胸腺五肽peg化衍生物为活性成分的肠释药制剂及用途
【专利摘要】本发明公布了一种以胸腺五肽的PEG化衍生物为活性成分的肠释药制剂及用途。胸腺五肽的PEG化衍生物口服制剂采用肠溶形式，避免胃蛋白酶对药物的降解。连接了聚乙二醇的胸腺五肽，分子量增加，降低肾清除率，增加体内保留时间。连接了聚乙二醇的胸腺五肽，降低被体内蛋白酶和氨肽酶的降解速度，增加在血液中的保留时间，从而增加治疗效果。由注射改口服或栓剂，增加病人的依从性，也可以降低治疗成本。胸腺五肽的聚乙二醇衍生物的用作免疫调节剂。
【专利说明】胸腺五肽PEG化衍生物为活性成分的肠释药制剂及用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及胸腺五肽的PEG化衍生物作为药物的使用方法及作用。
【背景技术】
[0002]胸腺五肽(TP5)是人工合成的五肽，其氨基酸顺序和结构与胸腺生成素(TP)的32-36位氨基酸组成相同，是TP重要的功能活性部分，具有与TP相似的生物活性。TP5能促进胸腺和外周T细胞的分化和发育，对机体的免疫功能具有双向调节作用，能使过高或过低的免疫反应趋向正常。动物实验和临床研究证明TP5对免疫功能低下和自身免疫病患者的免疫功能具有重要的调节作用。
[0003]胸腺生成素(Thymopoietin，TP)是从人胸腺组织中分离出的一种49个氨基酸的多肽，具有促进胸腺细胞和外周T细胞及B细胞分化发育，调节机体免疫功能等生物活性。TP的32-36位氨基酸是TP重要的功能活性部分。人工合成的胸腺五肽(Thymopertin,TP5)、与TP的32-36位氨基酸残基顺序相同，即Arg-Lys-Asp-Val-Tyr、。胸腺五肽与TP具有相似的生物学活性，特别是胸腺五肽能双向调节机体失衡的免疫功能，具有独特的生物学作用，是一种重要的免疫调节剂。
[0004]胸腺五肽的药理学作用。胸腺五肽是一种免疫调节剂，对机体免疫功能具有双向调节作用，能使过强或受到抑制的免疫反应趋向正常。胸腺五肽的另一个显著特点是其半衰期很短，在体内只有I分钟左右，却能引起较长时间的免疫调节效果，停药后数月还能阻止疱疹复发。这种特点可能是由于胸腺五肽作用于体内，产生了一种特殊的生物效应，使机体不需要保持高的胸腺五肽血浆浓度就能起作用。但胸腺五肽这种特殊免疫调节作用的确切机理尚不清楚，有可能与胸腺五肽对未成熟的淋巴细胞作用有关。
[0005]胸腺五肽对胸腺的调节作用。年龄和各种应激损伤能引起胸腺萎缩，胸腺产生的胸腺激素(胸腺素、TP等)和细胞因子减少。而T细胞在胸腺中的分化和发育需要TP等胸腺激素参与，因此胸腺激素的减少使胸腺萎缩进一步加重，功能更加低下。胸腺五肽是TP的功能活性部分，能使机体失衡的免疫功能正常化，促进胸腺细胞的生长和分化，因此，可应用胸腺五肽调节减退的胸腺功能。有人证实，化学致癌剂DMBA造成的胸腺损伤与因年龄关系形成的胸腺变化十分相似，表现为T细胞白细胞介素2 (IL-2)受体表达下降，胸腺细胞和脾细胞对T-依赖性丝裂原反应减弱；细胞免疫和体液免疫受到抑制；胸腺CD4+CD8+、CD4+CD8—淋巴细胞亚群数量下降，胸腺体积缩小，尤以胸腺皮质萎缩最明显，胸腺微环境遭到破坏。由于胸腺功能低下，免疫监视功能削弱，DMBA能诱导60%~70%的大鼠形成乳腺癌。但如在DMBA灌胃前I周开始皮下注射胸腺五肽，则能明显改善DMBA造成的免疫功能低下，使胸腺细胞和脾细胞对伴刀豆球蛋白A (ConA)和植物血凝素(PHA)刺激的增殖反应加强，胸腺⑶4+⑶8+和⑶4+⑶8—细胞亚群数量及脾细胞IL-2受体表达量增加。胸腺五肽可阻止DMBA引起的胸腺萎缩，并能明显抑制肿瘤生长。可见胸腺五肽对因年龄和其他因素造成的胸腺萎缩及功能减退具有重要的调节作用。
[0006]胸腺五肽对机体免疫功能低下的调节。体外实验证实，尽管胸腺五肽对正常幼年及成年鼠的Thl、Th2细胞产生细胞因子无影响，但却能明显促进老年鼠脾细胞产生IL-2、Y干扰素(IFN-Y)和α肿瘤坏死因子(TNF-α )。体内实验也证实，皮下注射胸腺五肽能明显促进老年鼠产生IL-2、IFN-Y和TNF-a，同时降低老年鼠的IL-4水平。已经证实，IFN-Y能抑制Th2细胞生长，但对Thl细胞的生长无抑制作用，因而胸腺五肽促进老年鼠Thl细胞分泌IL-2和IFN- Y，可间接调节Th2细胞生物学活性，IL-4的免疫调节作用。给老年鼠注射胸腺五肽，由于Thl细胞功能的提高，Th2细胞功能的抑制，提高了机体的细胞免疫功能，从而增强了老年鼠对利什曼原虫感染的抵抗力。此外发现，实验性损伤鼠应用胸腺五肽后，也由于提高IL-2水平和降低IL-4水平，增强了对细菌的抵抗力，从而使死亡率下降，而急性应激时，应用胸腺五肽则通过提高血中超氧化物歧化酶(SOD)的水平和增强多形核白细胞的作用使机体适应应激变化。
在临床上，用逆转录酶(RT)抑制剂叠氮胸苷(ZDV)治疗无症状HIV感染者时，随着治疗时间的延长，RT基因可出现变异，使HIV对ZDV具有抗药性。如果同时加用胸腺五肽则能显著延缓HIV对ZDV的抗药性产生，同时能提高循环血中DC4+T细胞数和降低HIV RNA拷贝数，从而延缓或阻止无症状HIV携带者发展为艾滋病。胸腺五肽对机体受损细胞免疫功能的提高，也使其对复发性单纯疱疹、带状疱疹以及人类乳头瘤病毒感染具有治疗作用，并能使这些病毒的再感染间期显著延长。胸腺五肽还可能通过提高⑶4+和⑶45R0+肿瘤浸润淋巴细胞数及其分泌 的细胞因子使肿瘤细胞凋亡及坏死，从而达到抗皮下转移性黑素瘤的作用，并能减轻化疗药物的毒副作用。此外，胸腺五肽对放射治疗、手术创伤、手术感染等应激情况引起的机体免疫功能下降，具有明显的保护作用。胸腺五肽还能预防复发性尿路感染和呼吸道感染。
胸腺五肽对自身免疫病的调节作用。类风湿性关节炎(RA)等自身免疫病患者体内Ts细胞过少，或关节局部的Ts细胞过少，不足以控制Th细胞的功能，使得巨噬细胞产生过量的IL-1及B细胞过度产生抗体，最终导致组织损伤，软骨破坏。现有的治疗RA的药物大多有较大的毒副作用，且效果不理想。给RA患者静脉注射胸腺五肽，能降低血中T4/T8细胞的比例。关节内直接注射胸腺五肽也能升高循环中Ts细胞的比例，尤其能升高滑膜液内Ts细胞的比例，从而Th细胞功能提高，使得IL-1水平下降，B细胞产生的抗体减少，进而缓解RA的关节症状，保护关节功能。加之胸腺五肽极少毒副作用，因而有理由认为胸腺五肽是治疗RA的理想药物。体外实验还证实，胸腺五肽能使变应性皮炎(AD)患者外周血单核细胞分泌IFN- Y水平上升，IL-4水下降，使得IL-4刺激的IgE合成也减少，从而减轻AD患者的临床症状。Hsieh等则认为胸腺五肽对AD的治疗作用主要是通过降低血中组胺释放因子，使多形核白细胞分泌的炎性因子组胺减少所致。另外，胸腺五肽对系统性红斑狼疮、多发性硬化等与自身免疫有关的疾病也具有治疗价值。
[0007]胸腺五肽是肽类药物，易被胃酸降解，且在人血液中很快被蛋白酶和氨肽酶降解为氨基酸，半衰期约为30秒。胸腺五肽易被肾小球过滤清除，排入尿液。胸腺五肽注射用药剂量大，频率高，周期长，使病人难以忍受，依从性差。
[0008]聚乙二醇(PEG)是一种高分子聚合物，无毒，无免疫原性，很容易经肾排出体外。药物的聚乙二醇修饰，即PEG化是将活化的聚乙二醇通过化学方法偶联到蛋白质、多肽、小分子有机药物和脂质体上，从而提高药物在血浆中的稳定性，减少药物的酶解，降低药物的免疫原性，使母体药物在输送、疗效和体内半衰期等方面都有显著改善，从而提高其临床价值和商业价值。
[0009]目前在世界范围内已上市的PEG化蛋白质类制剂有先灵葆雅的Rebetron (PEG化干扰素a-2a+利巴韦林)；PEG-1NTR0N (PEG化干扰素a-2a) ;Pegasys (PEG化干扰素a-2b);英国PolyTherics公司的Thera PEG (长效干扰素制剂)；美国Cell Tech生物公司的PEG化肿瘤坏死因子以及可治疗慢性结肠炎的PEG化新药Lenkine (PEG化单克隆抗体);Human Genome公司的Albuferon (人血白蛋白+PEG化干扰素注射剂,可用于治疗丙型肝炎)；Intarcia公司研制的DUROS植入式长效ω -干扰素制剂(据介绍其药效可长达3个月之久)等几十个产品，均有良好的临床效果。
多肽和蛋白质药物的PEG化通过下面三个作用达到延长半衰期的目的:1、防止肾小球滤过。2、减少免疫原性。3、阻止蛋白酶降解。
[0010]胸腺五肽进行PEG修饰后，采用肠道释放给药，可以避免胃蛋白酶对药物的破坏。连接PEG后，由于分子量加大，降低肾清除率，增加体内保留时间。聚乙二醇链保护胸腺五肽不易被体内蛋白酶水解，增加体内存留时间，延长药物的半衰期，达到长效制剂作用。由注射改口服，增加病人的依从性，方便患者，降低医疗成本。
【发明内容】
[0011]本发明的目的是提供一种胸腺五肽PEG化衍生物的肠释药制剂。改变了胸腺五肽的给药途径,为病人免去了注射痛苦,增加病人的耐受性，降低治疗成本。
[0012]本发明提供一种胸腺五肽PEG化衍生物的肠释药制剂。该衍生物的结构为在胸腺五肽的N-端氨基、C-端羧 基或侧链的氨基或羧基偶联上含有一个或一个以上的聚乙二醇衍生物基团。该基团中聚乙二醇部分的分子量在50-200000道尔顿。
[0013]本发明在于把胸腺五肽PEG化衍生物作成口服型肠溶制剂，如肠溶胶囊，肠溶片，也可以是脂质体或微球包裹型的肠释药制剂。进行口服给药，方便患者服用。
[0014]本发明在于把胸腺五肽PEG化衍生物作成肛门栓型肠释药制剂，方便给药，避免注射带来的痛苦。
[0015]胸腺五肽被PEG修饰后，采用肠溶给药，可以避免胃蛋白酶对药物的破坏。在肠道吸收，由于分子量加大，降低肾清除率，增加体内保留时间。聚乙二醇链保护胸腺五肽不易被体内蛋白酶水解，增加体内存留时间，延长药物的半衰期，达到长效制剂作用。
[0016]胸腺五肽被PEG修饰后，肠溶释药用于治疗(I)慢性乙型肝炎；(2)各种原发性或继发性T细胞缺陷病(如儿童先天性免疫缺陷病)；(3)某些自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，儿童支气管哮喘和哮喘性支气管炎等)；(4)各种细胞免疫功能低下的疾病(如病毒性肝炎，预防上呼吸道感染，顽固性口腔溃疡等)；(5)肿瘤的辅助治疗。
具体实施方案
[0017]实施例1
PEG化胸腺五肽肠溶胶囊:将PEG化胸腺五肽与微晶纤维素、淀粉、甘露醇、聚维酮和微粉硅胶等辅料，过筛、混合制粒，整粒，灌入肠溶胶囊壳中。
[0018]实施例2
PEG化胸腺五肽肠溶片:将PEG化胸腺五肽与微晶纤维素、淀粉、枸橼酸钠、聚维酮和硬脂酸镁等辅料，过筛、混合制粒，整粒，压片，包肠溶衣。
[0019]实施例3
PEG化胸腺五肽肠溶微球:将PEG化胸腺五肽与乙交酯丙交酯混合制成微球，装入肠溶胶囊壳中。
[0020]实施例4
PEG化胸腺五肽肠释药脂质体:将PEG化胸腺五肽与豆油、卵磷脂混合制成脂质体包含体，注入肠溶软胶囊中。
[0021]实施例5
PEG化胸腺五 肽肛门栓剂:将PEG化胸腺五肽与聚乙烯醇6000、甘油、泊洛沙姆等辅料混合制成栓剂。
【权利要求】
1.一种以胸腺五肽的PEG化衍生物为活性成分的肠释药制剂，单位剂量以胸腺五肽计为 0.01-1OOOmg0
2.根据权利要求1所述制剂是口服肠溶型制剂，包括肠溶胶囊和肠溶片剂。
3.根据权利要求1所述制剂是肛门栓型肠释药制剂。
4.根据权利要求1所述制剂是脂质体、微球包裹在肠道释药型。
5.根据权利要求1所述胸腺五肽的PEG化衍生物，其特征是:在胸腺五肽的C-端羧基、N-端氨基、侧链的羧基、氨基和羟基等活性基团上引入一个或一个以上的PEG化衍生物基团。
6.根据权利要求5所述引入的PEG化衍生物基团，其特征是:聚乙二醇部分的分子量在50-200000道尔顿。
7.根据权利要求1所述制剂的适应症是:(1)慢性乙型肝炎；(2)各种原发性或继发性T细胞缺陷病(如儿童先天性免疫缺陷病);(3)某些自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，儿童支气管哮喘和哮喘性支气管炎等)；(4)各种细胞免疫功能低下的疾病(如病毒性肝炎，预防上呼吸道感染，顽固 性口腔溃疡等)；(5)肿瘤的辅助治疗。
【文档编号】A61K47/48GK103920136SQ201310015798
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月16日 优先权日:2013年1月16日
【发明者】张保格, 曹秀格, 张翕 申请人:张保格