Nkg2d的调节的制作方法

专利名称：Nkg2d的调节的制作方法
NKG2D的调节
本申请是申请号为200580017932. 6、申请日为2005年4月5日、发明名称为 “NKG2D的调节”的中国发明专利申请的分案申请。
本申请要求申请日为2005年3月7日的美国临时申请60/659，678，申请日为2004 年6月I日的60/576，242，和申请日为2004年4月5日的60/559，919的优先权。
本发明是在得到政府的部分资助的条件下完成的，来自National Institutes Health 的授权文号为 CA89189, CA95137, P30 DK26743 和 P60 DK63720。因此，美国政府拥有本发明的某些权利。发明领域
本发明涉及用于治疗和/或预防炎性综合征的方法和组合物，特别是通过削弱自身反应性T细胞的增殖和功能来治疗和/或预防炎性综合征的方法和组合物，以及与它相关的任何其他发明特征。另外，本发明提供了用于预防NK细胞-介导的移植排斥的方法和组合物。
发明背景
NKG2D是在人类和小鼠中在NK细胞和某些类型的T细胞上表达的激活受体。NKG2D 能识别人体中的UL16结合蛋白(ULBP1)、ULBP2、ULBP3, ULBP4和I型MHC链-相关分子 (MICA和MICB)和小鼠体内的次要组织相容性抗原60 (H60)、视黄酸早期可 诱导转录物 (RAE-1)和鼠ULBP-样转录物I (MULT-1)。NKG2D同型二聚体与接头分子DAPlO结合，它包括共有的P85磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)结合基序Tyr-1le-Asn-Met ( ΝΜ，参见SEQ ID NO 9)0 NKG2D和DAP 10在它们的生物合成途径上在早期相互作用，并且这种相互作用是将NKG2D转移到细胞表面上所必需的。
发明概述
本发明提供了治疗或预防与N的KG2D-介导的激活相关的综合征方法和组合物。
一方面，所述方法是通过在适合治疗或预防所述综合征的条件下使表达NKG2D的白细胞与能减弱所述细胞的配体诱导的NKG2D激活的制剂接触进行的。在某些实施方案中，所述接触导致与对照相比配体诱导的NKG2D激活降低至少大约30% ;在其他实施方案中，所述降低为至少大约40%、50%、60%、70%、80%或90%。
所述制剂能够，但不局限于减弱NKG2D与DAPlO的相互作用；降低细胞表面上的 NKG2D的数量；增加表面NKG2D内在化的比率；通过NKG2D-NKG2D配体复合体减弱信号传导；和/或减弱NKG2D-编码核酸的转录或翻译。在某些实施方案中，所述制剂能在某些症状下增强表面NKG2D多肽的内在化(例如，在慢性炎性综合征中出现的症状)，在所述症状中，MICA、MI CB、ULBPl、ULBP2、ULBP 3或ULBP4中的一种或多种不能减少细胞表面NKG2D 的数量到提供治疗效果所必需的程度(对于治疗剂而言)。
在某些实施方案中，用于本发明提供的组合物和方法中的制剂包括能结合NKG2D 的抗体或它的NKG2D-结合片段。所述抗体可以是单克隆抗体，例如，人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
在实施本发明时，靶白细胞可以是NKG2D+⑶8+T细胞、NKG2D+⑶4+T细胞、 NKG2D+ Y δ T细胞中的一种或多种；和NKG2D+NK细胞；或靶细胞可以包括巨噬细胞。
一方面，本发明的方法可用于在诸如人类患者的哺乳动物中治疗和/或预防与 NKG2D-介导的激活相关的炎性综合征。所述人类患者可以被诊断为患有或者具有发生所述炎性综合征的较大风险。在特定方面，本发明的方法涉及在人类患者中治疗诊断的症状。
另一方面，本发明还提供了用于治疗或预防类风湿性关节炎、多发性硬化、乳糜泻、炎性肠病，如克罗恩氏病和溃疡性结肠炎、牛皮癣或移植排斥包括骨髓移植排斥的方法。还可以使用本发明的综合征包括，但不局限于I型糖尿病、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、重症肌无力、传染性神经元炎、自身免疫眼色素层炎、夏科氏肝硬变、自身免疫性肝炎、自身免疫溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性血小板减少症、Grave's病、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睾丸炎、颞动脉炎、抗-磷脂综合征、韦格内氏肉芽肿症、贝切特氏综合征、硬皮病、多肌炎、皮肤肌炎、关节强硬性脊椎柱炎、Sjogren's综合征、疱疹样皮炎、慢性天疱疮、白癫风、牛皮癣关节炎、骨关节炎、类固醇抗性哮喘、慢性阻塞性肺病和动脉粥样硬化。在特定方面，所述综合征不是I型糖尿病。
另一方面，本发明提供了包括NKG2D调节剂，例如，抗-NKG2D抗体或抗体片段的药用制剂和试剂盒。在一个系列的实施方案中，所述试剂盒包括NKG2D调节剂和有关使白细胞与NKG2D调节剂在适合治疗或预防白细胞的与NKG2D介导的激活相关的综合征的条件下接触的说明。
本发明还提供了鉴定NKG2D调节剂的方法，包括使NKG2D+白细胞与检验试剂接触；和测定由所述白细胞表达的NKG2D。在某些优选实施方案中，测定NKG2D表达包括测定 NKG2D转录、翻译和内在化中的一种或多种。所述实施方案的亚类还包括按照FDA的指南临床检测所述检验试剂。
另外，本发明提供了鉴定NKG2D调节剂的方法，包括使NKG2D+白细胞与检验试剂接触；并且测定配体诱导的白细胞的NKG2D激活。在某些优选实施方案中，测定配体诱导的 NKG2D激活包括测定DAPlO磷酸化、p85 PI3激酶活性、Akt激酶活性、IFN- Y产量和NKG2D+ 靶细胞细胞溶解中的一种或多种。所述实施方案的亚类还包括按照FDA指南临床检测所述检验试剂。
另一方面，本发明提供了鉴定用于治疗或预防与NKG2D激活相关的炎性症状和 /或自身免疫疾病的治疗或预防制剂的方法。该方法包括筛选在细胞群体中特异性结合 NKG2D并且削弱NKG2D+T细胞或NK细胞的增殖，而又不会明显耗尽这些细胞的能力的潜在制剂(例如，抗体或抗体片段)、合适的模型、宿主或患者(例如，通过使用本文所披露的实验方法分析所述抗体)。所述筛选还可以包括或可替代地筛选诱导NKG2D+T细胞或NK细胞表面上的NKG2D内在化的能力。
另一方面，本发明涉及将对NKG2D特异并且能够削弱NKG2D+T细胞或NK细胞的扩增而又不会耗尽所述细胞的制剂(例如，抗体或抗体片段)制备用于治疗类风湿性关节炎的药品的用途。
另一特别方面，本发明涉及将对NKG2D特异并且能够削弱NKG2D+T细胞或NK细胞的扩增而又不会耗尽所述细胞的制剂(例如，抗体或抗体片段)制备用于治疗多发性硬化的药品的用途。
在另一示例性方面，本发明涉及将对NKG2D特异并且能够削弱NKG2D+T细胞或NK 细胞的扩增而又不会耗尽所述细胞的制剂(例如，抗体或抗体片段)制备用于治疗炎性肠病的药品的用途。
本发明的另一示例性方面涉及将对NKG2D特异并且能够削弱NKG2D+T细胞或NK 细胞的扩增而又不会耗尽所述细胞的制剂(例如，抗体或抗体片段)制备用于治疗牛皮癣的药品的用途。
本发明的另一方面涉及将对NKG2D特异并且能够削弱NKG2D+T细胞或NK细胞的扩增而又不会耗尽所述细胞的制剂(例如，抗体或抗体片段)制备用于治疗移植排斥的药品的用途。
附图的简要说明


图1是在前驱糖尿病的NOD小鼠的胰腺细胞上RAE-1表达的图。图1 (a)表示在 12-16周大的NOD和BALB/c小鼠的胰腺组织中通过定量RT-PCR测定的RAE_lmRNA。图1(b)表示通过在4-6周和12-16周大的NOD和NOD重度联合免疫缺陷(NOD. scid)小鼠的胰腺组织中通过定量RT-PCR测定的RAE-lmRNA。图1 (c)表示在前驱糖尿病的NOD的不同组织中通过定量RT-PCR测定 的RAE-lmRNA。示出了典型数据，并且表示为RAE-1转录的诱导倍数(fold-1nduction)。诱导倍数是根据以下公式计算的诱导倍数=标准化为HPRT的前驱糖尿病的NOD器官中RAE-1转录物的数量除以标准化为HPRT的幼小NOD器官中RAE-1 转录物的数量。图1 (d)表示通过流式细胞测量术使用抗-⑶45和抗-RAE-1mAb分析的在 ⑶45-N0D胰腺细胞上的RAE-1表达。图1 (e)表示在从NOD小鼠的胰腺中分离的⑶45-胰岛细胞上(上部图片)和胰腺引流淋巴结(PLN)(下部图片)中的RAE-1表达，用抗-⑶45和抗-RAE-1mAb 染色。
图2 Ca)是在⑶8+T细胞上NKG2D表达的图。从10周和25周大的NOD小鼠脾、 肝、胰淋巴结(PLN)和胰腺中分离白细胞，并且通过标准方法，使用抗⑶8和NKG2D的单克隆抗体染色。示出了所标明的NKG2D+⑶8+T细胞的百分比(表示为总⑶8+T细胞的百分比)。 图2 (b)是CD44和Ly-6C在胰腺和PLN NKG2D+CD8+T细胞上表达的图。用抗CD8、NKG2D 和CD44或Ly6C的单克隆抗体对细胞进行染色，并且示出了分选的CD8+T细胞的结果。图 2 (c)是NKG2D和⑶44在胰腺和PLN NRP_V7/H_2Kd四聚体-阳性⑶8+T细胞上表达的图。 用NRP-V7/H-2Kd四聚体和抗CD8和CD44或NKG2D的单克隆抗体对细胞进行染色。示出了所标明的NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性⑶8+T细胞(对⑶8+T细胞的分选)的标明的百分比。 图2 (d)是蓄积在胰岛附近的NKG2D+⑶8+T细胞的显微照片。随后用抗-⑶8、抗-⑶68 (巨噬细胞标记)、抗-NKG2D和抗胰岛素抗体对从16周大的前驱糖尿病的NOD小鼠中分离的胰腺的连续冷却切片进行染色。左侧相差微分图像，中央⑶8 (红色)，NKG2D (绿色)和胰岛素(蓝色);右侧⑶68 (红色)，NKG2D (绿色)和胰岛素(蓝色)。双-阳性⑶8+NKG2D+T细胞和⑶68+NKG2D+巨噬细胞是黄色的。
图3 Ca)是用抗-NKG2D mAb治疗7_25周大的发生糖尿病的NOD小鼠的效果的图。黑色圆圈用抗-NKG2D mAb处理的NOD小鼠(n=7)(每两周一次，剂量为200 μ g/小鼠IP);浅色圆圈，用无菌的非致热PBS处理的NOD小鼠(n=7)。当连续两次测定血糖含量超过300mg/dL时就诊断为糖尿病。图3 (b)是每周一次从6周至40周在图3a中所示出的动物中测定的血糖含量的图。图3 (c)是在晚期前驱糖尿病阶段用抗-NKG2D mAb处理之后NOD小鼠出现糖尿病比例的图。用抗-NKG2D mAb (每两周一次，剂量为200 μ g/小鼠 IP，黑色圆圈；n=14)或对照Ig (浅色圆圈；n=14)从13周到25周处理NOD小鼠。在25周大时，七只抗-NKG2D mAb-处理的小鼠继续接受治疗，直到30周大(黑色三角形)。图3(d) 是显示用图3c所示动物从12周-36周开始每周测定的血糖含量的图。
图4 Ca)是用对照Ig (clg)或抗-NKG2D mAb (200 μ g/小鼠IP，每两周一次，从第7周开始)处理的11周大的NOD小鼠的白细胞浸润胰腺和胰淋巴结的分析的图，所述切片业已用抗-⑶8、抗-NKG2D和抗-⑶44进行过染色，并且进行流式细胞测量术。所示出的结果是对⑶8+T细胞的分选。图4 (b)是用对照Ig从7周大开始处理的16周大的NOD小鼠的胰岛的显微照片。冷冻的胰腺切片是从用对照I g处理的16周大的NOD小鼠制备的， 并且染色。左侧DAPI (核)染色；右侧⑶8 (红色)，NKG2D (绿色)和胰岛素(蓝色)。图4(c)是用抗-NKG2D mAb从7周大开始进行处理的16周大的NOD小鼠的胰岛按照图片(b)所示制备并染色的显微照片GOOyg/小鼠IP，每两周一次)。图4 (d)是抗-NKG2D抗体治疗对自身反应性NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性CD8+T细胞在胰腺中蓄积的效果的图。从18周大的NOD小鼠的胰腺和PLN中分离白细胞，所述小鼠是用抗-NKG2D mAb(200 μ g/小鼠IP， 每两周一次)或对照Ig从13周大开始处理的。示出了 NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性⑶8+T 细胞(对⑶8+T细胞的分选)的标明的百分比。图4 (e)是来自用对照Ig或用抗-NKG2D (200 μ g/小鼠IP，每两周一次)处理的小鼠脾脏和外周血中分离，并用NRP-V7/H-2Kd四聚体和抗-⑶8 mAb染色的淋巴细胞的图。所标明的百分比是NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性细胞 (对⑶8+T细胞群体的分选)。图4 (f)是从用对照Ig (clg)或抗-NKG2D处理的GOOyg/ 小鼠IP，每两周一次)25周大的NOD小鼠体内分离的胰淋巴结的图，正如所标明的，处理是从13周大开始的，并且用PMA (20ng/ml)和伊屋诺霉素(500ng/ml)和布雷菲德菌素A (5μ g/ml)培养6小时。通过免疫荧光染色和流式细胞测量术在CD8+T细胞中检测细胞内 IFN- Y ο
图5是显示来自NOD T细胞转移入NOD重度联合免疫缺陷受体的继承转移实验的流式细胞测定的图。图5 (a)表示移植了 NOD T细胞的NOD重度联合免疫缺陷小鼠的胰腺、PLN和脾脏中的NKG2D+CD8+T细胞。在继承转移之前，用抗-CD8和抗-NKG2D对来自糖尿病NOD供体的纯化的T细胞进行染色(a，上部左侧图片)。在转移五周之后，用抗-CD8 和抗-NKG2D对从胰腺、PLN和脾脏中收获的细胞进行染色(a，上部图片)或用抗-NKG2D和抗-⑶44染色(a，下部图片)。示出了 NKG2D+⑶8+T细胞的百分比(对⑶8+T细胞的分选)。图5 (b)表示自身反应性NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性CD8+T细胞在接收了糖尿病NOD小鼠的继承转移的T细胞的NOD重度联合免疫缺陷小鼠中的蓄积，所述糖尿病NOD小鼠用抗-NKG2D mAb (200 μ g/小鼠IP,每两周一次)或对照Ig处理，在转移时开始，并且在转移10周之后分析。所标明的自身反应性NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性CD8+T细胞的百分比是对分选的活细胞的检测。图5 (c)表示对来自相同处理的小鼠的NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性T细胞、 分选的⑶8+T细胞上NKG2D的检测。图5 Cd)是显示移植了发生为糖尿病的NOD小鼠的T 细胞的NOD重度联合免疫缺陷小鼠的比例的图。接受了来自糖尿病NOD小鼠的继承转移的 T细胞的五周大的NOD重度联合免疫缺陷小鼠从5周开始到1 4周用抗-NKG2D mAb (黑色圆圈；n=6)或对照Ig (浅色圆圈；n=7)处理。用200 μ g抗-NKG2D mAb CX5对小鼠进行腹膜内注射，每周两次。当血糖含量在两次连续测定时都超过300mg/dL时就诊断为糖尿病。图5 (e)是显示在停止用抗_NKG2DmAb处理之后自身反应性NRP_V7/H_2Kd四聚体-阳性 CD8+T细胞增殖的图。在停止用抗-NKG2D mAb处理移植有糖尿病NOD小鼠的T细胞的NOD 重度联合免疫缺陷小鼠四周之后处死小鼠，并且分析胰腺的NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性， NKG2D+⑶8+T细胞的浸润。为了进行比较，还分析了用出现糖尿病的对照Ig处理过的小鼠。
图6(a)是在继承转移之前在8. 3TcR-转基因NOD T细胞上缺少NKG2D表达的图。 淋巴细胞是从幼小的8. 3TcR-转基因NOD小鼠的淋巴结和脾脏中分离的。然后通过磁力细胞分选来纯化8. 3TcR-转基因NODT细胞。在T细胞转移之前，用抗-⑶8和NRP_V7/H_2Kd 四聚体或抗-NKG2D对8. 3TcR-转基因NOD T细胞进行染色，并且通过流式细胞测量术分析， 正如图中所示出的。图6 (b)是在8. 3TcR-转基因NOD T细胞继承转移两天之后NKG2D在胰腺中8. 3TCR转基因NOD T细胞上表达的图。在8. 3TcR-转基因NOD T细胞继承转移两天之后，从在细胞转移的同时用对照Ig或抗-NKG2D mAb CX5处理过的小鼠胰腺中分离白细胞。用NRP-V7/H-2Kd四聚体和抗-NKG2D对细胞进行染色，并且通过流式细胞测量术分析。示出了 NKG2D在继承转移的T细胞(通过分选NRP-V7/H-2Kd四聚体-阳性细胞鉴定) 上的表达。图6 (c)是抗-NKG2DmAb CX5在胰腺中8. 3TcR-转基因CD8+N0D T细胞增殖的影响的图。将CFSE-标记的8. 3TcR-转基因NOD T细胞(IxlO7)转入10周大的野生型NOD 小鼠体内(第O天)。在第一 1，第I和第5天用clg或抗-NKG2DmAb CX5 (200 μ g)处理受体NOD小鼠。在转移之后，处死受体NOD小鼠，并且从胰腺、胰淋巴结(PLN)和肠系膜淋巴结 (MLN)中分离和分析白细胞。在(c)中所示出的细胞是分选的活的CD8-阳性淋巴细胞。图 6 (d)是在对照Ig (空心条柱)和抗-NKG2D mAb (实心条柱)_处理的小鼠中CSFS-标记的细胞百分比的图，所述细胞在转移之后在第2、3和4天已发生了一次或多次分裂(B卩，增殖细胞)，通过以下公式计算％增殖细胞=(总的CFSE + NRP-V7/H-2Kd四聚体+ CD8+细胞一非分裂的 CFSE + NRP-V7/H-2Kd 四聚体 + CD8+ 细胞)X 100/ 总的 CFSE + NRP_V7/H_2Kd 四聚体+ CD8+细胞。
图7表示用IOOnM IGRP (葡萄糖_6_磷酸酶催化亚基相关蛋白)肽培养3天，然后在有200U/ml人重组IL-2和4ng/ml IL-7的条件下再生长5天之后的8. 3TcR-转基因 NOD淋巴细胞的显微照片。激活的8. 3TcR-转基因⑶8+T细胞在冰上用抗-NKG2D mAb CX5 染色，并且用霍乱毒素B进行复染色，以便对细胞表面膜进行标记。在37°C下将一等份这种染色细胞培养30分钟，并且将另一等份保持在冰上。用荧光显微镜分析细胞。在显微照片中，NKG2D表达表现为绿色荧光，而红色荧光表示霍乱毒素B (膜)染色。注意，NKG2D出现于在冰上培养的细胞的细胞表面上，不过在37°C下培养的细胞中得到了调控并且内在化。
图8是抗-NKG2D mAb对携带NKG2D的CD8+T细胞的体内作用的图。用IOOnM OVA肽激活OT-1卵白蛋白(OVA)-特异性TcR-转基因⑶8+T细胞3天时间，然后用200U/ ml人重组IL-2和4ng/ml IL-7再培养5天时间。NKG2D是在激活的0T-1T细胞上表达的 (>95%)，所述细胞是用CFSE标记并且继承转移(2xl07细胞)到C57BL/6小鼠体内。在第一 2、0和+2天用抗-NKG2D mAb或对照大鼠Ig (每次腹膜内注射200 μ g)处理接受转移的 ⑶8+NKG2D+0T-1 TcR-转基因T细胞的小鼠。图8 (a):转移4日之后，采集血液样品，用抗小鼠⑶8和NKG2D的mAbs染色，并且通过流式细胞测量术进行分析。标明了用CSFE标记的⑶8+T细胞的百分比。图8 (b):在CFSE-标记的OT-1 TcR-转基因T细胞继承转移并且按(a)中所示用对照Ig或抗-NKG2D mAb CX5进行处理之后第21天，处死小鼠，分离脾细胞，并且通过流式细胞测量术进行分析。图8 (c):在CFSE-标记的⑶8+NKG2D+0T-1T细胞继承转移之后第 天，用耗尽大鼠抗-小鼠CD8mAb (2. 43杂交瘤，大鼠IgG2b同种型)注射小鼠。三天之后，用对照Ig、抗-⑶8或抗-NKG2D mAb对外周血进行染色，并且通过流式细胞测量术进行分析。本实验的目的是证实在体内施用CX5抗-NKG2D单克隆抗体时，这种抗体不会耗尽NKG2D+⑶8+T细胞。
图9是抗-NKG2D mAb对自身反应性⑶8+T细胞增殖的影响的图。用CSFE标记 8. 3TcR-转基因NOD T细胞，并且转入野生型NOD小鼠，所述小鼠是用对照Ig或抗-NKG2D mAb CX5处理过的，参见图6。用NRP-V7/H-2Kd四聚体和抗_CD8mAb对从胰腺、胰淋巴结、 肠系膜淋巴结和脾脏中收集的细胞进行染色，并且通过流式细胞测 量术进行分析。示出了对CD8-阳性NRP-V7/H-2Kd四聚体阳性细胞分选的淋巴细胞的柱状图。在每一个柱状图中示出了增殖(分裂一次以上)和非-增殖细胞(对CFSE+⑶8+NRP-V7/H-2Kd四聚体+T细胞分选)的百分比。用同种型-匹配的对照I g或用于证实了所述制剂结合特异性的四聚体染色的对照进行的细胞染色。
图10表示对NOD胰腺细胞上NKG2D配体染色的特异性。图10 (a):分离NOD胰腺细胞，并且用抗_CD45mAb和用对照Ig、抗-泛RAE-1mAb (克隆186107)、抗-RAE-1 Y mAb (克隆CXl)或小鼠NKG2D-1g融合蛋白(与人IgGl Fe融合的小鼠NKG2D的细胞外结构域) 进行染色，随后通过合适的第二个步骤的制剂显像。通过流式细胞测量术分析细胞，并且评估⑶45-阴性和碘化丙锭-阴性，活细胞。用同种型-匹配的对照Ig (clg)染色的细胞表现出mAb结合的特异性(细线条)。图10 (b):纯的抗-RAE-1 mAbs阻断了生物素-标记的抗-RAE-1 mAbs的染色,证实了结合的特异性。胰腺细胞用O. 25 μ g纯化的clg、抗-泛 RAE-1mAb克隆186107或抗-RAE-1 y mAb克隆CXI(它还能与RAE-1 α和RAE-1 β交叉反应) 预培养。在冰上培养20分钟之后，再用O. 25 μ g生物素化的对照Ig、生物素化的抗-RAE-1 mAb克隆186107、生物素化的抗-RAE-1 YmAb克隆CXl和FITC-缀合的抗_CD45mAb对所述细胞进行染色20分钟。为了检测生物素化的mAbs，洗涤细胞，并且用PE-缀合的抗生物素蛋白链菌素培养。通过流式细胞测量术分析细胞，并且所显示的数据是对CD45-阴性， 碘化丙锭-阴性，活细胞分选的。因此，使用下列三种独立的制剂在NOD胰腺细胞上检测 NKG2D配体抗-RAE-1 mAb克隆186107、抗-RAE-1 mAb克隆CXl和小鼠NKG2D_Ig融合蛋白。抗-RAE-1 mAb染色是特异性的，就是说，生物素化的抗-RAE-1 mAb染色能够被纯化的抗-RAE-1 mAbs完全阻断，而不能被对照大鼠IgG阻断。
图11 (a)显示鼠 NKG2D 的 cDNA 序列(SEQ ID NO 1)0 图 11 (b)显示鼠 NKG2D 的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)0 图 11 (c)显示人 NKG2D 的 cDNA 序列(SEQ ID NO :3)。图 11 Cd)显示人NKG2D的氨基酸序列(SEQ ID NO :4)。
图12是NKL细胞(人NK白血病细胞系)的流式细胞分析的图，所述细胞已用小鼠抗-人NKG2D抗体(克隆149810)培养了 16小时，以便刺激NKG2D内在化(右侧图片)。左侧图片表示业已用对照抗体培养了 16小时的细胞。在每一种场合下，用酸性缓冲液(pH3. 5) 简单地洗涤细胞，以便除掉任何残余的结合抗体，然后用对照Ig或抗_NKG2DmAb染色，然后用藻红蛋白-缀合的山羊抗-小鼠IgG抗体染色。该实验表明，抗-人NKG2D单克隆抗体诱导了 NKG2D的内在化(调节)，而用对照Ig培养不能导致NKG2D内在化。
图13表示RAE-1是在B/c BM细胞上表达的，而不是在B6 BM细胞上表达。图13(a):用小鼠NKG2D-人Ig Fe融合蛋白(NKG2D Ig)或对照人Ig (clg)对最新分离的BM细胞进行染色。为了检测NKG2D-1g的结合，将PE-缀合的抗-人IgG抗体(抗-人Ig PE)用作二级抗体。虚线表示BM细胞上的clg染色。粗线条表示NKG2D配体在BM细胞上的表达。 图13 (b):用生物素化的抗-泛RAE-lmAb、生物素化的抗_H60mAb、生物素化的抗-MULTI mAb或生物素化的同种型-匹配的clg对BM细胞进行染色，然后用PE-缀合的抗生物素蛋白链菌素染色。虚线表示clg染色，而粗线条表示RAE-1、H60和MULTI在BM细胞上的表达。图13(c和d):在一 2天用抗-NKLlmAb处理CB6F1受体。在第O天，对受体进行辐射 (llGy)，然后用B/c或CB6F1BM细胞(4xl06)重建。在第7天，从受体脾脏中分离细胞，并且按照图片a和b所示进行分析。虚线表示clg对BM细胞的染色。粗线条表示NKG2D配体、 RAE-UH60和MULTI在BM细胞上的表达。数字表示染色细胞的平均荧光(任意线性单位)。 图13 (e和f):用图表表示RAE-1-表达细胞的表型。将BM细胞转入用抗-NK1.1mAb预处理过的辐射过的受体。按图片c所示方法分离细胞并且染色。图13 (g):显示增殖细胞能表达RAE-1。将B/c BM细胞转入用抗-NK1.1mAb预处理过的辐射过的CB6F1小鼠体内。转移六天之后，将BrdU (O. 8mg/小鼠)注射到小鼠体内。2或12小时之后，收集来自受体脾脏的细胞，并且用抗-泛-RAE-1mAb和抗-BrdU进行染色。图13 (h和I):表示RAE-1在 5-FU-处理的BM的后代上表达。将来自5-氟尿嘧啶-处理的B/c小鼠的BM细胞转入用抗-NK1.1mAb预处理过的辐射过的CB6F1小鼠体内。转移八天之后，按图片c和e所示分离细胞并且进行分析。图13 (i):表示C-试剂盒和RAE-1-阳性分选细胞的Sca-1染色。 在图片e-1中，>98%的用clg染色的细胞在左下方的象限(未示出)。示出了上面两个象限中的细胞百分比。以上结果至少在两次独立的实验中是可再现的(示出了代表性数据)。
图14 (a):表示了抗-NKG2D mAb能阻断B/c BM在CB6F1杂交小鼠体内的排斥。 将大约4x106BM细胞转入辐射过的CB6F1受体。在第5天用125IUdR注射受体小鼠，并且在第六天收集脾脏和计数。黑色条柱显示在B/c BM->CB6F1小鼠脾脏中125IUdR的吸收，而白色线条表示放射线标记在CB6F1 BM->CB6F1受体中的吸收。按图中所示用非耗尽的，中和抗-NKG2D mAb或NK细胞-耗尽的抗-NK1.1mAb (200 μ g/小鼠，第一 2天) 处理小鼠。结果表示为平均值土S.D.cpm(5只小鼠/组)。重复进行该实验两次，获得了相当的结果。图 14 (b):表示B/c供体细胞的表型，它能对用抗-NKG2D mAb或对照I g处理过的辐射过的 CB6F1受体进行种群恢复。按图片a所示处理小鼠，在移植8天之后收获脾细胞，同时对细胞进行染色，并且数据如图13所示。
图15表示表达RAE-1的同源的BM细胞的排斥。图15(a)表示RAE-1 ε在RAE-1 ε 转基因Β6小鼠的骨髓细胞上的表达。从野生型Β6和RAE-1 ε转基因Β6小鼠中新分离的骨髓用clg或抗-泛-RAE-1 mAb进行染色。图15 (b)表示B6NK细胞在体外杀伤同源的 RAE-1 ε转基因BM细胞。将从野生型Β6和RAE-1 ε转基因Β6小鼠中新分离的BM用作体外细胞毒性测定的标准的目标，用IL-2-激活的野生型NK细胞(Β6ΝΚ细胞，在2000U/ml重组人 IL-2 中培养七天时间，由 National Cancer Institute Biological Resources Branch Pre-clinical Repository 提供)用作效应物,在浓度为 10 μ g/ml 的 clg 或抗-NKG2D mAb (克隆191004)存在的条件下进行。图15 (c)表示B6小鼠排斥表达RAE-1 ε的同源的骨髓。将大约4x106RAE-1 ε转基因Β6ΒΜ细胞转入辐射过的Β6受体。在第5天用125IUdR注射受体小鼠，并且在第六天收获脾脏和计数。黑色条柱表示在RAE-1 ε的转基因ΒΜ->Β6小鼠的脾脏中的125IUdR的吸收，而白色条柱表示放射线标记在野生型B6BM->B6受体中的吸收。按图中所示用非耗尽的，中和抗-NKG2D mAb或NK细胞-耗尽的抗-NK1.1 mAb处理小鼠(200 μ g/小鼠，第-2天)，结果表示为平均值土S. D. cpm(5只小鼠/组)。该实验重复进行两次，获得了相似结果。图15 (d)表示CB6F1小鼠排斥表达CB6Fle的同源骨髓。将大约4x106RAE-1 ε转基因CB6F1BM细胞转入辐射过的CB6F1受体。在第5天用125IUdR注射受体小鼠，并且在第六天收获脾脏和计数。黑色条柱表示RAE-1 ε转基因BM->CB6F1小鼠脾脏中的125IUdR吸收，而白色条柱表示放射线标记在野生型CB6F1BM->CB6F1受体中的吸收。按图片c所示处理小鼠并且示出了数据。
图16 (a)表示DAPlO-/-小鼠不能有效地排斥表达RAE-1 ε的同源的骨髓。将大约4x106RAE-1 ε转基因Β6ΒΜ细胞转入辐射过的受体。在第5天用125IUdR注射小鼠，并且在第六天收获脾脏和计数。黑色条柱表示在RAE-1 ε转基因Β6ΒΜ-〉野生型Β6小鼠脾脏中的 125IUdR的吸收，白色条柱表示在RAE-1 ε转基因B6BM->DAP10-/_B6受体中放射线标记的吸收。按图中所示用非耗尽的，中和抗-NKG2D mAb或NK细胞-耗尽的抗-NK1. lmAb(200y g/ 小鼠，第-2天)处理小鼠。结果表示为平均值土S.D.cpm (5只小鼠/组)。图16 (b)表示 DAP12-/-小鼠(Bakker et al.，Immunity，13 :345_353，2000)排斥表达 RAE-1 ε 的同源的骨髓。将大约4xl06RAE-l ε转基因Β6ΒΜ细胞转入辐射过的受体。在第5天用125IUdR注射小鼠，并且在第六天收获脾脏和计数。黑色条柱显示在RAE-1 ε转基因Β6ΒΜ-〉野生型Β6 小鼠的脾脏中125IUdR的吸收，而白色条柱表示在RAE-1 ε转基因B6BM_>DAP 12-/-B6受体中放射线标记的吸收。处理小鼠，结果如图片a所示。
图17 (a)示出了在RAE-1 ε转基因Β6小鼠中的NK细胞上NKG2D的调节。用抗-泛-RAE-1 mAb (左侧图片)或抗-NKG2D和抗-NK1.1 mAb (右侧图片)对来自野生型和RAE-1 ε转基因Β6小鼠的脾细胞进行染色。分析在脾细胞上的RAE-1表达，并且通过对 NKl.1+细胞分选来分析NKG2D表达。细线条表示用clg染色的细胞，而粗线条表示RAE-1 或NKG2D特异性染色。数字表示染色细胞的平均荧光(任意线性单位)。图17 (b)表示在 RAE-1 ε转基因(Tg)NK细胞中NKG2D-依赖型细胞毒性减弱。用来自野生型或RAE-1 ε TgB6 小鼠的脾脏制备富集的NK细胞，所述小鼠在收获前一天IP- 注射polyl C (lOOyg/小鼠)。按文献披露的方法对CD32-转染的721. 221靶细胞进行单克隆抗体-依赖型改向杀伤测定(Lanier et al.，Jlmmunol，141 :3478_3485，1998)，使用对照 Ig (clg)，抗-NKG2D， 或抗-NK1.1 mAbs进行。图17 (c):示出了 NKG2D对在RAE-1 ε转基因宿主中发育的野生型NK细胞的调节作用。将Ly 5. 2Β6ΒΜ细胞(IxlO7/小鼠)转入辐射过的野生型(WT)或 RAE-1 ε Tg Β6小鼠。在移植三个月之后，在脾NK细胞(对⑶3_，NKl. 1+淋巴细胞的分选) 上分析NKG2D (左侧图片)和NKl.1 (右侧图片)的表达水平。细线条表示用clg染色的细胞，而粗线条表示RAE-1或NKG2D特异性染色。数字表示染色细胞的平均荧光(任意线性单位)。图17 (d)表示在Ly5. 2 B6 BM->RAE-1 Tg嵌合小鼠中NK细胞的NKG2D-依赖型细胞毒性。用Ly5. 2 B6 BM_>RAE_1 Tg和Ly5. 2 B6 BM_>B6小鼠的脾脏制备富集的NK细胞，所述小鼠在收获脾脏之前一天IP-注射polyl =CXlOOyg/小鼠)。按图片b所示进行mAb-依赖型改向细胞毒性测定。图17 (e)表示在RAE-1 Tg小鼠中发育的野生型NK细胞，证实减弱了的NKG2D-依赖型骨髓排斥。黑色条柱表示在RAE-l+Tg BM细胞-> 嵌合小鼠(Ly5. 2 B6 BM->野生型B6)的脾脏中125IUdR的吸收，而白色条柱表示RAE-l+Tg BM细胞-> 嵌合小鼠(Ly5. 2 B6 BM->RAE-1 Tg嵌合小鼠)的脾脏中放射线标记的吸收。图17 (f)表示在 RAE-1 ε转基因CB6F1小鼠中的杂合阻抗受到减弱。将4xl06B/c BM细胞转入辐射过的受体。在第5天用125IUdR注射受体小鼠，并且在第六天收获脾脏和计数。黑色条柱表示B/c BM->野生型CB6F1小鼠脾脏中的125IUdR的吸收，白色条柱表示在B/c BM->RAE-1 ε转基因 CB6F1受体中放射线标记的吸收，而灰色条柱表示CB6F1 BM->CB6F1小鼠。按图中所示用非耗尽的，中和抗-NKG2D mAb或NK细胞-耗尽的抗-NK1.1mAb (200 μ g/小鼠，第_2天)处理小鼠。结果表示为平均值土S.D.cpm (5只小鼠/组)。重复进行该实验两次，获得了相当的结果。
发明的详细说明
本发明在某种程度上基于以下出人意料的发现，NKG2D，一种⑶8+T细胞、NK细胞和某些激活的CD4+T细胞上的激活受体，它的调节是预防和/或治疗自身免疫和炎性综合征的有效方法。一方面，本发明人业已发现了刺激NKG2D内在化的制剂和方法，并且业已确定所述制剂是治疗与NKG2D激活相关的综合征的有效的治疗方法。所述制剂和方法特别适用于这样的症状(如被认为出现在，例如，慢性炎性综合征中的症状)其中天然可溶性 NKG2D配体不能够刺激内在化。本发明还涉及用于减弱NKG2D的功能性表达以便治疗所述炎性综合征的任何方法。在某些实施方案中，本发明的方法和组合物只能影响白细胞的亚类，这取决于它们主要在NKG2D上的激活。
本发明涉及能有效治疗或预防白细胞的与NKG2D-介导的激活相关的综合征的方法和组合物。该方法是通过在适合预防和治疗所述综合征的条件下使表达NKG2D的白细胞与能减弱所述细胞的NKG2D-介导的激活的 制剂接触。所述接触可以通过任何适合的方法进行，包括给患者或包括通过NKG2D途径激活的细胞的宿主，在能将所述制剂输送给所述患者或宿主体内的细胞的条件下施用所述制剂或包含所述制剂的组合物。根据本发明， NKG2D激活可以通过下面一种或多种方式减弱(i)耗尽预先存在于细胞表面上的细胞表面NKG2D分子；(ii)干扰NKG2D和DAP 10之间的功能性相互作用，或阻断NKG2D的信号传导功能jP(iii)防止NKG2D分子到达细胞表面，包括在转录、翻译或翻译后水平上干扰 NKG2D的产生。在某些实施方案中，本发明涉及通过促进它们的内在化来减少预先存在的细胞表面NKG2D分子，而又不会同时导致有可能引发携带NKG2D的白细胞的效应子功能的显著的激活。
在本文中，术语〃NKG2D〃，〃NKG2_D〃，〃D12S2489E〃，〃KLRK1〃，和〃杀伤细胞外源凝集素-样受体亚科K，成员1〃，表示人类杀伤细胞激活受体基因，CDNA (例如，人类-基因库保藏号NM-007360)，及其基因产物，以及它的哺乳动物对应物，包括野生型和突变型产物。人NKG2D编码区参见SEQ ID NO :3所示，而人NKG2D蛋白序列参见SEQ ID N0:4所示。 NKG2D的哺乳动物对应物包括，但不局限于小鼠NKG2D (例如，Mus musculus-GENBANK保藏号 NM-033078)、大鼠 NKG2D (例如，褐家鼠-GENBANK 保藏号 NM-133512)、猪 NKG2D (例如， 小型猪-GENBANK保藏号AF285448)、猴子NKG2D(例如，恒河猴-GENBANK保藏号AJ554302) 和猩猩NKG2D (例如，猕猴-GENBANK保藏号AF470403)。本发明的优选实施方案包括NKG2D 调节剂，如NKG2D拮抗剂和部分拮抗剂。
除非另有说明，本发明的方法可用于实施治疗(例如，减轻与以下状态相关和/或造成以下状态的症状，所述状态被认为导致了一种症状，依据这种症状/状态存在的时间，所述状态/症状的发展，所述状态/症状的严重性等)，或预防(例如，降低出现的可能性，延缓发作，延缓发作后严重性，减轻发作时的严重程度等)与NKG2D活性相关的任何类型的炎性症状，如与NKG2D相关的任何炎性自身免疫疾病。不过，可以理解的是，所述症状可能有很大不同，因此，用于治疗各种症状的方法同样被认为是本发明的独特方面。
1.NKG2D-调节剂
除非另有说明或者在本文中明确指明，在实施本发明时，能够减弱NKG2D-介导的细胞激活的任何制剂都可以使用。所述制剂的非限定性例子包括NKG2D配体，或 NKG2D-结合片段，其变体，或衍生物；抗体，或其片段，变体，或衍生物(例如，NKG2D-结合抗体)；核酸(或其变体或衍生物)，或小分子，它能抑制细胞中NKG2D或DAP 10产生；能干扰 NKG2D-DAP10复合物的形成或功能的肽或小分子；能改变NKG2D信号传导的小分子，和上述任何物质的组合。例如，典型的NKG2D配体可以参见美国专利6，653, 447 ；Carayannopoulos et al. ,J Immunol,169 (8):4079-83, 2002 ；Carayannopoulos et al. ,Eur J Tmmunol,32 (3):597-605, 2002 !Sutherland et al. ,J Immunol,168 (2):671-9, 2002 !Sutherland et al.,Tmmunol Rev,181 :185-92，2001 ;和 Cosman et al. , Immunity,14 (2):123-33, 2001)。
本发明涉及能从外部接触NKG2D-表达细胞并且在它们随后接触携带NKG2D-配体的细胞或重组NKG2D配体时能减弱携带NKG2D的细胞的激活。可以监测这种激活的任何指示剂，包括，但不局限于DAP 10磷酸化的刺激，p85 PI3激酶的刺激，Akt的激活，干扰素-Y (IFN- Y )或其他细胞因子或趋化因子的NKG2D-依赖型产生，携带NKG2D-配体的靶细胞的NKG2D-依赖型杀伤等。评估NKG2D激活的水平一种方法是测定人NK细胞杀伤携带 NKG2D配体的靶细胞的能力(例如，参见下面的例I)。在本发明的某些实施方案中，有用的 NKG2D-调节剂是这样的，它能在诸如例I披露的模型系统中导致NKG2D配体诱导的NKG2D 激活减弱至少大约20% ;在其他实施方案中，所述制剂导致配体诱导的NKG2D激活减弱至少大约30%，40%, 50%, 60%, 7 0%, 80%, 90%，或以上。例如，与对照相比，在存在所述制剂的条件下，NKG2D配体诱导的激活可以减弱至少大约30%。例如，所述对照可以是在没有所述制剂但是在基本上相同的条件下NKG2D的激活，所述条件是在(a)个体，(b) 一群大体上相似的有机体，将平均值用作对照，或(c)这两者。评估NKG2D激活水平的另一种方法是在存在或缺少NKG2D配体，如MICA或ULBP的条件下测定IFN- Y产量。用于测定IFN- Y产量的任何方法都可以使用，包括，但不局限于能测定IFN-Y蛋白的免疫测定方法或其他测定方法，能测定IFN-Y活性的生物测定方法等。在本发明的某些实施方案中，有用的NKG2D-调节剂是能导致NKG2D-介导的IFN-Y产量降低至少大约20%的制剂；在其他实施方案中，所述制剂导致NKG2D-介导的IFN- Y产量降低至少大约30%，40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%或以上。
在一个系列的实施方案中，本发明的NKG2D-调节剂刺激NKG2D的细胞内在化。可以通过任何合适的方法，例如，通过流式细胞测量术(例如，参见下面的例2);免疫荧光显微术(包括，通过共焦显微术监测抗体的内在化)；能检测细胞表面NKG2D的结合测定等评估内在化。在本发明的某些实施方案中，有用的NKG2D-调节剂是这样的一些制剂，它能导致 NKG2D的细胞表面含量降低至少大约10%，或者导致NKG2D从细胞表面消失的比率提高10%， 所述变化是相对对照而言的，测定是在例2所披露的模型系统中进行的；在其他实施方案中，所述制剂导致NKG2D的细胞表面含量降低至少大约20%，30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%，90%, 95%,或>99%或导致NKG2D的消失比率增加至少大约20%，30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,95%。
优选的是，本发明的NKG2D-调节剂不会导致NKG2D-表达细胞的细胞溶解或耗尽， 所述细胞包括，例如⑶8+T细胞，⑶4+T细胞，Y STcR+T细胞，和⑶56/16+NK细胞中的一种或多种。可以采用任何合适的方法评估一种制剂杀伤NKG2D-表达细胞的能力，例如，使用膜联蛋白V或碘化丙锭染色，整合了台盼蓝，通过流式细胞测量术或显微术，铕分析或铬释放测定来检测死亡细胞。在本发明的某些实施方案中，有用的NKG2D-调节剂是在能保持至少大约90%的NKG2D-表达细胞生活力的条件下具有可检测的治疗效果的制剂。在其他实施方案中，所述制剂导致NKG2D-表达细胞的数量减少至少大约5%，10%，20%30%，40%，50%， 60%, 70%,或 80%ο
以下表格包含本发明的NKG2D调节剂的特征的非限定性例子。
表1. NKG2D-调节剂的特征
权利要求
1.选自如下的制剂制备用于治疗或预防选自以下的综合征的药物中的用途结合 NKG2D的抗体、NKG2D-结合抗体片段、多聚MICA、MICA的多聚NKG2D-结合片段、多聚MICB、 MICB的多聚NKG2D-结合片段、多聚ULBP、ULBP的多聚NKG2D-结合片段、由选自SEQ ID NO: 10,SEQ ID N0:11和SEQ ID NO : 12的序列编码的RNAi分子；所述综合征选自I型糖尿病、 类风湿性关节炎、多发性硬化、乳糜泻、炎性肠病、牛皮癣、系统性红斑狼疮、桥本甲状腺炎、 重症肌无力、传染性神经元炎、自身免疫眼色素层炎、夏科氏肝硬变、自身免疫性肝炎、自身免疫溶血性贫血、恶性贫血、自身免疫性血小板减少症、Grave's病、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睾丸炎、颞动脉炎、抗-磷脂综合征、韦格内氏肉芽肿症、贝切特氏综合征、硬皮病、多肌炎、皮肤肌炎、关节强硬性脊椎柱炎、Sjogren s综合征、疱疹样皮炎、慢性天疱疮、 白癫风、牛皮癣关节炎、骨关节炎、类固醇抗性哮喘、慢性阻塞性肺病和动脉粥样硬化和移植排斥，并且其中所述制剂降低NKG2D在白细胞表面上的量。
2.如权利要求1的用途，其中所述制剂导致了配体诱导的NKG2D激活减弱。
3.如权利要求1的用途，其中所述制剂减弱了NKG2D与DAP 10的相互作用。
4.如权利要求1的用途，其中，所述制剂增加了细胞表面NKG2D内在化的比率。
5.如权利要求1的用途，其中，细胞表面NKG2D的数量的减少是在以下条件下发生的， 其中MICA，MICB, ULBPl，ULBP2, ULBP3，或ULBP4中的一种或多种不能减少细胞表面NKG2D 的数量。
6.如权利要求5的用途，其中，所述NKG2D内在化比率的增加出现在以下条件下其中 MICA，MICB，ULBP1，ULBP2，ULBP3，*ULBP4中的一种或多种不能增加NKG2D内在化的比率。
7.如权利要求1的用途，其中，所述制剂降低通过NKG2D-NKG2D配体复合体的信号传导。
8.如权利要求1的用途，其中，所述白细胞选自下列一组NKG2D+⑶8+T细胞、 NKG2D+CD4+T细胞、NKG2D+ γ δ T细胞、NKG2D+NK细胞和巨噬细胞。
9.如权利要求1的用途，其中，所述白细胞包含NKG2D+⑶8+Τ细胞。
10.如权利要求1的用途，其中，所述制剂包括能结合NKG2D的抗体或它的NKG2D-结合片段，其中所述抗体表现出对人NKG2D的亲和力(Kd)至少与可溶性NKG2D配体相等。
11.如权利要求10的用途，其中，所述抗体是单克隆抗体。
12.如权利要求11的用途，其中，所述单克隆抗体是人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
13.如权利要求1的用途，其中，所述制剂包括由选自SEQID NO 10,SEQ ID Ν0:11和 SEQ ID NO 12的序列编码的RNAi分子。
14.如权利要求1的用途，其中，在受所述综合征影响的器官或组织的细胞中NKG2D配体的表达被提闻。
15.如权利要求1的用途，其中，所述制剂导致浸润受所述综合征影响的器官或组织的淋巴细胞减少。
16.如权利要求1的用途，其中，所述制剂导致由CD8+T细胞产生的Y干扰素含量的降低。
17.如权利要求1的用途，其中，所述制剂减弱了所述白细胞的增殖。
18.如权利要求1的用途，其中，所述药物用以治疗被诊断患有所述综合征的人类患者。
19.如权利要求1或18的用途，其中，所述综合征是类风湿性关节炎。
20.如权利要求1或18的用途，其中，所述综合征是I型糖尿病。
21.如权利要求1或18的用途，其中，所述综合征是多发性硬化。
22.如权利要求1或18的用途，其中，所述综合征是乳糜泻。
23.如权利要求1或18的用途，其中，所述综合征是炎性肠病。
24.如权利要求1或18的用途，其中，所述综合征是系统性红斑狼疮。
25.如权利要求1或18的用途，其中，所述移植排斥是骨髓移植排斥。
全文摘要
本发明涉及用于治疗和/或预防自身免疫性和/或炎性疾病的方法和组合物。具体地讲，本发明提供了通过调节NKG2D减弱自身反应性T细胞和/或NK细胞的扩增和功能的治疗剂。
文档编号A61K38/00GK102988959SQ20121034011
公开日2013年3月27日 申请日期2005年4月5日 优先权日2004年4月5日
发明者L·L·拉尼尔, 康悦小笠原, J·A·布鲁斯通 申请人:加利福尼亚大学董事会