一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体制剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，主要为液体含水药物制剂。所述液体含水药物制剂可增强含重组人抗TNF-α单克隆抗体等TNF-α拮抗剂抗体药物的稳定性，延长其在含水制剂中的保存周期。
【专利说明】一种治疗TNF- α相关疾病的人抗体制剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，主要为液体含水药物制剂，该制剂包含的一种成份可以为50mg/ml有效量的抗TNF-a人源抗体，58.75mg/ml己六醇,0.125mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，1.25mg/ml乙酸盐，pH值5.2。该制剂包含的另一种成份也可以为50mg/ml有效量的抗TNF-α人源抗体，12mg/ml己六醇，lmg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，1.3mg/ml2_羟基丙羧酸,0.3mg/ml2_羟基丙烧-1，2，3-三羧酸钠，1.5mg/ml 二水合磷酸二钠,0.9mg/ml 二水合磷酸一钠,6.2mg/ml氯化钠，pH值5.2。该制剂在经过至少4次冻融循环后保存稳定性。主要保存治疗TNF-α相关的人抗体，可用于皮下或者静脉注射使用。
【背景技术】
[0002]类风湿关节炎(RA)是一种常见的关节炎，在人群中的发病率为0.3%-1%，如不及时治疗，可导致骨破坏和关节功能障碍。在RA发病中有多种促炎性细胞因子参与，如肿瘤坏死因子-a (TNF-a)、白介素如IL-1，IL-6，IL_8等。因此，抑制促炎性细胞因子的产生或阻断其作用，有望改善关节炎症反应。近年来许多新研究开发的生物制剂可通过阻断或下调炎性细胞因子的活性而达到控制病情的进展，如TNF抑制剂、抗IL-1抗体等，这些生物制剂的主要作用机制有:(I)针对细胞因子或其受体的单克隆抗体；(2)可溶性受体拮抗剂，即不包括跨膜成分和胞内功能区的细胞因子表面受体。该受体拮抗剂可与游离的细胞 因子结合，抑制后者与细胞表面受体结合。可溶性受体拮抗剂的半衰期较短，可通过加人某些整合结构如IgG的Fe受体或聚乙烷基乙二醇(polyethylene glycol, PEG)而延长；(3)受体拮抗蛋白，为无生物活性的蛋白质，可与细胞因子竞争结合细胞表面的膜受体。受体拮抗蛋白必须结合90%以上细胞表面受体方认为有效。
[0003]目前认为，在诸多RA炎症反应的细胞因子中，TNF是最重要的促炎性细胞因子之一，TNF-a在RA病变的持续发展、局部炎症反应和组织损伤中均起着重要作用。RA中TNF- α和TNFR水平在血清、滑膜以及滑液中均显著升高，特别是病情严重和活动期患者。RA患者血清中TNF-α水平与关节损伤评分、红细胞沉降率(ESR)及贫血呈正相关。TNF-a还与RA患者体重减轻和疾病复发有关。TNF可作用于多种细胞，如促进巨噬细胞分泌炎性细胞因子和趋化因子，促进炎症反应。TNF-a的主要作用是:(1)诱导内皮细胞表达黏附分子和血管内皮生长因子(VEGF)，促进白细胞与血管内皮黏附、渗透，导致局部的炎症反应和血管VEGF生成；⑵作用于肝细胞，产生C反应蛋白(CRP) ; (3)在类风湿关节炎中TNF-a可分别作用于破骨细胞、滑膜细胞和软骨细胞，导致这些细胞的活化，产生金属蛋白酶、胶原酶、基膜溶解酶(stiOmelysin)及前列腺素E2 (PGE2)，进一步破坏软骨引起骨侵蚀、关节炎症和软骨破坏；(4) TNF-α还可促使滑膜细胞、巨噬细胞、纤维母细胞和软骨细胞产生IL-l，IL-8&TNF_a本身而加重组织损伤。因此，抑制TNF-α的作用对控制RA的病情和改善预后非常重要。
[0004]目前已被美国FDA批准的TNF-α抑制剂共有3种:可溶性受体拮抗剂-依那西普(Etanercept),人鼠嵌合抗体_英夫利昔单抗(Infliximab)和人源化单抗。Etanercept是重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，由II型TNF受体(p75)与IgGl的Fe部分组成二聚体；Infliximab是针对TNF的特异性IgGl单克隆抗体(由人Ig稳定区和鼠Ig可变区组成的嵌合体)；人源化单抗也是特异性针对TNF的IgGl单克隆抗体(Ig的稳定区和可变区均为人源的)。TNF抑制剂的主要不良反应有注射部位反应、感染、肿瘤、淋巴增殖性疾病、神经脱髓鞘病变以及狼疮样综合征。
【发明内容】
[0005]本发明提供一种含水液体药物制剂，所述含水药物制剂包括重组人抗TNF-α单克隆抗体、缓冲液体系、渗透压调节剂、表面活性剂。所述重组人抗TNF-α单克隆抗体是通过基因工程手段，在CHO细胞中表达的，并且通过一系列标准的层析步骤纯化获得的。在制备抗体后，制备药物制剂。
[0006]本发明所开发的重组人抗TNF-a单克隆抗体制剂，其中所含的高浓度抗体蛋白更加稳定，更加耐受高温变化引起的聚集反应，因此本发明的抗体制剂可用于保存治疗TNF-a相关的人抗体，增强含重组人抗TNF-α单克隆抗体等TNF-α拮抗剂抗体药物的稳定性，延长其在含水制剂中的保存周期，对于治疗TNF-a相关疾病有重要意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]图1重组人抗TNF-α单克隆抗体BAT1406两种制剂的对比研究(OptimlOOO研究
结果)。
[0008]图2重组人抗TNF- α单克隆抗体BAT1406两种制剂的影响因素试验(高温研究)。
[0009]图3重组人抗TNF- α单克隆抗体BAT1406两种制剂的皮下注射与静脉注射比较。
[0010]图4A受试药物1406对实验小鼠tgl97活体关节炎得分的影响。
[0011]图4B受试药物1406对实验小鼠tgl97活体组织病理学得分的影响。
【具体实施方式】
[0012]具体而言，本发明所提供的制剂为pH4-8的液体含水药物，该制剂包括20-80mg/ml的抗体浓度，并且具有增强含重组人抗TNF-α单克隆抗体等TNF-α拮抗剂抗体药物的稳定性作用。本发明的制剂包括以下成分:能以高亲和力、低解离速度、高中和能力结合人hTNF-a的抗体；缓冲液，包括乙酸盐、2-羟基丙羧酸和磷酸盐缓冲液；渗透压调节剂，包括己六醇；表面活性剂，包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；调节pH的氢氧化钠、氯化钠和注射用水。
[0013]在本发明的一种实施方案中，所述抗体在所述液体含水药物制剂中的浓度为大约20-80mg/ml。在另一种实施方案中，所述抗体在所述液体含水药物制剂中的浓度为大约50mg/ml。在另一种实施方案中,所述试剂具有高蛋白浓度，所述试剂不是光敏感的。
[0014]本发明还提供了含水的药用组合物，包括乙酸盐`缓冲液、己六醇、失水聚氧乙烯
(20)山梨糖醇油酸酯和注射用水，pH为大约4-8。所述多元醇是己六醇，所述表面活性剂是失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。
[0015]本发明提供液体含水抗体制剂，所述制剂包括多元醇，以便调节液体体系的渗透压，稳定所述抗体。将所述多元醇添加到所述抗体中，其用量可以根据需要的所述制剂的等渗而改变。在本发明制剂的一种优选方案中，被作为渗透压调节剂用在所述制剂中的是己六醇。在本发明的优选方案中，己六醇的浓度为20-80mg/ml,优选浓度约为60mg/ml,具体为58.75mg/ml。在本发明制剂的另一种优选方案中，被作为渗透压调节剂用在所述制剂中的是己六醇。在本发明的优选方案中，己六醇的浓度为8-15mg/ml,最优选浓度约为12mg/ml。
[0016]本发明提供液体含水抗体制剂，所述制剂包括表面活性剂。典型的表面活性剂包括非离子表面活性剂，如失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。表面活性剂能减少所述制备的抗体的聚集和/或减少颗粒在所述制剂中的形成和/或减少吸附。在本发明制剂的一种优选实施方案中，所述制剂以失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯为表面活性剂。在一种优选方案中，所述制剂包括大约0.1-0.5mg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯,在另一优选实施方案中，在本发明的制剂中存在大约0.125mg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。在本发明制剂的另一种优选实施方案中，所述制剂以失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯为表面活性剂。在一种优选方案中，所述制剂包括大约0.5-2.0mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，在另一优选实施方案中，在本发明的制剂中存在大约lmg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。
[0017]本发明提供液 体含水抗体制剂，所述制剂包括缓冲系统，以便将pH保持在大约4-大约8的范围。在本发明制剂的一种优选方案中，缓冲液系统为乙酸盐，在另一种实施方案中，pH范围为大约4.5-6.0，最优选实施方案的pH为5.0-5.2。在本发明制剂的另一种优选实施方案中，缓冲液体系为2-羟基丙羧酸和磷酸盐，在另一种实施方案中，pH范围为大约4.5-6.0，最优选实施方案的pH为5.2。
[0018]本发明还提供了含水的药用组合物，包括有效量的抗体成分；乙酸盐或者2-羟基丙羧酸和磷酸盐；包括己六醇；包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；和注射用水，pH为大约4-8。所述抗体成分在液体状态下保质期为36个月。
[0019]本发明还提供了含水的药用组合物，包括有效量的抗体成分；乙酸盐或者2-羟基丙羧酸和磷酸盐；包括己六醇；包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；和注射用水，pH为大约4-8。所述制剂在室温下可保存二个月，在2-8°C下保质期为36个月。冷冻本发明的制剂还可以用于进一步延长它的保质期。
[0020]本发明提供液体含水药物制剂，包括适合治疗用途的抗体，这种药物制剂便于施用，并且含有高蛋白浓度，主要用于治疗由TNF-α引起的病症。在一种实施方案中，所述药物制剂具有增强了的稳定性。在另一种实施方案中，本发明的制剂在经过至少4次冻融循环后是稳定的。在另一种实施方案中，所述抗体针对人TNF-α。在另一种实施方案中,所述抗体是重组人抗TNF-α单克隆抗体BAT1406。
[0021]在本发明的另一种实施方案中，所述液体含水药物制剂包括抗体或其抗原结合部分，它是重组抗体或其抗原结合部分，它能抑制人TNF-α诱导的ELAM-1在人静脉内皮细胞上的表达。在另一种实施方案中，所述要求保护的制剂包括重组人抗TNF-a单克隆抗体BAT1406 ο
[0022]本发明提供含水的药用制剂，包括有效量的抗体成分，缓冲液体系乙酸盐或者2-羟基丙羧酸和磷酸盐，渗透压稳定剂己六醇，表面活性剂失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯和注射用水，PH为大约4-8。在本发明的一种实施方案中，所述制剂是适合于进行单次皮下注射的，在另一种实施方案中，所述制剂是适合进行静脉注射，两者的药代基本保持一致。在本发明的一种实施方案中，所述抗体在所述液体含水药物制剂中的浓度为大约I -100mg/ml。
[0023]在本发明的优选实施方案中，所制试剂是装在管形瓶中的含有表I所示成分的
0.8ml的溶液。其中制剂包含的一种成份可以为40mg有效量的hTNF-α抗体、47mg己六醇、0.1mg失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯、Img乙酸盐，用于调节pH的氢氧化钠和注射用水。其中制剂包含的另一种成份可以为40mg有效量的hTNF-α抗体、9.6mg己六醇、0.8mg失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯、1.04mg 2-羟基丙羧酸、0.24mg 2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸钠、1.2mg二水合磷酸二钠、0.72mg二水合磷酸一钠、4.96mg氯化钠，用于调节pH的氢氧化钠和注射用水。
[0024]表I A.重组人抗TNF- α单克隆抗体ΒΑΤ1406的A制剂成份列表
[0025]
【权利要求】
1.一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于: 一种液体含水药物制剂，其包含 (1)20-80mg/ml有效量的抗TNF_a人源抗体， (2)20 -80mg/ml 己六醇， (3)0.1-0.5mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)0.5 -2.5mg/ml 乙酸盐， (5)注射用水， (6)pH约为4-8, 其中抗TNF-a人源抗体为重组人抗TNF- α单克隆抗体ΒΑΤ1406。
2.权利要求1中，抗TNF-a人源抗体浓度为40-60mg/ml,优选为50mg/ml。
3.权利要求1中，己六醇浓度为55-65mg/ml,优选为58.75mg/ml。
4.权利要求1中，失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯浓度为0.1-0.2mg/ml，优选为0.125mg/ml。
5.权利要求1中，乙酸盐浓度为1.0-2.0mg/ml，优选为1.25mg/ml。
6.权利要求1中，pH值为5.0-5.4，优选为5.2。
7.一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于: 一种液体含水药物制剂，其包含 (1)50mg/ml有效量的抗TNF_a人源抗体， (2)58.75mg/ml 己六醇， (3)0.125mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)1.25mg/ml 乙酸盐， (5)注射用水，
(6)pH 约为 5.2， 其中抗TNF-a人源抗体为重组人抗TNF- α单克隆抗体ΒΑΤ1406。
8.一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于: 一种液体含水药物制剂，其包含 (1)20-80mg/ml有效量的抗TNF- α人源抗体， (2)8-15mg/ml己六醇， (3)0.5-2.0mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)0.8-2.0mg/ml2-羟基丙羧酸， (5)0.1-0.5mg/ml2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸钠， (6)1.0-2.0mg/ml 二水合磷酸二钠， (7)0.5-1.5mg/ml 二水合磷酸一钠， (8)5.0 -8.0mg/ml 氯化钠， (9)注射用水，
(10)pH 约为 4.0 -6.0, 其中抗TNF-α人源抗体为重组人抗TNF-α单克隆抗体BAT1406。
9.权利要求8中，抗TNF-α人源抗体浓度为40-60mg/ml,优选为50mg/ml。
10.权利要求8中，己六醇浓度为11-13mg/ml,优选为12mg/ml。
11.权利要求8中，失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯浓度为0.8-1.2mg/ml，优选为 1.0mg/ml ο
12.权利要求8中，2-羟基丙羧酸浓度为1.0-1.5mg/ml,优选为1.3mg/ml。
13.权利要求8中，2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸钠浓度为0.2-0.4mg/ml,优选为0.3mg/ml。
14.权利要求8中，二水合磷酸二钠浓度为1.2-1.8mg/ml,优选为1.5mg/ml。
15.权利要求8中，二水合磷酸一钠浓度为0.8-1.0mg/ml,优选为0.9mg/ml。
16.权利要求8中，氯化钠浓度为6.0-6.5mg/ml,优选为6.2mg/ml。
17.权利要求8中，pH值为4.8-5.5，优选为5.2。
18.一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于: 一种液体含水药物制剂，其包含
(1)50mg/ml有效量的抗TNF- α人源抗体，
(2)12mg/ml 己六醇， (3)lmg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)1.3mg/ml2-羟基丙羧酸， (5)0.3mg/ml2-羟基丙烷-1，2，3-三羧酸钠， (6)1.5mg/ml 二水合磷酸二钠， (7)0.9mg/ml 二水合磷酸一钠，
(8)6.2mg/ml 氯化钠， (9)注射用水，
(10)pH 约为 5.2， 其中抗TNF-a人源抗体为重组人抗TNF- α单克隆抗体ΒΑΤ1406。
19.一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，所述抗体针对TNF- α。
20.一种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，所述抗体或其抗原结合部分，能结合人TNF- a，并且是重组人抗TNF- α单克隆抗体或其抗原结合部分。
21.一种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，主要用于制备治疗其中由TNF-a引起的病症的药物。
22.—种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，不仅适合于进行皮下注射，还适合进行静脉注射，药代基本保持一致。
23.一种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，该制剂能够增强含重组人抗TNF-α单克隆抗体等TNF-α拮抗剂抗体药物的稳定性，延长其在含水制剂中的保存周期。
24.一种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，该制剂能够并且在室温下保存二个月。
25.一种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，该制剂在2-8 °C下保存36个月。
26.一种治疗TNF-a相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，该制剂在冷冻条件下延长保质期。
27.一种治疗TNF-α相关疾病的人抗体的制剂，其特征在于如权利要求1-18中，该制剂在至少4次冻 融循环后保存稳定性。
【文档编号】A61P29/00GK103446583SQ201310093009
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年3月21日 优先权日:2013年3月21日
【发明者】林键, 包财, 裴树军, 章淑妹, 朱炜, 李胜峰 申请人:百奥泰生物科技(广州)有限公司