专利名称：预防干眼症的组合物、包括其的眼贴膜及该眼贴膜的制备方法
技术领域：
本发明涉及应用生物技术领域，具体而言，涉及ー种预防干眼症的组合物、包括其的眼贴膜及该眼贴膜的制备方法。
背景技术：
互联网、电脑和各种终端显示器的普及和应用，标志着时代的进步，使人们的工作和生活习惯发生了巨大的变化，但同时也伴随着人们眼睛亚健康问题的日益严重。干眼症发病率不断攀升是其中ー个典型案例。干眼症流行病学调查显示，普通人群干眼症的发病率为11 15%左右，但是长期使用电脑或其它终端显示器工作的人、配戴隐形眼镜的人和 糖尿病人干眼症或疑似干眼症的发病率可高达80 90%。据不完全统计，以下三类人群急需日常的眼保健I)长期利用终端显示器(电脑)工作的人员根据国务院新闻办公室2009年7月公布的信息，我国网民数已超过3. 3亿人。随着互联网和信息化的普及，依赖终端显示器进行工作的人员不断増加，同时也给这些人的眼睛健康带来了严重的问题。美国全国职业保健与安全研究所的一项调查报告显示，每天在电脑前工作3小时以上者，90%的眼睛有问题。根据我国有关部门的调查显示，有66. 3%的学生平均每天的上网时间超过3 4小吋。我国进行过的正常人群干眼症流行病学调查显示，普通人群发病率11%左右，北京的患病人数可能在200万左右，白领人群占了很大比例。最近有ー份调查报告称，白领ー族干眼症的发生率高达100%。2)佩戴隐形眼镜的人佩戴隐形眼镜的人，在发达国家占人群的10%左右，在我国估计1%左右，人数超过一千三百万。流行病学的调查结果显示，长期使用隐形眼镜容易患上干眼症和角膜逐渐变薄。上海杨浦区的卫生工作者协会曾对复旦大学、上海财经大学、上海水产大学、上海体育学院等7所高校1500名大学生的眼病状况作了调查。发现80%隐形眼镜配戴者不同程度出现了眼角干涩、镜片粘附沉淀物、眼部感染、发炎等不适症状。有意识主动治疗眼病的大学生为数很少。3)糖尿病患者对干眼症流行病学的调查显示，糖尿病患者干眼症发病率为37%，而目前我国糖尿病患者已达九千二百多万人。事实上干眼症已经成为危害人们眼睛健康的一种高发病。干眼症的高发人群包括长期使用终端显示器工作的人、佩戴隐形眼镜的人、进行过眼科手术的病人、糖尿病人和老年性干眼症等，其总和在我国保守估计可能超过了 3亿人。而这部分人中绝大多数从来没有主动到过医院诊断或治疗。更为严重的是，包括像美国这样高度文明的社会，仍有75%以上的干眼症患者从来不到医院诊治，也没有听说过干眼症。这种现状提示我们，ー种针对预防干眼症的日常眼保健护理产品可能比通过医院获得的治疗用药更容易为人们所接受，接触的人群更为广泛。
发明内容
本发明g在提供一种预防干眼症的组合物、包括其的眼贴膜及该眼贴膜的制备方法，即提供了ー种更容易为人们所接受的预防干眼症的日常眼保健护理产品。为了实现上述目的，根据本发明的ー个方面，提供了一种预防干眼症的组合物。该组合物包括有效剂量的Y-聚谷氨酸和细胞生长因子。进ー步地，细胞生长因子选自由表皮生长因子、酸性或碱性成纤维细胞生长因子、角质细胞生长因子组成的组中的ー种或多种。进ー步地，该组合物包括Y-聚谷氨酸O. 01 lg/1000ml，细胞生长因子I 100 μ g/ml和液体的辅助成分,优选地，Y-聚谷氨酸O. 02 O. 5g/1000ml。进ー步地，组合物包括以下组份Y-聚谷氨酸O. 04 O. lg/1000ml,细胞生长因子4 20 μ g/ml,甘油35 45g/1000ml,甘露醇4 6g/1000ml,憐酸盐0. 8
I.2g/1000ml，尼泊金丙酯0. 2 0. 3g/1000ml，尼泊金丁酯0. 2 · 3g/1000ml，以及余量的水。进ー步地，包括以下组份甘油40g/1000ml,甘露醇5g/1000ml,磷酸盐lg/1000ml，尼泊金丙酷 0. 25g/1000ml、尼泊金丁酷 0. 25g/1000ml, Y -聚谷氨酸 0. 04
0.lg/1000ml，细胞生长因子10 15 μ g/ml以及余量的水，组合物的pH值为6. 8 7. 2。进ー步地，细胞生长因子来源于人、动物或植物；细胞生长因子是天然提取的、人エ化学合成的、干细胞来源的、或通过基因重组技术制造的细胞生长因子或细胞生长因子的衍生物。进ー步地，Y -聚谷氨酸是天然提取的、人工化学合成的、或通过微生物发酵制造的Y-聚谷氨酸。根据本发明的另ー个方面，提供一种预防干眼症的眼贴膜。该眼贴膜包括上述预防干眼症的组合物和惰性支持物。进ー步地，惰性支持物选自无纺布、滤纸、蚕丝织物、细菌纤维膜或化学合成的水凝胶。根据本发明的再ー个方面，提供一种眼贴膜的制备方法。该方法包括以下步骤1)把惰性支持物装入铝箔袋中，在辐照剂量为4 15kGy的条件下进行辐照；2)把上述预防干眼症的组合物加入到装有惰性支持物的铝箔袋中，封ロ。本发明的预防干眼症的组合物，含有有效剂量的Y-聚谷氨酸(Y-PGA)和细胞生长因子为主要活性成分，这些活性成分在功能上能够相互补充、相得益彰，有效地预防干眼症。根据本发明技术方案制造的眼贴膜可广泛用于人眼睛保健，特别适合长时间使用电脑或其它终端显示器工作的人群、佩戴隐形眼镜的人和糖尿病人的眼睛保健。本发明是首次把Y-聚谷氨酸运用在眼保健品的配方中，其作为本发明的预防干眼症的组合物的活性成分与另ー种活性成分细胞生长因子配合使用，使其功能相互补充、相得益彰。并且这两类物质出人意料的具有协同作用，其配合使用的效果大于其各自使用加和的效果。本发明中所述的细胞生长因子是对小鼠3T3细胞的増殖有明显的剂量依赖关系的细胞生长因子，其中包括但不限于表皮生长因子(EGF)、酸性或碱性成纤维细胞生长因子(a/bFGF)和角质细胞生长因子(KGF)等，这些细胞生长因子是健康人泪液中含有的重要的细胞生长调节因子，具有广泛的促细胞生长活性，在医学临床上可加速创伤愈合、提高愈合质量。大量的医学临床基础研究表明，这些细胞生长因子对于维持角膜上皮的完整性、从而在保持泪膜的稳定性中起着非常重要的作用(Ahmet Satici等0phthalmicResearch2。。3 ；35 :301-305)。本发明中的Y-聚谷氨酸(Y-PGA)是由谷氨酸聚合而成的天然生物大分子，具有很好的生物相容性、无毒、没有免疫原性，比透明质酸更加稳定。 Y-聚谷氨酸水凝胶具有超强的保湿功能，其保湿能力是透明质酸(HA)的500倍。干眼症患者因睑板腺功能障碍，泪膜外脂质层缺损，泪膜破裂，水分蒸发，因而泪液渗透压增高，其结果导致角膜上皮缺损。角膜完整性的破坏又反过来影响泪膜的稳定性，这是ー个相互作用、恶性循环的过程，其最終結果将导致包括干眼症在内的眼表疾病日趋严重。因此适当增加泪液水分、维持泪液正常的渗透压是治疗干眼症的ー个重要手段。Y -聚谷氨酸高保湿功能在这方面可能会有突出的表现。Y-聚谷氨酸是某些革兰氏阳性细菌(Bacillus sp)细胞壁的成分，是形成细菌自身保护机制的产物，具有抗菌、抗病毒的功能。γ -聚谷氨酸还具有抗辐射功能。虽然现代技术已经把电脑显示屏的辐射剂量降低到了极限，但是仍有辐射存在，这是事实。大批依赖终端显示器工作的人员，他们的眼睛不得不长年累月地接受这种累积辐射剂量的伤害。这是造成白领一族干眼症患病率不断攀升的元凶。Y-聚谷氨酸可以在眼表形成一道天然的保护屏障，把来自显示屏辐射对眼睛的累积伤害减低到最少。Y -聚谷氨酸具有与正常泪液中维持泪膜稳定性的主要成分粘蛋白类似的物理化学性状，可以把Y-聚谷氨酸理解为外源人工粘蛋白，对维持泪膜的稳定性、延长泪膜破裂时间具有辅助作用。根据本发明ー种典型的实施方式，预防干眼症的组合物包括有效剂量的Y-聚谷氨酸和细胞生长因子。本发明中的细胞生长因子包括但不限于细胞生长因子选自由表皮生长因子、酸性或碱性成纤维细胞生长因子、角质细胞生长因子组成的组中的ー种或多种。优选地，该组合物包括Y-聚谷氨酸0.01 lg/1000ml，细胞生长因子I 100 μ g/ml和液体的辅助成分。进ー步优选地，Y-聚谷氨酸O. 02 O. 5g/1000ml，细胞生长因子2 50 μ g/ml。再一步优选地，Y -聚谷氨酸O. 03 O. 2g/1000ml。更进ー步优选地，Y-聚谷氨酸O. 04 O. lg/1000ml，细胞生长因子4 20 μ g/ml。根据本发明ー种典型的实施方式，组合物包括以下组份甘油40g/1000ml，甘露醇 5g/1000ml，磷酸盐 lg/1000ml，尼泊金丙酷 0. 25g/1000ml、尼泊金丁酷 0. 25g/1000ml,
Y-聚谷氨酸0. 04 0. lg/1000ml，细胞生长因子10 15 μ g/ml以及余量的水，组合物的pH值为6. 8 7. 2。优选地，本发明中的细胞生长因子对小鼠3T3细胞的増殖有明显的剂量依赖关系，这种细胞生长因子具有可促进角膜上皮细胞、结膜杯状细胞、泪腺腺泡细胞和睑板腺上皮细胞等的生长与分化，对维持角膜上皮超微结构的完整性，促进泪液、粘蛋白和脂质的分泌，从而保持泪膜的稳定性都具有十分重要的生物学功能的作用。本发明中的细胞生长因子可以是源于人、动物或植物；可以是天然提取的、人工化学合成的、干细胞来源的、或通过基因重组技术制造的细胞生长因子或细胞生长因子的衍生物。本发明中的Y-聚谷氨酸可以是天然提取的、人工化学合成的、或通过微生物发酵制造的Y-聚谷氨酸。该化合物用盐酸水解后经C18柱高压液相分离可呈现单ー的谷氨酸特征吸收峰。本发明中的辅助成分包括但不限干甘油、甘露醇、磷酸盐等。甘油、甘露醇在本发明中用于稳定组合物中细胞生长因子的生物活性，在含有甘油、甘露醇的溶液中，细胞生长因子的活性可以在常温中保持较长时间；磷酸盐用于稳定组合物的PH值；尼泊金丙脂、丁酯是眼科用药常用的防腐剤。根据本发明的另ー个方面，提供一种预防干眼症的眼贴膜。该眼贴膜包括上述预防干眼症的组合物和惰性支持物，组合物浸泡在惰性支持物上。本发明的惰性支持物包括但不限于选自无纺布、滤纸、蚕丝织物、细菌纤维膜或化学合成的水凝胶。本发明的眼贴膜可直接敷贴在眼表面。根据本发明的再ー个方面，提供ー种的眼贴膜制备方法。该方法包括以下步骤1)把惰性支持物装入铝箔袋中，在辐照剂量为4 15kGy的条件下进行辐照；2)把上述预防干眼症的组合物加入到装有惰性支持物的铝箔袋中，封ロ。本发明在治疗干眼症时，首次选择了 Y-聚谷氨酸和细胞生长因子的组合，两者之间有良好的协同作用，加之辅料的作用，使得制得的干眼剂有效改善眼睛干涩感。
具体实施例方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面结合实施例来详细说明本发明。根据本发明ー种典型的实施方式，眼贴膜由两部分组成一部分是以细胞生长因子和Y_PGA(Y-聚谷氨酸)为主要活性成分以及其它辅助性成分组成的混合溶液，辅助成分其配方如下甘油40g/1000ml,甘露醇5g/1000ml,磷酸盐lg/1000ml，尼泊金丙酯O. 25g/1000ml、丁酯尼泊金O. 25g/1000ml，余量的水。Y-PGA的加入量是O. 4g/1000ml，细胞生长因子的加入量是10 15 μ g/ml。眼贴膜配方中，除
Y-PGA和细胞生长因子外的辅助成分按比例定量配制、过滤后高压灭菌，Y -PGA和细胞生长因子用O. 45 μ m滤膜过滤除菌后加入辅助成分中。另一部分是惰性支持物，可以是无纺布、滤纸、蚕丝织物、细菌纤维膜等。惰性支持物装入铝箔袋中送辐照消毒，辐照剂量为4 15kGy。把配制好的混合溶液加入装有惰性支持物并经辐照灭菌的铝箔袋中，每袋装3 5ml。热塑封ロ，存放于阴凉处备用。 下面将结合实施例进ー步说明本发明的有益效果。第一步,按配方I至6配制混合溶液1000ml。在6个洁净的玻璃容器按配方加入
配方I
甘油40g
甘露醇5g
磷酸盐Ig
细胞生长因子IOmg(其中；EGF(表皮生长因子)5mg，FGF (成纤维细胞生长因子)2.5mg，KGF (角质细胞生长因子)2. 5mg)
γ-PGA ( Y-聚谷氨酸)0_4g
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g 加双蒸水至IOOOml
混合溶液调pH6.8 7.2配方2
甘油40g
甘露醇5g
磷酸盐Ig
细胞生长因子15mg(其中EGF(表皮生长因子)10mg，FGF (成纤维细胞生长因子)2. 5mg，KGF (角质细胞生长因子)2. 5mg)
γ-PGA (Y-聚谷氨酸)0_4g
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加双蒸水至IOOOmI
混合溶液调pH6.8~7.2配方3甘油40g
甘露醇5g
磷酸盐Ig
复合细胞生长因子IOmg(其中；EGF(表 皮生长因子)5mg，FGF (成纤维细胞生长因子)2.5mg，KGF (角质细胞生长因子)2. 5mg)
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加双蒸水至IOOOml
混合溶液调pH6.8 7.2配方4
甘油40g
甘露醇5g
磷酸盐Ig
γ-PGA ( Y-聚谷氨酸)0.4g
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加双蒸水至IOOOml
混合溶液调pH6.8~7.2配方5
甘油40g
甘露醇5g
磷酸盐Ig
γ-PGA (Y-聚谷氨酸)Ig
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酯0.25g
加双蒸水至IOOOml
混合溶液调pH6.8 7.2
配方6
γ-PGA (Y-聚谷氨酸)Ig
尼泊金丙酯0.25g
尼泊金丁酷0.25g
加双蒸水至IOOOml
混合溶液调pH6.8 7.2配方中除Y -PGA和细胞生长因子外按比例定量配制、过滤后高压灭菌，Y -PGA和 细胞生长因子用O. 45 μ m滤膜过滤除菌后加入配方中。配方I和配方2的区别仅在于EGF的用量不同，其它成分和比例不变。观察结果显示，两者的效果没有明显差异，说明本发明所述的细胞生长因子可以在较大浓度范围使用。本发明按配方I实施。配方I和配方2的区别仅在于EGF的用量不同，其它成分和比例不变；配方3仅加入复合细胞生长因子lOyg/ml，不加Y-PGA，其它成分和比例不变；配方4仅加入Y-PGA0. 04%，不加复合细胞生长因子，其它成分和比例不变；配方5加入Y-PGA0. 1%，不加复合细胞生长因子，其它成分和比例不变。观察结果显示，配方I和配方2的效果没有明显差异，说明本发明所述的细胞生长因子可以在10 100 μ g/ml浓度范围使用。配方3与配方4的效果也没有明显差异，但与配方I和配方2有较明显差异，说明Y-PGA和复合细胞生长因子间有较好的协同作用。配方5与配方4没有明显差异，说明Y -PGA可以在O. 04
O.1%的浓度范围使用，观察结果如下表2所示。配方6没有加入甘油、甘露醇和磷酸盐等辅助原料，仅用于观察其在常温条件下的稳定性。室温存放2个月后配方6出现浑浊并伴有沉淀，配方I 5在同样存放条件下观察24个月没有出现类似现象(表I)，说明甘油、甘露醇和磷酸盐等辅助原料对于维持产品的稳定性是必要。在应用实例中的其中3例使用在常温存放24个月后的配方I的眼贴膜，其效果没有明显差別。配方6没有參与试用效果的观察。表I.配方稳定性观察，主要观察指标溶液是否浑浊、出现沉淀配方I 2 3 4 5 6.............. 24 个月I 5澄清澄清澄清澄清澄清澄清澄清6 澄清浑浊沉淀没有继续观察有明显眼睛干涩感的志愿受试者821人參与了本发明的观察，将志愿受试者随机分成5组，分别用含有上述I 5个配方组合物的眼贴膜进行观察，其对改善眼睛干涩感的观察结果如下表2
配方I志愿受试者 S觉改善者有效率％
I15614995.5 '
权利要求
1.一种预防干眼症的组合物，其特征在于，包括有效剂量的Y-聚谷氨酸和细胞生长因子。
2.根据权利要求I所述的组合物，其特征在干，所述细胞生长因子选自由表皮生长因子、酸性或碱性成纤维细胞生长因子、角质细胞生长因子组成的组中的ー种或多种。
3.根据权利要求I所述的组合物，其特征在干，进ー步包括Y-聚谷氨酸O.Ol .lg/1000ml，细胞生长因子I 100 μ g/ml和液体的辅助成分，优选地，Y-聚谷氨酸O. 02 O. 5g/1000ml，细胞生长因子2 50 μ g/ml
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下组份Y-聚谷氨酸O. 04 O. lg/1000ml，细胞生长因子4 20 μ g/ml。
5.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，包括以下组份；Y-聚谷氨酸.0. 04 O. lg/1000ml,细胞生长因子4 20μ g/ml，甘油35 45g/1000ml，甘露醇4 .6g/1000ml,磷酸盐0. 8 I. 2g/1000ml，尼泊金丙酷0. 2 0. 3g/1000ml，尼泊金丁酷.0.2 · 3g/1000ml,以及余量的水。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，包括以下组份甘油40g/1000ml，甘露醇 5g/1000ml，磷酸盐 lg/1000ml，尼泊金丙酷 0. 25g/1000ml，尼泊金丁酷 0. 25g/1000ml,Y-聚谷氨酸0. 04 0. lg/1000ml，所述细胞生长因子10 15yg/ml以及余量的水，所述组合物的pH值为6. 8 7. 2。
7.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述细胞生长因子来源于人、动物或植物；所述细胞生长因子是天然提取的、人工化学合成的、干细胞来源的、或通过基因重组技术制造的细胞生长因子或所述细胞生长因子的衍生物。
8.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述Y-聚谷氨酸是天然提取的、人工化学合成的、或通过微生物发酵制造的Y-聚谷氨酸。
9.一种预防干眼症的眼贴膜，其特征在于，包括如权利要求I至8中任一项所述的预防干眼症的组合物和惰性支持物。
10.根据权利要求9所述的眼贴膜，其特征在于，所述惰性支持物选自无纺布、滤纸、蚕丝织物、细菌纤维膜或化学合成的水凝胶。
11.一种如权利要求9或10所述的眼贴膜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 .1)把惰性支持物装入铝箔袋中，在辐照剂量为4 15kGy的条件下进行辐照； .2)把如权利要求I至8中任一项所述的预防干眼症的组合物加入到装有所述惰性支持物的铝箔袋中，封ロ。
全文摘要
本发明公开了一种预防干眼症的组合物、包括其的眼贴膜及该眼贴膜的制备方法。其中，该组合物包括有效剂量的γ-聚谷氨酸和细胞生长因子。本发明的预防干眼症的组合物，含有有效剂量的γ-聚谷氨酸(γ-PGA)和细胞生长因子为主要活性成分，这些活性成分在功能上能够相互补充、相得益彰，可以有效地预防干眼症。根据本发明技术方案制造的眼贴膜可广泛用于人眼睛保健，特别适合长时间使用电脑或其它终端显示器工作的人群、佩戴隐形眼镜的人和糖尿病人的眼睛保健。
文档编号A61P27/02GK102688479SQ20121020455
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月20日 优先权日2012年6月20日
发明者涂桂洪, 邓惠平 申请人:涂桂洪