用于治疗猪传染性肠胃炎的中药组合物的制作方法

专利名称：用于治疗猪传染性肠胃炎的中药组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及中兽医技术领域，尤其涉及用于治疗猪传染性肠胃炎的中药组合物。
背景技术：
猪传染性肠胃炎是由冠状病毒引起的一种急性肠道传染病，传播迅速，发病率高，
2周龄之内死亡率可以达到100%，仔猪即使康复后多发育不良，生长迟缓，病毒主要存在于猪的小肠粘膜和内容物中，随粪便呕吐物排出体外，经消化道、呼吸道传染，本病以呕吐、腹泻、脱水为特征，发病季节性明显，多发于寒冷的冬、春季节，大小猪都可发病，2周龄以上则死亡很少。Doyle和Hutchings于1945年首次报道在美国发生了本病并确定其病原为冠状病毒。1956年日本、1957年英国相继发生本病，目前本病已成为一种世界性的的猪传染病。中国台湾于1958年首次发现猪传染性肠胃炎，1973年在中国大陆首次分离到猪传染性肠胃炎。截止目前，我国大部分省市都有本病发生。该病爆发能导致初生仔猪大批死亡，给养猪业带来巨大的经济损失，被国际兽医局法典列为B类疫病必检的猪传染病。该病的病例变化为病猪消瘦，脱水明显；胃内含有凝乳块，胃粘膜充血、浆膜出血；小肠鼓气，小肠壁可见弥漫性充血、出血，变薄并缺乏弹性，肠系膜淋巴结充血、肿胀，其他无明显眼观病变。有些病例除了尸体失水、肠内充满液体外，并无其它病变可见。对于猪传染性胃肠炎，目前还主要采用免疫疗法，虽其具有免疫力强，免疫保护期长等优点，但是一些弱毒苗仍存在残余毒力，个别弱毒活苗仍会引起接种动物的免疫抑制，弱毒疫苗返祖的潜在危害仍然存在，另一方面，由于免疫程序安排不当或接种途径不当，也可导致免疫失败。应用对症疗法虽可产生一定疗效，但其只治标不治本，往往导致该病反复发作。另外，应用抗生素易产生耐药性和残留问题，不利于疾病的诊断和治疗，阻碍了我国动物性食品的出口。目前兽医临床尚缺乏安全有效防治猪传染性胃肠炎的药物，因此研制防治本病药物迫在眉睫。中草药是我国传统药材，其具有毒副作用小，残留少，资源丰富，价格低廉等优势，大量试验表明中草药不仅能影响病毒的复制，还可以通过调节机体免疫力、非特异性抗炎来发挥其抗病毒作用。我国加入WTO后提倡绿色食品的呼声越来越高，随着应用抗菌剂所带来的耐药性问题的日益严重，应用中草药防治动物性疾病必将引起更多的重视，加上现代科学技术的发展，科学选药组方，研制开发出更多的优质高效、安全的防治动物病毒性疾病的中草药制剂将成为可能。本发明就是在此基础上，提出一种用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物，其能够克服现有西医疗法的不足，对猪传染性胃肠炎具有良好的疗效，毒副作用小，残留少，资源丰富，价格低廉。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物，其能够克服现有西医疗法的不足，对猪传染性胃肠炎具有良好的疗效，毒副作用小，残留少，资源丰富，价格低廉。为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物，其原料药包括木香、青黛、一枝黄花、杠板归、天冬、鲜竹浙、翼首草、薏苡仁、豨莶草、榼藤子、椿皮、鹅不食草、紫萁贯众、葛根、救必应、菟丝子、黄精、黄蜀葵花、黄柏、桑寄生、拳参、党参和秦皮。其中，所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香20重量份 30重量份、青黛60重量份 70重量份、一枝黄花30重量份 40重量份、杠板归25重量份 35重量份、天冬30重量份 40重量份、鲜竹浙20重量份 30重量份、翼首草15重量份 25重量份、薏苡仁20重量份 30重量份、豨莶草10重量份 20重量份、榼藤子20重量份 30重量份、椿皮25重量份 35重量份、鹅不食草30重量份 40重量份、紫萁贯众20重量份 30重量份、葛根25重量份 35重量份、救必应20重量份 30重量份、英丝子35重量份 45重量份、黄精50重量份 60重量份、黄蜀葵花20重量份 30重量份、黄柏40重量份 50重量份、桑寄生15重量份 25重量份、拳参20重量份 30重量份、党参60重量份 70重量份和秦皮20重量份 30重量份。其中，所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香20重量份 25重量份、青黛60重量份 65重量份、一枝黄花30重量份 35重量份、杠板归25重量份 30重量份、天冬30重量份 35重量份、鲜竹浙20重量份 25重量份、翼首草15重量份 20重量份、薏苡仁20重量份 25重量份、豨莶草15重量份 20重量份、榼藤子25重量份 30重量份、椿皮30重量份 35重量份、鹅不食草35重量份 40重量份、紫萁贯众25重量份 30重量份、葛根30重量份 35重量份、救必应25重量份 30重量份、英丝子40重量份 45重量份、黄精55重量份 60重量份、黄蜀葵花25重量份 30重量份、黄柏45重量份 50重量份、桑寄生20重量份 25重量份、拳参25重量份 30重量份、党参65重量份 70重量份和秦皮25重量份 30重量份。其中，所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香25重量份、青黛65重量份、一枝黄花35重量份、杠板归30重量份、天冬35重量份、鲜竹浙25重量份、翼首草20重量份、薏苡仁25重量份、豨莶草15重量份、榼藤子25重量份、椿皮30重量份、鹅不食草35重量份、紫萁贯众25重量份、葛根30重量份、救必应25重量份、菟丝子40重量份、黄精55重量份、黄蜀葵花25重量份、黄柏45重量份、桑寄生20重量份、拳参25重量份、党参65重量份和秦皮25重量份。其中，所述中药组合物可以制备成煎煮液和注射液。本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，所述中药组合物为煎煮液时，具体步骤为:将各原料药按重量份混合，加入相对于混合物5 7倍水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入相对于混合物3 5倍的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，浓缩除去部分水，获得生药浓度为lg/ml 2g/ml的中药组合物煎煮液。本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，所述中药组合物为注射液时，具体步骤为:将各原料药按重量份混合，加入相对于混合物5 7倍水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入相对于混合物3 5倍的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，用4mol/l 6mol/l的盐酸溶液调节pH值至2.0，冷藏48h，放置沉淀，过滤，滤液用20%的氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，加入占药液质量0.5%活性炭，保持PH值7.0，加热微沸15分钟，冷却，滤过，加注射用水至1000ml,罐装,于115°C灭菌30分钟,冷藏48小时,滤过,分
装，即得注射液。本发明还提供了上述中药组合物在制备用于治疗猪传染性胃肠炎的药物中的应用。本发明的有益效果:本发明提供的用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物能够克服现有西医疗法的不足，对猪传染性胃肠炎具有良好的疗效，毒副作用小，残留少，资源丰富，价格低廉。
具体实施例方式根据中兽医的病理学说，此病由外感湿热疫毒所致，纯属胃肠湿热。由于病期与病理不同，所产生的证候有差异。病初表热未解而已入胃肠，为表热挟杂胃肠湿热证，中期后，湿热蕴结胃肠，胃失和降，故见呕吐，湿热犯脾，则食欲减退；湿热下注，大肠传导和小肠分泌清浊失调,水湿不能分离,故泻如注,尿短少；内热积盛,故喜饮。因此，本发明的治疗以清热解毒、除湿止泻、益气滋阴、止泻收敛、保护胃肠黏膜为原则，提供一种用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物，其原料药包括木香、青黛、一枝黄花、杠板归、天冬、鲜竹浙、翼首草、薏苡仁、豨莶草、榼藤子、椿皮、鹅不食草、紫萁贯众、葛根、救必应、菟丝子、黄精、黄蜀葵花、黄柏、桑寄生、拳参、党参和秦皮。优选， 所述中药组合物仅由上述原料药构成。所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香20重量份 30重量份、青黛60重量份 70重量份、一枝黄花30重量份 40重量份、杠板归25重量份 35重量份、天冬30重量份 40重量份、鲜竹浙20重量份 30重量份、翼首草15重量份 25重量份、薏苡仁20重量份 30重量份、豨莶草10重量份 20重量份、榼藤子20重量份 30重量份、椿皮25重量份 35重量份、鹅不食草30重量份 40重量份、紫萁贯众20重量份 30重量份、葛根25重量份 35重量份、救必应20重量份 30重量份、英丝子35重量份 45重量份、黄精50重量份 60重量份、黄蜀葵花20重量份 30重量份、黄柏40重量份 50重量份、桑寄生15重量份 25重量份、拳参20重量份 30重量份、党参60重量份 70重量份和秦皮20重量份 30重量份。所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香20重量份 25重量份、青黛60重量份 65重量份、一枝黄花30重量份 35重量份、杠板归25重量份 30重量份、天冬30重量份 35重量份、鲜竹浙20重量份 25重量份、翼首草15重量份 20重量份、薏苡仁20重量份 25重量份、豨莶草15重量份 20重量份、榼藤子25重量份 30重量份、椿皮30重量份 35重量份、鹅不食草35重量份 40重量份、紫萁贯众25重量份 30重量份、葛根30重量份 35重量份、救必应25重量份 30重量份、英丝子40重量份 45重量份、黄精55重量份 60重量份、黄蜀葵花25重量份 30重量份、黄柏45重量份 50重量份、桑寄生20重量份 25重量份、拳参25重量份 30重量份、党参65重量份 70重量份和秦皮25重量份 30重量份。所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香25重量份、青黛65重量份、一枝黄花35重量份、杠板归30重量份、天冬35重量份、鲜竹浙25重量份、翼首草20重量份、薏苡仁25重量份、豨莶草15重量份、榼藤子25重量份、椿皮30重量份、鹅不食草35重量份、紫萁贯众25重量份、葛根30重量份、救必应25重量份、菟丝子40重量份、黄精55重量份、黄蜀葵花25重量份、黄柏45重量份、桑寄生20重量份、拳参25重量份、党参65重量份和秦皮25重量份。所述中药组合物可以制备成煎煮液和注射液。本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，所述中药组合物为煎煮液时，具体步骤为:将各原料药按重量份混合，加入相对于混合物5 7倍水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入相对于混合物3 5倍的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，浓缩除去部分水，获得生药浓度为lg/ml 2g/ml的中药组合物煎煮液。本发明还提供了该煎煮液的使用方法，30日龄以内仔猪每头每次灌服IOml 20ml, 30日龄以上者每次灌服50ml 80ml，每天2次 3次。本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，所述中药组合物为注射液时，具体步骤为:将各原料药按重量份混合，加入相对于混合物5 7倍水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入相对于混合物3 5倍的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，用4mol/l 6mol/l的盐酸溶液调节pH值至2.0，冷藏48h，放置沉淀，过滤，滤液用20%的氢氧化钠溶液调节PH值至7.0，加入占药液质量0.5%活性炭，保持PH值7.0，加热微沸15分钟，冷却，滤过，加注射用水至1000ml,罐装,于115°C灭菌30分钟,冷藏48小时,滤过,分装，即得注射液。本发明提供的注 射液可以采用肌肉注射或静脉滴注的方式注射。本发明还提供了该煎煮液的使用方法，30日龄以内仔猪每头每次注射Iml
1.5ml, 30日龄以上者每次注射2ml 3ml，每天2次。木香:味辛、苦，性温，入脾、胃、大肠、胆经，有星期止痛的作用，能升降诸气，又长于行肠胃之滞，导三焦之壅；凡气机阻滞之证，如肠胃气滞，上为呕吐，中为脘腹胀满，下为泄泻，还可用于肠胃湿热积滞之痢疾，里急后重等症状，对传染性胃肠炎、伤寒杆菌、枯草杆菌、痢疾杆菌有抑制作用。青黛:味咸，性寒，入肝经，具有清热解毒、凉血止血、清肝泻火的功效，用于温病发斑、吐血、咽喉肿痛、疱疹湿疮等热毒诸证、肝火犯肺、咳嗽胸痛、痰中带血、高热惊痫、惊风抽搐等证。—枝黄花:拉丁名Solidaginis Herba,味辛、苦,性凉,归肺、肝经,具有清热解毒、疏散风热的功效，主治喉痹、咽喉肿痛、风热感冒等证。杠板归:味酸，性微寒，归肺、膀胱经，具有清热解毒、利水消肿、止咳的功效，主治咽喉肿痛，肺热咳嗽，小儿顿咳，水肿尿少，湿热泻痢，湿疹等证。天冬:味甘、苦，性寒，归肺、肾经，具有养阴润燥，清肺生津的功效，主治燥热咳嗽，阴虚劳嗽，阴虚火旺，肾精不固之遗精、早泄及虚火上炎之咽喉肿痛，热病津伤口渴，内热消渴肠燥便秘等证。鲜竹浙:味甘，性寒，归心、肺、肝经，具有清热、豁痰、润燥、止渴的功效，主治热病烦躁、消渴劳复、风痰、虚痰、中风失音等证。翼首草:拉丁名Pterocephali Herba,味苦,性寒,具有解毒除痕,清热止痢,祛风痛痹等证。薏苡仁:性凉，味甘、淡，归脾、胃、肺经。具有健脾渗湿、清热排脓、除痹、利水的功能，用于脾胃虚弱，便溏腹泻，或妇女带下病，脾虚湿盛水肿，小便不利，或脚气肿痛；湿热痹痛，手足拘挛，酸楚疼痛；肺痈咳唾脓痰，或肠痛拘急腹痛。豨莶草:拉丁名Siegesbeckiae Herba,味寒、辛、苦，归肝经、肾经，具有祛风湿，利关节，解毒的功效，主治风湿痹痛、筋骨无力、腰膝酸软、四肢麻痹、半身不遂、风疹湿疮等证。榼藤子:味微苦，凉，归肝、脾、胃、肾经，具有补气补血，健胃消食，除风止痛，强筋硬骨的功效，主治血水不足，面色苍白，四肢无力，脘腹疼痛，纳呆食少，风湿肢体关节萎软疼痛，性冷淡等证。椿皮:味苦、涩，性寒，入大肠、胃、肝经，具有清热燥湿，涩肠止带，止血，杀虫的作用，用于湿热泻痢，久泻久痢，崩漏，便血，痔疮下血，带下，肠风便血等证。鹅不食草:拉丁名Cent ipedae Hebra,味辛,性温,入肺、肝经,具有祛风寒,通鼻窍，止咳祛痰，散瘀消肿的作用，用于风寒表证，鼻塞流涕及鼻渊，咳嗽痰多，百日咳，疮痈肿痛等证。紫萁贯众:味苦，性微寒，归脾，胃经，具有清热解毒，祛瘀止血，杀虫的功效，用于流感；流脑；乙脑腮腺炎；痈疮肿毒；麻疹；水痘；痢疾；吐血；衄血；便血；崩漏；带下；蛲虫；绦虫等证。葛根:味甘、辛，性凉，入脾、胃经，有鼓舞胃气，清热生津，解肌发表，生阳，渗疹的作用，主要用于外感发热，头痛，项背强痛，热病口渴，消渴；脾虚泄泻，清阳不升等证。救必应:性寒，味苦，入肺、肝、大肠经，具有清热解毒、利湿、止痛的作用，主治感冒发热、咽喉肿痛、胃痛、署湿泄泻、黄疸、痢疾、跌打损伤、风湿痹痛、湿疹、疮疖等证。菟丝子:味甘、辛，性平，入肝、肾、脾经，有补肾益精，养肝明目的功效，主治肾阳不足之阳痿，遗精早泄，小便频数，头晕耳鸣，肾虚腰疼，妇人带下，胎气不固，肝肾两亏、肝血不足之双目昏花、视物不清，脾肾两虚之便溏腹痛，完谷不化等证。黄精:拉丁名Polygonati Rhizoma,味甘,性平,入肺、脾、肾经,具有养气养阴，健脾润肺，益肾填精的功效，用于脾胃气阴亏虚，食少无力，阴虚肺燥，干咳少痰，阴虚内热之消渴，肾虚精亏、阳痿遗精、头晕耳鸣、目昏眼花等证。黄蜀葵花:拉丁名Abelmoschus manihot (L.)Medic,味甘，辛，性凉，归心;肾；膀胱经，具有利尿通淋；活血；止血；消肿解毒的功效，主淋证；吐血；衄血；崩漏；胎衣不下；痈肿疮毒；水火烫伤。黄柏:味苦，性寒，入肾、膀胱、大肠经，清热燥湿，泻火解毒，除骨蒸清虚热。用于湿热泻痢，黄疸，带下，热淋，脚气，痿辟，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒，湿疹瘙痒。盐黄柏滋阴降火。用于阴虚火旺，盗汗骨蒸。桑寄生:味苦，甘，性平，入肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、祛风湿、安胎元的作用，用于肝肾不足所致的腰酸疼痛，筋骨痿软，足膝无力，肝肾不足，精血虚亏，胎元不固之胎动不安，腰腹疼痛等证。
拳参:味苦、潘，性微寒，归肺、肝、大肠经，具有清热解毒，消肿，止血的作用，用于肠炎、痢疾、肝炎、痔疮出血、腔炎、咽喉炎等疾病的治疗。党参:拉丁名Codonopsis Radix，味甘，性平，入肺、脾经，有补气益脾，养血生津的功效，主治脾肺气虚或气血两虚之倦怠乏力、气短，咳嗽自汗等证，党参长于补脾养胃，调理中焦，兼有养血的作用，其性平，健脾运而不燥；滋味阴而不湿，能够改善机体的免疫状态，提高抗病能力，促进消化吸收，提高新陈代谢，促进肠道对营养物质的吸收。秦皮:味苦、涩，性寒，入肝、胆、大肠经，具有燥湿止痢、清肝泻热、止咳平喘的作用，主要用于治疗湿热郁结、胃肠传导受阻之赤白下痢，里急后重；湿热下注之赤白带下；肝火上炎之目赤肿痛，目生翳膜以及肺热咳喘多痰，气喘等症状，秦皮对痢疾杆菌、甲型链球菌等具有较强的抑制作用，有抑制肠蠕动、环节肠痉挛的作用。以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。实施例1煎煮液I将木香25g、青 黛65g、一枝黄花35g、杠板归30g、天冬35g、鲜竹浙25g、翼首草20g、薏该仁25g、豨莶草15g、榼藤子25g、椿皮30g、鹅不食草35g、紫萁贯众25g、葛根30g、救必应25g、菟丝子40g、黄精55g、黄蜀葵花25g、黄柏45g、桑寄生20g、拳参25g、党参65g和秦皮25g混合，加入4.5kg水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入3kg的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮3小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，浓缩除去部分水，获得生药浓度为lg/ml的中药组合物煎煮液
1实施例2煎煮液2将木香20g、青黛60g、一枝黄花30g、杠板归25g、天冬30g、鲜竹浙20g、翼首草15g、薏该仁20g、豨莶草20g、榼藤子30g、椿皮35g、鹅不食草40g、紫萁贯众30g、葛根30重量份 35g、救必应30g、菟丝子45g、黄精60g、黄蜀葵花30g、黄柏50g、桑寄生25g、拳参30g、党参70g和秦皮30g混合，加入4.5kg水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入3kg的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮3小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，浓缩除去部分水，获得生药浓度为2g/ml的中药组合物煎煮液2。实施例3煎煮液3将木香30g、青黛70g、一枝黄花40g、杠板归35g、天冬40g、鲜竹浙30g、翼首草25g、薏该仁30g、豨莶草10g、榼藤子20g、椿皮25g、鹅不食草30g、紫萁贯众20g、葛根25g、救必应20g、菟丝子35g、黄精50g、黄蜀葵花20g、黄柏40g、桑寄生15g、拳参20g、党参60g和秦皮20g混合，加入4.5kg水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入3kg的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮3小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，浓缩除去部分水，获得生药浓度为lg/ml的中药组合物煎煮液3。实施例4注射液I将木香25g、青黛65g、一枝黄花35g、杠板归30g、天冬35g、鲜竹浙25g、翼首草20g、薏该仁25g、豨莶草15g、榼藤子25g、椿皮30g、鹅不食草35g、紫萁贯众25g、葛根30g、救必应25g、菟丝子40g、黄精55g、黄蜀葵花25g、黄柏45g、桑寄生20g、拳参25g、党参65g和秦皮25g混合，加入4.5kg水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入3kg的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮3小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，用5mol/l的盐酸溶液调节pH值至2.0，冷藏48h，放置沉淀，过滤，滤液用20%的氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入占药液质量0.5%活性炭，保持PH值7.0，加热微沸15分钟，冷却，滤过，加注射用水至1000ml，罐装，于115 °C灭菌30分钟，冷藏48小时，滤过，分装，即得注射液I。实施例5对猪传染性胃肠炎病毒的抑制作用1.试剂DMEM培养液，美国Gibco公司产品。加水溶解后，加入8%的胎牛血清、NaHCO3及常规双抗，使各自浓度分别为10mmol/L，0.37%，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素，调节pH为7.0 7.2后，定容至IOOOmL,用0.22 μ m的纤维素微孔滤膜过滤除菌，分装于_20°C保存备用；胎牛血清(青 岛理工大学)；胰蛋白酶(Amresco华美公司分装)；结晶紫、分析纯(中国远航化工厂)。其余试剂均为市售分析纯。2.仪器96孔培养板(Becton Dickinsen Labware公司)；YJ21450医用净化工作台(苏州净化设备厂)；C02培养箱(Incubator IF241，日本)；倒置相差显微镜(重庆光学仪器厂)；全自动酶标仪(美国Bio2Rad伯乐公司)。3.病毒及细胞猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪睾丸(swinetesticle，ST)细胞均由上海畜牧兽医研究所提供。4.药物本发明实施例4制备的注射液I。5.方法5.1ST细胞复苏和培养从-70°C的低温冰箱中取出含ST细胞的冻存管，立即置37°C水浴中不断振摇，使冻存管的细胞在30s内解冻。用75%的酒精擦洗消毒后打开盖子，吸出细胞悬液，装入离心管并用含12%胎牛血清的DMEM培养液稀释，1500r/min离心8min，弃上清液，再加上述培养液重新悬浮，转入IOOmL的培养瓶内，生长于含12%胎牛血清的DMEM培养液中，在37°C，饱和湿度，含5%C02的培养箱中静置培养，次日更换培养液继续培养。4d后，用胰蛋白酶常规消化培养瓶内的ST细胞，用含12%胎牛血清的DMEM培养液制备2 X IO6个/mL的悬液接种于96孔培养板上,每孔0.4mL。5.2注射液I对ST细胞毒性浓度的测定将0.5ml注射液I加入到培养板孔中，培养3d后观察各孔细胞病变作用(cytophathogenic effect, CPE)情况。无病变为 “_，，；CPE<25% 病变为 “ + ” ；25% 50% 病变为 “++” ;50% 75% 病变为 “+++” ；CPE>75% 病变为 “++++”。5.3TGEV半数感染量(TCID5tl)的测定按CPE终点稀释法测定。用DMEM培养液将TGEV按10倍逐步稀释从KT1到10,各梯度的浓度，然后加入到长满单层ST细胞的96孔培养板中，在37°C，5%C02及饱和温度下混合培养，3d后观察CPE达50%的TGEV浓度值，确定为TCID5(I。6本发明中药注射液I对TGEV的体外抑制试验6.1本发明中药注射液I对TGEV感染的ST细胞的保护作用在96孔板上接种2 X IO5个/mL的ST细胞0.3mL,待其生长成单层后，每孔加入TGEV病毒液(100TCID50/mL)0.1mL0孵育2h后，加入0.5ml实施例4制备的注射液1，37°C，5%C02培养，每一浓度做4复孔，实验重复I次。3d后先进行ST细胞的CPE观察，根据出现收缩的细胞数来判定CPE等级。接着，吸弃每孔的上清液，用37°C，pH7.6的PBS洗涤两次后，加入0.2%的结晶紫溶液0.1mL染色5min，再用PBS洗涤5次，加1%十二烷基硫酸钠溶液0.1mL, 37°C保温0.5h，使细胞彻底裂解，置全自动酶标仪上，于630nm下测A值。6.2本发明中药注射液I对TGEV的直接作用将0.5mL实施例4制备的注射液I与TGEV病毒液(100TCID5Q/mL) 0.1mL混合后于37°C孵育2h，然后再接种于0.3mL的ST细胞，37°C，5%C02培养。3d后观察CPE程度并于630nm处测定A值。6.3本发明中药注射液I对TGEV感染ST细胞的预防性保护作用将0.5mL实施例4制备的注射液I与ST细胞液0.3mL在96孔培养板，在37°C，5%C02培养4h后，加入TGEV病毒液(100TCID5(l/mL) 0.1mL,孵育2h，更换维持液，继续培养3d。同法观察各孔的CPE及结晶紫染色下的630nm的A值。6.4本发明中药注射液I对ST细胞感染TGEV后不同阶段的保护作用

在含有ST 细胞液 0.3mL 的孔中接种 TGEV 病毒液(IOOTCID5tZmL)0.1mL,1,2,4,6和8h后分别加入0.1mL本发明实施例4制备的中药注射液I，使其在孔中的终浓度为54.50 μ mol/L,并设病毒感染对照和正常细胞对照，在37°C，5%C02继续培养3d。观察3d后各孔中细胞的CPE及结晶紫染色的活细胞数情况。7.统计分析采用SPSS13.0软件进行统计学处理，数据以p(±s>表示，计量资料用t检验，计
数资料用X 2检验。8.结果8.1注射液I对ST细胞的毒性作用注射液I对ST细胞的作用与培养维持液组无明显差异，ST细胞的形态均未有明显改变。8.2TCID50 的测定当TGEV病毒液的稀释度为10_7时，6孔的ST细胞有半数细胞产生病变，出现萎缩、脱落，因此TCID5tl确定为10'在下列各试验中均采用100TCID5(l/mL的病毒量。8.3注射液I对TGEV的体外抑制试验8.3.1注射液I对TGEV感染的ST细胞的保护作用表I
权利要求
1.一种用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物，其特征在于:所述中药组合物的原料药包括木香、青黛、一枝黄花、杠板归、天冬、鲜竹浙、翼首草、薏苡仁、豨莶草、榼藤子、椿皮、鹅不食草、紫萁贯众、葛根、救必应、菟丝子、黄精、黄蜀葵花、黄柏、桑寄生、拳参、党参和秦皮。
2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于:所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香20重量份 30重量份、青黛60重量份 70重量份、一枝黄花30重量份 40重量份、杠板归25重量份 35重量份、天冬30重量份 40重量份、鲜竹浙20重量份 30重量份、翼首草15重量份 25重量份、薏苡仁20重量份 30重量份、豨莶草10重量份 20重量份、榼藤子20重量份 30重量份、椿皮25重量份 35重量份、鹅不食草30重量份 40重量份、紫萁贯众20重量份 30重量份、葛根25重量份 35重量份、救必应20重量份 30重量份、英丝子35重量份 45重量份、黄精50重量份 60重量份、黄蜀葵花20重量份 30重量份、黄柏40重量份 50重量份、桑寄生15重量份 25重量份、拳参20重量份 30重量份、党参60重量份 70重量份和秦皮20重量份 30重量份。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于:所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香20重量份 25重量份、青黛60重量份 65重量份、一枝黄花30重量份 35重量份、杠板归25重量份 30重量份、天冬30重量份 35重量份、鲜竹浙20重量份 25重量份、翼首草15重量份 20重量份、薏苡仁20重量份 25重量份、豨莶草15重量份 20重量份、榼藤子25重量份 30重量份、椿皮30重量份 35重量份、鹅不食草35重量份 40重量份、紫萁贯众25重量份 30重量份、葛根30重量份 35重量份、救必应25重量份 30重量份、英丝子40重量份 45重量份、黄精55重量份 60重量份、黄蜀葵花25重量份 30重量份、黄柏45重量份 50重量份、桑寄生20重量份 25重量份、拳参25重量份 30重量份、党参65重量份 70重量份和秦皮25重量份 30重量份。
4.如权利要求1至3所述的中药组合物，其特征在于:所述中药组合物中各原料药的重量份分别为木香25重量份、青黛65重量份、一枝黄花35重量份、杠板归30重量份、天冬35重量份、鲜竹浙25重量份、翼首草20重量份、薏苡仁25重量份、豨莶草15重量份、榼藤子25重量份、椿皮30重量份、鹅不食草35重量份、紫萁贯众25重量份、葛根30重量份、救必应25重量份、菟丝子40重量份、黄精55重量份、黄蜀葵花25重量份、黄柏45重量份、桑寄生20重量份、拳参25重量份、党参65重量份和秦皮25重量份。
5.如权利要求1至4所述的中药组合物，其特征在于:所述中药组合物可以制备成煎煮液和注射液。
6.权利要求1至5所述中药组合物的制备方法，其特征在于:所述中药组合物为煎煮液时，具体步骤为将各原料药按重量份混合，加入相对于混合物5 7倍水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入相对于混合物3 5倍的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，浓缩除去部分水，获得生药浓度为lg/ml 2g/ml的中药组合物煎煮液。
7.权利要求1至5所述中药组合物的制备方法，其特征在于:所述中药组合物为注射液时，具体步骤为将各原料药按重量份混合，加入相对于混合物5 7倍水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，滤渣再次加入相对于混合物3 5倍的水，以武火加热至沸腾状态，随后以文火煎煮2 4小时，煎煮液过滤，将两次获得的过滤液合并，用4mol/l 6mol/l的盐酸溶液调节pH值至2.0,冷藏48h,放置沉淀,过滤,滤液用20%的氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入占药液质量0.5%活性炭，保持PH值7.0，加热微沸15分钟，冷却，滤过，加注射用水至1000ml，罐装，于115°C灭菌30分钟，冷藏48小时，滤过，分装，即得注射液。
8.权利要求1至5所述中药组 合物在制备用于治疗猪传染性胃肠炎的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种用于治疗猪传染性胃肠炎的中药组合物，其原料药包括木香、青黛、一枝黄花、杠板归、天冬、鲜竹沥、翼首草、薏苡仁、豨莶草、榼藤子、椿皮、鹅不食草、紫萁贯众、葛根、救必应、菟丝子、黄精、黄蜀葵花、黄柏、桑寄生、拳参、党参和秦皮。该中药组合物能够克服现有西医疗法的不足，对猪传染性胃肠炎具有良好的疗效，毒副作用小，残留少，资源丰富，价格低廉。
文档编号A61P1/00GK103211993SQ20131014823
公开日2013年7月24日 申请日期2013年4月25日 优先权日2013年4月25日
发明者郝智慧, 侯东军, 吴好庭 申请人:青岛农业大学