专利名称：显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法
技术领域：
本发明涉及神经染色技术，具体地说是一种显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法。
背景技术：
肛提肌为位于骨盆深部血管神经丛下方和坐骨直肠窝上方的薄层肌肉组织，肛提肌病变是引起盆底功能障碍性疾病(包括尿失禁，盆腔器官脱垂，大便失禁，慢性盆腔疼痛)等临床疾病的主要原因，明确肛提肌内的神经分布有助于发现导致肛提肌病变的神经源性疾病的发病机制，减少微创盲法穿刺术对肛提肌内神经主干损伤的机会，降低由于肛提肌神经损伤引起的相关并发症。
由于肛提肌的位置特殊、组成复杂(肛提肌由耻骨直肠肌、耻骨尾骨肌和髂骨尾骨肌组成的不规则形肌肉，部分耻骨直肠肌与男性尿道或女性尿道和阴道周围的括约肌融合)，对肛提肌及其支配神经肌肉内外走行的研究困难大。目前，解剖学研究中对肛提肌的研究较少，很多学者试图采用大体解剖、影像学、免疫组化、构建动物模型等研究方法对肛提肌内的神经来源和神经分布方式进行深入阐述。大体解剖过程中由于存在损伤小的神经分支、小的神经分支与细小血管和筋膜分辨不清、解剖过程中引起解剖部位的神经血管位置发生偏移等缺陷，因此针对肛提肌内神经的大体解剖学研究的结果常存在差异；影像学研究虽能客观反映肌肉组织形态，却无法显示肌肉组织内的神经走行方向；免疫组化和免疫荧光技术仅能显示标本局部断层的细节，无法勾勒出标本的整体形态和标本内部的神经走向；构建动物模型时即使用与人类组织结构最为相近的猿类哺乳动物，也无法完全等同于人类的组织结构和神经分布。同时上述研究方法均不能在不破坏标本完整性的情况下，整体显示肛提肌内神经的立体分布状态。由于肛提肌与尿道、阴道、直肠和肛管等内脏器官关系密切，多数妇产科、泌尿外科和肛肠外科的临床学者误把肛提肌当做内脏肌肉，而不是全是骨骼肌组成的一部分，同时由于相关专业的临床学者欠缺解剖学神经染色方法方面的专业知识，而经典基础解剖学研究中针对肛提肌及其支配神经的研究较少。虽然Sihler神经染色方法是一种比较经典的研究骨骼肌内部神经分布的解剖学染色方法，但该方法也只主要用于体表骨骼肌(包括四肢和胸腹肌肉)内神经分布的研究。至今未有采用sihler神经染色方法针对肛提肌内神经分布研究的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，该方法能在不破坏标本完整性的情况下，准确地获得肛提肌内神经的分布图像。为实现上述目的，本发明提供的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法为采用sihler神经染色方法对人体肛提肌标本内的神经进行染色；制作空心透光的硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成神经染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形态影像；将完成神经染色的肛提肌标本放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内神经主干追溯神经的走行方向，观察镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微镜上的图像采集系统记录。本发明提供的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法可以使肛提肌呈透明状态而肛提肌内的神经呈紫蓝色，进而在背景光源的映射下，达到完整显示肛提肌内神经分布状态的目的，为明确人体肛提肌内神经的走行分布规律提供有效的研究方法。本发明提供的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法具有以下积极效果
I、可以从不同的角度观察、准确的了解肛提肌内神经分支的位置和神经主干及神经末梢的分布规律，为解剖学、生理学和临床医学的相关研究提供准确的肛提肌内神经分布的
理论基础。 2、明确肛提肌内的神经分布规律对于了解肛提肌的功能、进行肛提肌内神经肌电图的研究，发展创新盆底微创神经手术具有重要的指导意义。3、进一步了解产伤，肌肉萎缩等生理病理变化对肛提肌及肌肉内神经的影响，为减少、延缓和治疗产伤，肛提肌萎缩等生理病理性改变导致的盆底器官脱垂等疾病提供研究基础。4、为探讨由于肛提肌功能及结构异常引起的泌尿道、生殖道和肠道功能的异常的发病机制提供解剖学依据。
具体实施例方式以下通过一具体实施例进一步说明本发明。首先，对人体肛提肌标本内的神经进行染色包括以下步骤
I、收集新鲜尸体标本。2、福尔马林固定采用浓度为10%的福尔马林溶液浸泡固定骨盆标本4 8周，每周更换福尔马林溶液一次。3、标本取材去除盆腔脏器，沿骨盆内侧壁完整切除盆底肌肉和软组织，解剖出肛提肌标本。4、软化褪色将标本浸泡入浓度为3%的KOH溶液中软化褪色2 3周，每周更换KOH溶液一次，直至标本呈透明或半透明状。另外，所采用的每IOOml的KOH溶液中用标准滴定管加入3滴浓度为3%的双氧水。5、脱钙将标本浸泡入Sihler I溶液中2 4周，每周更换Sihler I溶液一次，直至脱钙导致的标本浑浊再次变得透明或半透明。6、染色将标本浸泡入Sihler II溶液中3 4周，每周更换Sihler II溶液一次，直至标本被染成深紫色。7、脱色将标本浸入Sihler I溶液中2 4小时,每小时在解剖显微镜下观察，直至肌肉呈淡紫色，神经纤维呈蓝紫色，细小神经末梢清晰可辨。8、中和将标本浸入浓度为O. 05%的碳酸锂溶液I 2小时，每半小时更换一次碳酸锂溶液，直至浸泡液无明显变色，神经纤维染色加深。9、纯化将标本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中各24小时，使染色的肌肉颜色变淡，神经纤维在透光照射下显示的更加清晰。10透明将已完成神经染色的标本用100%甘油浸泡保存，使标本的透明度得到改善和加强。上述所采用的Sihler I溶液由I体积的冰醋酸，I体积的甘油和6体积1%水合氯醛水溶液组成；上述所采用的Sihler II溶液由I体积Ehrlich氏苏木精，I体积的甘油和6体积1%水合氯醛水溶液组成。另外，在进行上述各操作步骤前，均需要用流水冲洗标本上的浸泡液。完成上述步骤后，即可进行以下采集大体和解剖显微镜下的图像的工作
(I )、制作空心透光硅胶模型，模型的外表面为曲面，如球面或抛物面，模型为半球形或近似于半球形，在硅胶模型内部放置背景光源，背景光源采用白炽灯，将完成神经染色的肛
提肌标本放在硅胶模型表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形态影像，照相机采用单反数码照相机。(2)、将完成神经染色的肛提肌放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内神经主干追溯神经的走行方向，观察镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微镜上的图像采集系统记录。完成以上工作后，即可了解肛提肌内神经分布和走行的整体特点，绘制出肛提肌内的神经分布图，并应用于临床以及解剖和生理等基础研究中。
权利要求
1.显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于包括以下步骤采用sihler神经染色方法对人体肛提肌标本内的神经进行染色；制作空心透光的硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成神经染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形态影像；将完成神经染色的肛提肌标本放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内神经主干追溯神经的走行方向，观察镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微镜上的图像采集系统记录。
2.根据权利要求I所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于对人体肛提肌标本内的神经进行染色包括以下步骤 (I)、用浓度为10%的福尔马林固定人体骨盆标本，沿骨盆内侧壁完整解剖出肛提肌标本； (2 )、将肛提肌标本浸泡入浓度为3%的KOH溶液中软化褪色，直至标本呈透明或半透明状； (3)、将肛提肌标本浸泡入SihlerI溶液中脱钙，直至脱钙导致的标本浑浊再次变得透明或半透明； (4)、将肛提肌标本浸泡入SihlerII溶液中染色，直至标本被染成深紫色； (5)、将肛提肌标本浸入SihlerI溶液中脱色，直至神经纤维呈蓝紫色，细小神经末梢清晰可辨； (6)、将肛提肌标本浸入浓度为0.05%的碳酸锂溶液中完成中和过程，直至浸泡液无明显变色，神经纤维染色加深； (7)、将肛提肌标本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中进行纯化； (8)、将已完成神经染色的标本用100%甘油浸泡保存。
3.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(I)中，采用福尔马林溶液浸泡固定骨盆标本4 8周，每周更换一次福尔马林溶液。
4.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(2)中，每IOOml的KOH溶液中用标准滴定管加入3滴浓度为3%的双氧水，肛提肌标本浸泡入KOH溶液中软化褪色2 3周，每周更换KOH溶液一次。
5.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(3)中，肛提肌标本浸泡入Sihler I溶液中2 4周,每周更换Sihler I溶液一次。
6.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(4)中，肛提肌标本浸泡入Sihler II溶液中3 4周,每周更换Sihler II溶液一次。
7.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(5)中，肛提肌标本浸入Sihler I溶液中2 4小时，每半小时更换Sihler I溶液一次。
8.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(6)中，肛提肌标本浸入碳酸锂溶液I 2小时，每半小时更换碳酸锂溶液一次。
9.根据权利要求2所述的显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，其特征在于在所述步骤(7)中肛提肌标本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中各24小时。
全文摘要
显示及采集人体肛提肌内神经分布图像的方法，包括以下步骤采用sihler神经染色方法对肛提肌标本内的神经进行染色；制作空心透光的硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成神经染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内神经分布的立体形态影像；将完成神经染色的肛提肌标本放在解剖显微镜下，在解剖显微镜下沿着肛提肌内神经主干追溯神经的走行方向，观察镜下标本内神经间连接的微细结构，并用连接于显微镜上的图像采集系统记录。本发明提供的方法可以使肛提肌呈透明状态而肛提肌内的神经呈紫蓝色，进而在背景光源的映射下，达到完整显示肛提肌内神经分布状态的目的。
文档编号A61B19/00GK102805664SQ20121030731
公开日2012年12月5日 申请日期2012年8月27日 优先权日2012年8月27日
发明者王文艳, 卫兵, 张妤, 范懿隽, 周晓 申请人:王文艳