娜、王玉蓉。名称“ 4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮及其制备方法和应用。”申请日期2010年12月6日)。实施例I :4’，5’ - ニ羟基-7-[4_(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮及其制备制备染料木素衍生物4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮，包括以下步骤①4’，5’ - ニ羟基-7- [4- (N, N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮的制备染料木素(O.27g, Immol), I, 4_ ニ漠丁烧(5. 4g, 25mmol), K2C03 (O. 07g, O. 5mmol)溶解在60ml的无水DMF中，40°C下超声反应I. 5h。反应完成后，将混合物冷却到室温。滤除不溶物后，滤液减压蒸馏得到淡黄色固体，丙酮中重结晶得到浅黄色针状晶体，产率86%，熔点 130-131 °C。1H 匪R(DMS0-d6) : I. 83 (m,2H), I. 94 (m，2H)，3.60 (t, J=6. 2Hz,2H),4. 12 (t,J=6. 4Ηζ，2Η)，6· 40 (d, J=2. 0Hz, 1H),6. 65 (d, J=2. 0Hz, 1H),6. 80 (d, J=8. 5Hz, 1H),7. 38(d, J=8. 5Hz，2H)，8. 4 (s, 1H)，9. 65 (s, 1H)，12. 95 (s, 1H). ESI-MSC19H17BrO5[M+H] +405. CalcdforC19H17Br05 :C, 56. 31 ;H, 4. 23. Found :C, 56. 28 ;H, 4. 27.②4’，5’ - ニ羟基-7- [4- (N, N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮的制备将化合物4’，5’ - ニ轻基-7-4-溴丁氧基)异黄酮(O. 40g, Immol)溶于5ml无水DMF中，慢慢滴加ニこ胺(O. 37g,5mmol), 80°C _90°C下搅拌lh，反应产物慢慢倾入IOOml冰水混合物中，静置过夜，滤出固体，丙酮重結晶，产物为4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮，产率82%，熔点170-171で。1H NMR(DMS0-d6) :O. 94 (t, J=7. 2Hz, 6H), I. 52 (m,2H), I. 72 (m，2H)，2 . 4 (m,2H),3. 33 (t，J=7. 0Ηζ，4Η)，4· I (t, J=6. 5Hz,2H),6. 39 (d, J=2. 0Hz, 1H),6. 64 (d, J=2. OHz,1H)，6. 82 (d, J=8. 5Hz，2H)，7. 39 (d, J=8. 5Hz, 2H)，8. 40 (s, 1H) ,9. 60 (s, 1H)，12. 93 (s, 1H).ESI-MS C23H27NO5[M+H]+398. Anal. Calc, for C23H27NO5:C, 69. 50;H, 6. 85;N, 3. 52.Found: C, 69. 60; H, 6. 79; N, 3. 58.2、4’，5’ - ニ羟基-7-[4_(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮的雌激素样作用MCF-7以4500个细胞/孔的密度接种96孔板，24h后换成无雌激素的培养基(无酚红的DMEM，含10%经过葡聚糖/活性碳过滤的胎牛血清)。继续培养48h，完全消耗掉细胞中的雌激素。更换培养基后，分别加入10, 10_5M的4’，5’ - ニ羟基-7-[4-(N，N- ニこ氨基)丁氧基]异黄酮，或加入10_9M的雌激素受体抑制剂ICI182680后，再分别加入10_1(1 10_5M的4’，5’-ニ羟基-7-[4-(N，N-ニこ氨基)丁氧基]异黄酮。培养6d后，弃去培养基，每孔加入O. Iml MTT(5mg/ml，溶于PBS)。培养4h后，吸去孔中的培养液，每孔加入100 μ I 的ニ甲基亚砜，用酶标仪在550nm波长测吸光度，检测细胞活性。雌ニ醇对MCF-7活性的影响如表I所示。17 β -雌ニ醇能促进MCF-7细胞的増殖，若将和17 β -雌ニ醇共孵育的MCF-7细胞的增殖率设定为100%，给予雌激素受体抑制剂ICI182680后，MCF-7细胞的增殖率下降到35%±6%。表I. MCF-7细胞的相对增殖率(％，η=6)
17β-雌ニ醇 Control Control+ICI
权利要求
1.一种染料木素衍生物4’，5’ - 二羟基-7-[4-(N，N- 二乙氨基)丁氧基]异黄酮结构 式为
2.权利要求1所述染料木素衍生物4’，5’- 二羟基-7-[4-(N，N- 二乙氨基)丁氧基] 异黄酮在制备治疗学习记忆障碍疾病药物中的应用。
3.根据权利要求2所述染料木素衍生物4’，5’- 二羟基-7-[4-(N，N- 二乙氨基)丁氧 基]异黄酮在制备治疗学习记忆障碍疾病药物中的应用，其特征是用于改善雌激素缺乏导 致的记忆障碍或用于围绝经期、绝经期女性，卵巢或子宫切除的女性导致的学习记忆障碍。
全文摘要
本发明属于化学制药技术领域，具体涉及染料木素衍生物4',5'-二羟基-7-[4-(N,N-二乙氨基)丁氧基]异黄酮在制备治疗学习记忆障碍药物中的应用。4',5'-二羟基-7-[4-(N,N-二乙氨基)丁氧基]异黄酮有促进MCF-7细胞增殖的作用，作用效应呈钟罩型；缩短了水迷宫实验中，雌性去势小鼠(行卵巢切除术)的潜伏时间；在Y迷宫实验中，显著降低小鼠的错误次数。说明4',5'-二羟基-7-[4-(N,N-二乙氨基)丁氧基]异黄酮能够有效改善学习记忆能力。这种学习记忆的改善是和CaMKII磷酸化的增强相一致的。4',5'-二羟基-7-[4-(N,N-二乙氨基)丁氧基]异黄酮有很好的改善学习记忆的作用，可用于制备改善学习记忆的药物。
文档编号A61K31/352GK102659742SQ201210171508
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月29日 优先权日2012年5月29日
发明者张爱华, 杜荣辉, 王婷, 谭仁祥 申请人:南京大学