专利名称：一种降脂及抗脂肪肝中药发酵液的制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药加工及生物发酵领域，特别涉及中药山楂的发酵工艺，及通过这种方法得到的发酵产物的降脂及抗脂肪肝作用。
背景技术：
治疗脂肪肝主要有效成分为黄酮，广泛存在于许多中药特别是山楂中含量较大。山楂总黄酮是山楂的主要有效成分之一，单体达30余种，其清除自由基及抗氧化作用效果明显[1]。，并且近年来有学者研究发现山楂黄酮具有较强的抗氧化作用。ZhangZSt2]等人研究了山楂黄酮对田鼠降低胆固醇机制，实验组每日灌胃0.5%的山楂提取物，结果显示实验组总胆固醇和甘油三酯的含量比对照组分别减少10%和13%。
山楂药酒治疗脂肪肝效果显著。其作用为通过降解胆固醇并抑制胆固醇合成来降低血清胆固醇含量。也增加胆汁酸的排泄来阻止胆固醇在肝脏内堆积[2]。可以明显增强低密度脂蛋白的活性。谢伟华、林秋实[3][4]等利用山楂黄酮治疗小鼠高脂血症，药理证明山楂及山楂黄酮能显著降低血清和肝中MDA含量，增加红细胞与肝脏SOD活性。中药是我国的瑰宝，中药资源极其丰富，经过千年传承已拥有数万种成方、验方，但是再近些年来对中药的现代化研究比较缓慢，导致了中药中有效成分的提取受到限制，使中药资源遭到浪费。利用真菌对中药进行发酵处理是中药现代化研究史上的一个重要创新。中药发酵过程中，由于真菌生长代谢具有强大的分解转化能力，可将大分子物质分解为小分子活性物质，在发酵过程中会产生新的成分或丰富的次级代谢产物。为中药的开发开创了新空间。现代中药发酵制药技术是在继承传统中药发酵炮制法的基础上，结合现代生物转化方法包括发酵技术等，有目的地改变中药的性能，或根据中药之间的特性有目的有针对性进行组合[5]，利用单一菌种，或用混合菌种定向发酵。通过微生物在发酵过程中产生的酶系对中药底物进行氧化、氢化、酯化、甲基化等修饰。经过发酵后能够给中药带来很多有益处，首先是对中药中有效成分产生影响。微生物在代谢过程中分泌出纤维素酶、蛋白酶、木质素酶等多种酶类，降低了中药中有效成分浸出的传质阻力，使其更充分的被提取。另外，因微生物发酵是在常温常压下进行，条件温和，避免了中药活性成分遭到破坏，并且通过一些特殊酶的作用还可以对中药中的某些成分进行修饰、转化，降解生物大分子从而实现提高中药药效或产生新药效的目的。参考文献[I]时岩鹏，丁杏苞.山楂化学成分的研究，中草药[J]. 2000,31 (3) :173.[2]Zhang ZS, Chang Q，Zhu M，etal. Charactenrization of antioxidantspresenting hawthornfruits[J]. Journal of Nutrional Biochemistry. 2001,12(3)144-152.[3]谢伟华，孙超，刘淑敏.山楂黄酮对高脂血模型小鼠血脂及生脂基因转录表达的影响[J].中国中药杂志，1009，34 (2) =224-229.[4]林秋实，等.山楂及山楂黄酮预防大鼠脂质代谢紊乱的分子机制研究[J].营养学报,2000，22 (2) :131-136.[5]葛喜珍.发酵在中药研究中的应用[J].时珍国医国药，2008，19(2) :386 387.[6]阮晓东，张惠文，蔡颖慧，等.微生物在中药生物转化中的应用[J].中草药，2009,40(1) :149-152.
发明内容
本发明依据现代科技研究成果，选用山楂作为实验原料，其主要功效成分为黄酮。并且以同样具有抗氧化功效成分的食药真菌冬虫夏草作为发酵菌种。以总黄酮成分能够在发酵液中充分浸出为目的，筛选出山楂生物转化的最佳发酵培养基和发酵条件。具体技术内容如下
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I以中药山楂为发酵底物，利用食药真菌冬虫夏草对其进行发酵，并考察不同时间发酵液中总黄酮含量的变化情况，确定了到第5天时，发酵液中总黄酮含量最高，为16. 9mg/g。并且通过单因素和正交试验，以发酵液中总黄酮含量为指标,对冬虫夏草发酵山楂的培养基及发酵条件进行优化，得出最佳培养基为可溶性淀粉2g/100mL，硝酸钾
0.4g/100mL，磷酸二氢钾0. 4g/100mL，硫酸镁0. 2/100mL，最佳发酵条件为接种量3%，山楂添加量8g/100mL，温度30°C，初始pH值5. 5，培养时间为3_7d。最后采用优化后工艺进行验证得出发酵液中总黄酮含量为17. 4mg/g。2用山楂发酵液做小鼠药理实验结果显示，山楂黄酮能较明显降低小鼠血清中TC与TG含量，增加SOD活性。目前中药抗脂肪肝作用研究日渐增多，但是发酵中药开发的较少。本发明采用微生物发酵的方法，目的在于提高药效，获得一剂具有良好抗氧化作用效果的发酵液，为以中药为原材料的抗脂肪肝产品研究开辟了一条新思路，同时在山楂的进一步应用及提取研究上提供了理论基础。
具体实施例方式实施例一山楂发酵液的制备以中药山楂为发酵底物，利用食药真菌冬虫夏草对其进行发酵，采用发酵培养基为可溶性淀粉2g/100mL，硝酸钾0. 4g/100mL，磷酸二氢钾0. 4g/100mL，硫酸镁0. 2/100mL,最佳发酵条件为接种量3%，山楂添加量8g/100mL，温度26°C，初始pH值5. 5，培养时间为3-7d，得山楂发酵液，经3500r/min离心15min，该上清液即可直接作为食品、保健品及药品使用，或者用于制备食品、保健品及药品的原料。实施例二 小鼠模型建立实验动物健康的雌性昆明小鼠，18_22g，清洁级。采用高脂饮食配合CCl4注射的方法进行造模。实施例三指标检测实验药物山楂发酵液
动物分组对60只造模成功的小鼠观察一周后随机分成3组，即模型对照组、阳性对照组、山楂发酵液组，每组20只，空白对照组20只(健康小鼠)，共80只。各试验组分别灌服20天，每天一次。阳性对照组给予东宝甘泰液9mL/kg (!，空白对照组及模型对照组给予0. 5ml蒸馏水，第20天处死小鼠进行理化指标测定。动物实验及实验结果(I)山楂发酵液对脂肪肝小鼠脏器指数的影响颈椎脱臼法处死小鼠，电子大平精确称量小鼠体重后，解剖小鼠，取肝脏、脾脏及胸腺称重，计算脏器指数。结果如表I所
/Jn o肝指数=^^),100%脾指数=^xl00%
小鼠#S (g)小鼠体軍(g)
胸AM=^xioo%
小鼠傾(g)表I三种发酵液对小鼠脏器系数的影响(n = IOJ 士s )Table I The effect of three fermented brass on organ coefficient inrats (n = 10,^±s )
WJi肝脏系数(％)脾脏系数(％)胸腺系数(％)
空白对照组4.28 + 0.24*0.553 + 0.0630.211 + 0.016
模型对照组5. 74±0.43a0.415±0.037a0.117±0.033a
山楂发酵液组4.96±0.34**0.514±0.017*0. 136±0.034Z
阳性对照组5.04±0. 15*0.529±0.0920. 138±0_042注与模型组比较，* :P < 0. 05 ;** P < 0. 01与空白组比较，A P < 0. 05。从表I中可知，模型组与空白对照组相比肝脏系数与脾脏系数明显增加，胸腺系数降低，均具有差异显著性(P < 0. 05)。山楂发酵液组肝脏系数显著性降低了(P < 0. 01)。(2)灌胃山楂发酵液后小鼠血清中TC、TG含量变化如表2所示表2 TC 和 TG 含量(n = IOJ ±s)Table2 Content of TC and TG(n = 10,x±s)
组别剂Mmg/g 按生药汁TC/mmol.L1TG/mmol-L1
空白对照组2.04 + 0. 140.91 + 0. 13
模型对照组——3. 22±0.98''a1.68±0.43
山楂发酵液组401.34±0.45**0.91±0_25**
阳性对照组402.01 ±0.430.%±0.24*注与模型组比较，*:p < 0. 05 # p < 0. 01与空白组比较，Ap < 0. 05 AA p < 0. 01由表2中数据可以看出脂肪肝模型组TC和TG含量明显高于空白对照组，具有极显著性差异(P < 0. 01)。山楂发酵液高剂量组明显降低TC和TG含量(P < 0. 01)，低剂量组也具有显著性(P < 0. 05)。(3)灌胃山楂发酵液后小鼠肝组织匀浆中SOD和MDA含量见表3 :表3 SOD 和 MDA 含量(n = 10，； 士s )Table 3 Content of SOD and MDA(n = 10,x±s)
权利要求
1.一种山楂发酵液，其特征是以中药山楂为发酵底物，利用食药真菌冬虫夏草对其进行发酵，采用发酵培养基为可溶性淀粉2g/100mL，硝酸钾0. 4g/100mL,磷酸二氢钾0.4g/100mL，硫酸镁0. 2/100mL，最佳发酵条件为接种量3%，山楂添加量8g/100mL，温度26°C，初始pH值5. 5，培养时间为3-7d，得山楂发酵液，经3500r/min离心15min，该上清液即可直接作为食品、保健品及药品使用，或者用于制备食品、保健品及药品的原料。
2.—种中药发酵液，其特征是将山楂与冬虫夏草发酵，该发酵液具有一定抗脂肪肝作用，可以在制备抗脂肪肝药品、食品及保健品中应用。
3.根据权利要求I所述的中药发酵液，其特征在于该发酵液可以单独或与其它药物配伍或加入药学上可以接受的辅料，制备成软胶囊、硬胶囊、片剂、分散片、颗粒剂、口服液、栓齐U，经口服方式应用。
4.本发明是采用摇瓶的方法进行的，如进行放大生产，可根据本发明的基本原理采用各种生物反应器、发酵罐等方式进行发酵处理，另外除本发明中所用食药真菌外，也可是其它大型食药真菌如香菇、黑木耳、金针菇等，这是本领域的研究人员所能理解的。
全文摘要
本发明提供一种降脂及抗脂肪肝中药发酵液的制备方法，涉及中药加工及生物发酵领域，尤其是中药山楂的发酵方法。本发明以食药真菌冬虫夏草作为发酵山楂的菌种。通过添加少量菌种生长繁殖所需的营养物质，对中药进行发酵，将此法所得发酵液进行小鼠药理实验。并且阐述了本发明中中药发酵液具有明显降脂及抗脂肪肝作用。该组方可制备药品、保健品和食(饮)品的各种剂型。包括散剂、丸剂、膏剂、丹剂、片剂、软胶囊、硬胶囊、冲剂、栓剂、口服液、注射液。
文档编号A61P1/16GK102696994SQ20121019291
公开日2012年10月3日 申请日期2012年6月13日 优先权日2012年6月13日
发明者付莉莉, 姜云, 张建峰, 汪树生, 王刚, 王莘, 董浩, 陈 光 申请人:吉林农业大学