技术领域
本发明涉及中草药提取领域，更确切地说涉及一种制备黄蜀葵花总黄酮提取物的方法。
背景技术：
黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵Abelmoschusmanihot(L.)Medic.的干燥花冠。具有清利湿热，消肿解毒的功效，用于湿热壅遏，淋浊水肿；外治痈疽肿毒，水火烫伤。临床上已将黄蜀葵花单味药粗提取物制成的成药制剂-黄葵胶囊，用于治疗肾炎疾病。黄蜀葵花主含黄酮类有效成分，包括金丝桃苷、槲皮素-3-洋槐糖苷、槲皮素-3’-葡萄糖苷、棉皮素-3’-葡萄糖苷、异槲皮苷、槲皮素、棉皮素及杨梅素等。现代研究表明，黄蜀葵花总黄酮具有广泛的生物活性，包括治疗肾炎、治疗口腔溃疡、抗心肌缺血、抗炎、解热、镇痛、保肝等作用。
现有的富集黄蜀葵花总黄酮的方法多为药材经乙醇提取后，回收乙醇，加水使溶解，过聚酰胺柱或大孔吸附树脂柱，以水及低浓度的乙醇洗除杂质，再以高浓度乙醇解吸附而得，所得的黄蜀葵花总黄酮尚含有较多的杂质，进一步精制方法是采用乙酯乙酯-乙醇混合溶剂回流提取，获得较纯的黄蜀葵花总黄酮。该方法的缺点是工艺复杂，且使用了乙酸乙酯，生产成本较高，有环保隐患。
技术实现要素：
为了解决现有技术中黄蜀葵花总黄酮制备方法的缺点，本发明提供一种制备黄蜀葵花总黄酮提取物的方法，该方法简单，制备成本较低，使用溶剂安全环保，所得黄蜀葵花总黄酮提取物可作为中药五类新药开发的原料。
本发明的目的采用如下技术方案实现。
一种制备黄蜀葵花总黄酮提取物的方法，其特征在于将黄蜀葵花用40％～95％的乙醇提取1～3次，提取液回收乙醇，加水稀释，过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，先用水洗除杂质，继用5％～30％的乙醇洗除杂质，再用0.1％～10％的碱水洗脱至流出液无色，收集碱水洗脱液，加酸调节pH值至4.0～7.0，再过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱，用水洗脱盐，再用40％～95％乙醇解吸附，回收乙醇，干燥，即得黄蜀葵花总黄酮提取物。
所述碱水为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、氨水的水溶液中的一种或二种以上混合物。
所述大孔吸附树脂为非极性或弱极性的树脂。
所述大孔吸附树脂的型号为D101、AB-8、HPD-100、HPD-400。
本发明的有益效果：
1、本发明所得的黄蜀葵花总黄酮较高，含量以金丝桃苷计≥80％。
2、本发明仅采用乙醇作为提取及上柱的解吸附溶剂，安全、环保，可反复回收利用，制备成本较低；
3、本发明工艺路线简化，易操作，比较容易实现工业化批量生产。
具体实施方式
以下是提供最佳实施例对本发明作进一步的说明，但并非限制本发明。
本发明制备的黄蜀葵花总黄酮提取物，其中总黄酮含量采用紫外分光光度法测定，具体操作如下：
对照品溶液的制备：精密称取在105℃减压干燥至恒重的金丝桃苷对照品8.0mg，置100ml量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得(每1ml含金丝桃苷0.08mg)。
标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置25ml量瓶中，各加水至5ml，准确加入醋酸-醋酸钠缓冲液(2M醋酸液：2M醋酸钠液＝3：
1)5.0ml和0.1M三氯化铝液3.0ml，加水定容至刻度，摇匀，放置40分钟，按分光光度法，在405nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法：取黄蜀葵花总黄酮提取物样品20mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取1ml，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至5ml”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出金丝桃苷的重量，计算，即得。
下述各实施例中如果没有特别说明，浓度均指质量百分比浓度。
下述实施例中使用的D101大孔吸附树脂和AB-8大孔吸附树脂生产商为南开大学化工厂；HPD-100大孔吸附树脂、和HPD-400大孔吸附树脂生产商为沧州宝恩吸附材料科技有限公司；聚酰胺(30～60目)生产商为台州市路桥四甲生化塑料厂。
实施例1
取黄蜀葵花1kg，加80％乙醇水溶液回流提取2次，第1次加10倍量，第2次8倍量，每次1.5小时，所得提取液过滤，回收乙醇至无醇味，用水稀释得到黄蜀葵花提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用浓度为10％和20％的乙醇水溶液依次洗脱杂质，每次用量均为5倍柱体积。继以1％氢氧化钠的水溶液洗脱至流出液无色，收集洗脱液。将洗脱液用5％的盐酸调节pH至7，上聚酰胺柱吸附，用10倍柱体积的水洗除盐，再用75％乙醇解吸附，回收乙醇，60℃真空干燥6小时，即得黄蜀葵花总黄酮提取物33g，经检测其总黄酮含量以金丝桃苷计为87.3％。
实施例2
取黄蜀葵花1kg，加70％乙醇水溶液回流提取2次，第1次加8倍量，第2次6倍量，每次1小时，所得提取液过滤，回收乙醇至无醇味，用水稀释得黄蜀葵花提取物的水溶液，上D101大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用5倍量柱体积的15％的乙醇水溶液洗脱杂质，继以2％氢氧化钾的水溶液洗脱至流出液无色，收集洗脱液。将洗脱液用10％的硫酸调节pH至5，上D101大孔吸附树脂柱吸附，用10倍柱体积的水洗除盐，再用70％7醇解吸附，回收乙醇，60℃真空干燥5小时，即得黄蜀葵花总黄酮提取物35g，经检测其总黄酮含量以金丝桃苷计为85.5％。
实施例3
取黄蜀葵花1kg，加70％乙醇水溶液回流提取2次，第1次加8倍量，第2次6倍量，每次1小时，所得提取液过滤，回收乙醇至无醇味，用水稀释得黄蜀葵花提取物的水溶液，上HPD-100大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用5倍量柱体积的20％的乙醇水溶液洗脱杂质，继以5％碳酸钠的水溶液洗脱至流出液无色，收集洗脱液，将洗脱液用10％的硫酸调节pH至5，上HPD-100大孔吸附树脂柱吸附，用10倍柱体积的水洗除盐，再用70％乙醇解吸附，回收乙醇，60℃真空干燥6小时，即得黄蜀葵花总黄酮提取物32g，经检测其总黄酮含量以金丝桃苷计为85.0％。
实施例4
取黄蜀葵花1kg，加70％乙醇水溶液回流提取2次，第1次加8倍量，第2次6倍量，每次1小时，所得提取液过滤，回收乙醇至无醇味，用水稀释得黄蜀葵花提取物的水溶液，上HPD-400大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用5倍量柱体积的15％的乙醇水溶液洗脱杂质，继以5％碳酸钾的水溶液洗脱至流出液无色，收集洗脱液。将洗脱液用5％的盐酸调节pH至7，上HPD-400大孔吸附树脂柱吸附，用10倍柱体积的水洗除盐，再用70％乙醇解吸附，回收乙醇，60℃真空干燥6小时，即得黄蜀葵花总黄酮提取物30g，经检测其总黄酮含量以金丝桃苷计为83.8％。
实施例5
取黄蜀葵花1kg，加70％乙醇水溶液回流提取2次，第1次加8倍量，第2次6倍量，每次1小时，所得提取液过滤，回收乙醇至无醇味，用水稀释得黄蜀葵花提取物的水溶液，上AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用10倍柱体积的水洗除杂质。再用5倍量柱体积的20％的乙醇水溶液洗脱杂质，继以2％的氨水水溶液洗脱至流出液无色，收集洗脱液。将洗脱液用5％的盐酸调节pH至4，上AB-8大孔吸附树脂柱吸附，用10倍柱体积的水洗除盐，再用60％乙醇解吸附，回收乙醇，60℃真空干燥5小时，即得黄蜀葵花总黄酮提取物31g，经检测其总黄酮含量以金丝桃苷计为87.1％。