一种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期的测定方法，主要通过在塔里木马鹿生茸期针对不同年龄段的塔里木马鹿进行鹿茸生长速度、鹿茸骨密度、外周血(颈静脉血)及鹿茸中Ca2+含量的测定，以此来推测塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期。本发明对不同年龄段塔里木马鹿的鹿茸生长速度、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量进行测定，明确鹿茸及外周血中Ca2+含量的变化规律，结合鹿茸生长速度和骨密度的相关关系，找出不同年龄段塔里木马鹿鹿茸的骨化时间，并以此确定最佳收茸期，可为提高鹿茸的药用价值提供理论依据。
【专利说明】一种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法，属于鹿茸【技术领域】。
【背景技术】
[0002]我国养鹿业历史悠久，鹿类资源相当丰富。目前驯养鹿的种类有梅花鹿、马鹿、糜鹿、水鹿、坡鹿等，数量达100余万头。我国养鹿业主要是以生产鹿茸为目的，饲养种类以马鹿和梅花鹿为主，马鹿具有产茸量高，生产可利用年限长的特点。塔里木马鹿世代栖息在新疆塔里木盆地(时孔民，1995)，它体型偏小、紧凑，产茸量高，耐粗饲，在地理隔离和自然选择的双重作用下，繁衍不息。近几年外商竞相抢购塔里木马鹿鹿茸，说明其药用价值具有一定的优越性，是目前国际市场上的紧俏商品。
[0003]鹿茸的生长，即软骨骨架上形成骨的过程。Ca是骨形成过程中的重要矿物质元素，也是鹿茸中含量最高的矿物质元素。生茸期的塔里木马鹿鹿茸生长迅速，最快每天生长可达2cm左右，部分最终能达到120cm，鹿茸的生长需要大量的矿物质元素，尤其是Ca。Ca即是保障生茸期的塔里木马鹿鹿茸生长的“动力”，又是鹿茸过分骨化，降低药用价值的“罪魁祸首”，鹿茸骨化程度与其药用价值密切相关，Ca2+含量越高，骨化程度越大，药效越低。因此，对塔里木马鹿生茸期鹿茸生长速度、骨密度、血液及鹿茸中Ca2+在时间和空间上的变化规律进行研究，确定最佳收茸期，有助于提高鹿茸的产量与药用价值，对我国养鹿业的发展具有重要意义。
[0004]目前，国际上对鹿的研究主要是应用分子生物学手段集中在鹿茸方面。英国、德国等国家投入了大量的财力、 物力研究鹿茸的再生及鹿茸干细胞的发育和调控机制(Parryet al，1996 ;Sadighi Μ, 2001 ；Mount J G，et al，2006)。而国内对鹿茸的机制性研究刚刚开始，研究机构较少，主要是中国农业科学院特产研究所，但其对鹿茸的研究处于国际同等水平。从外在形态的变化到分子水平调控，许多科学家对鹿茸的生长发育进行了深入研究(鲍加荣，李春义等，2008)。包括鹿茸如何再生成一个完整的器官(Gu L et al，2007);鹿茸生长组织的快速增殖是如何调控的(Peter Michael et al，2004);鹿茸干细胞如何受到激活，又是如何终止的；自身或环境的因素又是如何影响鹿茸干细胞生长发育的信号通路；哪些信号调控网络参与其中；以及鹿茸的骨化等方面的研究上(Szuwart T et al，1998;Newbery Jff et al, 1989 ;T.Landete-Castillejos et al,2007)。鹿鸾的骨化及最终成为骨角是一种必然的结果，但迄今为止，对于鹿茸骨化的分子机理还不十分清楚。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法，以便对不同年龄段塔里木马鹿的鹿茸生长速度、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量的测定，明确鹿茸及外周血中Ca2+含量的变化规律，结合鹿茸生长速度和骨密度的相关关系，找出不同年龄段塔里木马鹿的鹿茸骨化时间，并以此确定最佳收茸期。
[0006]为了实现上述目的，本发明的技术方案如下:[0007]—种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期的测定方法，主要通过针对不同年龄段的塔里木马鹿，对鹿茸生长速度、鹿茸骨密度、外周血(颈静脉血)及鹿茸中Ca2+含量进行测定，以此来推测塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期。
[0008]上述4项指标具体检测方式及过程如下:
[0009](1)塔里木马鹿鹿茸生长速度的测定步骤为:
[0010]第一步:于试验期内，从塔里木马鹿脱盘开始，每隔一段时间(t)对每头塔里木马鹿鹿茸长度进行测量，即用软尺从鹿茸基部顺延测到主干顶端，至鹿锯茸时结束；
[0011]第二步:根据相邻两次测定值hi和h2及间隔天数t，按照公式V= (h2_hl)/t(其中h1、h2分别为前后两次测量的茸长度；t为时间间隔)计算出每头塔里木马鹿每天的平均日增长速度。
[0012](2)塔里木马鹿鹿茸骨密度的测定步骤为:以便携式X射线透射仪对准鹿茸基部上约3cm处进行拍片，观察并记录鹿茸骨密度的变化情况。
[0013](3)塔里木马鹿外周血中Ca2+含量的测定，具体步骤为:
[0014]第一步:于塔里木马鹿颈静脉处采集外周血约10ml ；
[0015]第二步:将采集的无污染、无凝块的全血于_20°C保存，备测；
[0016]第三步:运用火焰原子吸收分光光度法对血液中Ca2+含量进行测定，具体步骤如下:
[0017]①样本处理:将采集准确、无污染、无凝块的全血，用移液枪准确吸取适量，加入原子吸收分光光度计专用的稀释液中，4-8°C保存，测量前lh将样本放置于室温。于血样中加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在电炉上消解，同时制作空白对照溶液。待样品完全消解，溶液呈澄清、浅黄色或无色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化镧溶液2mL，用0.1%盐酸溶液稀释至刻度待用。
[0018]②仪器参数设定:调节仪器的波长、燃气流量、灯电流、负高压在合适的范围内。
[0019]③稀释剂及标准曲线溶液制备:用优级纯盐酸配置体积分数为0.1%的盐酸，作为钙标准溶液的稀释剂；配置0.2%氧化镧溶液作为钙释放剂；空白溶液为0.1%盐酸。
[0020]④样品含量检测:制作标准曲线，同时将消化好的样品用原子吸收法按设定好的仪器参数对样品溶液中Ca2+含量进行测定。
[0021]第四步:根据公式(C_C0)XV1/V2(其中C0为空白浓度，C为样品测量浓度，VI为定容体积，V2为取样体积)计算结果。
[0022](4)塔里木马鹿鹿茸中Ca2+含量的测定，具体步骤为:
[0023]第一步:将塔里木马鹿分别于茸生长初期、快速生长期、茸骨化初期、茸骨化后期采集不同部位的鹿茸(上、中、下三段)；锯茸前以吹管法将马鹿麻醉后实施锯茸；
[0024]第二步:将采集的鹿茸于上、中、下三段分别取样约10g左右，_20°C保存。
[0025]第三步:运用火焰原子吸收分光光度法测定鹿茸中Ca2+含量，按照称重一消煮一定容一稀释一上机的步骤，对Ca2+含量进行测定，具体如下:
[0026]①样本处理:
[0027]鹿茸的处理:称取约1.5g干燥并粉碎后的鹿茸，加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在电炉上消解，同时制作空白对照溶液。待样品完全消解，溶液呈澄清、浅黄色或无色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化镧溶液2mL，用0.1 %盐酸溶液稀释至刻度待用。[0028]②仪器参数设定:调节仪器的波长、燃气流量、灯电流、负高压在合适的范围内。
[0029]③稀释剂及标准曲线溶液制备:
[0030]用优级纯盐酸配置体积分数为0.1%的盐酸，作为钙标准溶液的稀释剂；配置
0.2%氧化镧溶液作为钙释放剂；空白溶液为0.1%盐酸。
[0031]④样品含量检测:
[0032]制作标准曲线，同时将消化好的样品用原子吸收法按设定好的仪器参数对样品溶液中Ca2+含量进行测定。
[0033]第四步:根据公式(C-CO) XV1/V2(其中C0为空白浓度，C为样品测量浓度，VI为定容体积，V2为取样体积)计算结果。
[0034]本发明方案中，鹿茸是唯一失去后能够完全再生的器官，生茸期的塔里木马鹿，鹿茸生长迅速，最快每天可达到2cm左右。鹿茸的生长需要大量的矿物质元素，尤其是Ca。骨化过程的关键是血浆中含有正常的[Ca2+]，可见血液中Ca2+含量与鹿茸的生长及骨化具有密切的关系。本发明综合鹿茸生长速率、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量这4个指标，能够确定鹿茸的最佳收茸期。
[0035]该发明的有益效果在于:塔里木马鹿的鹿茸具有极高的药用和保健价值，而其药用价值的高低直接取决于收茸时间及鹿茸的骨化程度。鹿茸骨化后药用价值有所下降，其骨化程度取决于Ca2 +的沉积量，以生茸期塔里木马鹿鹿茸中Ca2+的沉积量为主线开展研究，寻找鹿茸生长期与骨化期的分界线，确定塔里木马鹿的最佳收茸期，将有助于提高鹿茸的药用价值。故本发明对不同年龄段塔里木马鹿的鹿茸生长速度、骨密度、外周血及鹿茸中Ca2+含量的测定，明确鹿茸及外周血中Ca2+含量的变化规律，结合鹿茸生长速度和骨密度的相关关系，找出不同年龄段塔里木马鹿的鹿茸骨化时间，并以此确定最佳收茸期，可为提高鹿茸的药用价值提供理论依据。
【专利附图】
【附图说明】
[0036]图1是本发明实施例中青年组08-0号5月21日拍摄的马鹿鹿茸骨密度图
[0037]图2是本发明实施例中青年组08-0号6月3日拍摄的马鹿鹿茸骨密度图。
[0038]图3是本发明实施例中青年组08-0号6月17日拍摄的马鹿鹿茸骨密度图。
[0039]图4是本发明实施例中青年组08-0号7月3日拍摄的马鹿鹿茸骨密度图。
【具体实施方式】
[0040]下面结合附图和实施例对本发明【具体实施方式】进行描述，以便更好的理解本发明。
[0041]实施例
[0042]本实施例选择体质健康、胎次相近的老、中、青3个年龄段的塔里木马鹿各6头(其中青年组为3-4岁；中年组6-7岁；老年组10-12岁)，编号分组，日喂三次，自由饮水。试验于2012年3月至7月进行，试验期内观察记录塔里木马鹿的临床症状，并完成了对鹿茸生长速度、骨密度、外周血(颈静脉血)及鹿茸中Ca2+含量的测定。
[0043]上述4项指标具体检测情况如下:
[0044](1)塔里木马鹿鹿茸生长速度的测定:[0045](la)测定步骤:
[0046]第一步:于试验期内，从塔里木马鹿脱盘开始，每隔一段时间(t)对每头塔里木马鹿鹿茸长度进行测量，即用软尺从鹿茸基部顺延测到主干顶端，至鹿锯茸时结束；
[0047]第二步:根据相邻两次测定值hi和h2及间隔天数t，按照公式V= (h2_hl)/t(其中h1、h2分别为前后两次测量的茸长度；t为时间间隔)计算出每头塔里木马鹿每天的平均日增长速度。
[0048](lb)塔里木马鹿鹿茸生长速度测定结果:
[0049]表1为生茸不同时期3组塔里木马鹿鹿茸日平均生长速率表。由表1可知:4月2日时，青年组3头马鹿均尚未脱盘，而中年组和老年组鹿茸已开始生长；至6月3日中、老年组马鹿的日平均生长速率均到达最大值，至6月17日两组中留茸观察的鹿茸生长速率均降低，推测中、老年组的马鹿其最佳收茸时间以6月3日为宜。而由表1可知，青年组马鹿托盘时间明显晚于中、老年组，对于茸生长速率这个指标，其由6月17日至7月3日期间3头马鹿均呈下降的趋势，推测青年组最佳收茸时间以6月17日为宜。
[0050]表1塔里木马鹿鹿茸生长速率
[0051]
【权利要求】
1.一种塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法，其特征在于:主要通过在塔里木马鹿生茸期内针对不同年龄段的塔里木马鹿进行鹿茸生长速度、鹿茸骨密度、外周血(颈静脉血)及鹿茸中Ca2+含量的测定，以此来推测塔里木马鹿鹿茸的最佳收茸期；上述4项指标具体检测方式及过程如下:(1)塔里木马鹿鹿茸生长速度的测定步骤为:第一步:于试验期内，从塔里木马鹿脱盘开始，每隔一段时间(t)对每头塔里木马鹿鹿茸长度进行测量，即用软尺从鹿茸基部顺延测到主干顶端，至鹿锯茸时结束；第二步:根据相邻两次测定值hi和h2及间隔天数t，按照公式V = (h2-hl)/t (其中hl、h2分别为前后两次测量的茸长度；t为时间间隔)计算出每头塔里木马鹿每天的平均日增长速度；(2)塔里木马鹿鹿茸骨密度的测定步骤为:以便携式X射线透射仪(上海博进BJ1-1型)对准鹿茸基部上约3cm处进行拍片，观察并记录鹿茸骨密度的变化情况；(3)塔里木马鹿外周血中Ca2+含量的测定，具体步骤为:第一步:于塔里木马鹿颈静脉处采集外周血约10ml ；第二步:将采集的无污染、无凝块的全血于_20°C保存，备测；第三步:运用火焰原子吸收分光光度法对血液中Ca2+含量进行测定；第四步:根据公式(C-CO) XV1/V2(其中C0为空白浓度，C为样品测量浓度，VI为定容体积，V2为取样体积)计算结果；(4)塔里木马鹿鹿茸中Ca2+含量的测定，具体步骤为:第一步:将塔里木马鹿分别于茸生长初期、快速生长期、茸骨化初期、茸骨化后期采集不同部位的鹿茸(上、中、下三段)；锯茸前以吹管法将马鹿麻醉后实施锯茸；第二步:将采集的鹿茸于上、中、下三段分别取样约10g左右，-20°C保存；第三步:运用火焰原子吸收分光光度法测定鹿茸中Ca2+含量，按照称重一消煮一定容—稀释一上机的步骤，对Ca2+含量进行测定；第四步:根据公式(C-CO) XV1/V2(其中C0为空白浓度，C为样品测量浓度，VI为定容体积，V2为取样体积)计算结果。
2.根据权利要求1所述的塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法，其特征在于:所述步骤(3)中运用火焰原子吸收分光光度法对血液中Ca2+含量进行测定的具体步骤如下:①样本处理:将采集准确、无污染、无凝块的全血，用移液枪准确吸取适量，加入原子吸收分光光度计专用的稀释液中，4-8°C保存，测量前lh将样本放置于室温；于血样中加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在电炉上消解，同时制作空白对照溶液；待样品完全消解，溶液呈澄清、浅黄色或无色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化镧溶液2mL，用0.1%盐酸溶液稀释至刻度待用；②仪器参数设定:调节仪器的波长、燃气流量、灯电流、负高压在合适的范围内；③稀释剂及标准曲线溶液制备:用优级纯盐酸配置体积分数为0.1%的盐酸，作为钙标准溶液的稀释剂；配置0.2%氧化镧溶液作为钙释放剂；空白溶液为0.1%盐酸；④样品含量检测:制作标准曲线，同时将消化好的样品用原子吸收法按设定好的仪器参数对样品溶液中Ca2+含量进行测定。
3.根据权利要求1所述的塔里木马鹿鹿茸最佳收茸期测定方法，其特征在于:所述步骤(4)中运用火焰原子吸收分光光度法测定鹿茸中Ca2+含量过程具体如下:①样本处理:称取约1.5g干燥并粉碎后的鹿茸，加入4mL硝酸和lmL高氯酸，放在电炉上消解，同时制作空白对照溶液；待样品完全消解，溶液呈澄清、浅黄色或无色后，移至25mL量瓶中，加入0.2%氧化镧溶液2mL，用0.1 %盐酸溶液稀释至刻度待用；②仪器参数设定:调节仪器的波长、燃气流量、灯电流、负高压在合适的范围内；③稀释剂及标准曲线溶液制备:用优级纯盐酸配置体积分数为0.1%的盐酸，作为钙标准溶液的稀释剂；配置0.2%氧化镧溶液作为钙释放剂；空白溶液为0.1%盐酸；④样品含量检测:制作标准曲线，同时将消化好的样品用原子吸收法按设定好的仪器参数对样品溶液中Ca2+ 含量进行测定。
【文档编号】A61B6/00GK103690242SQ201310703161
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月12日 优先权日:2013年12月12日
【发明者】赵金香, 矫继峰, 陶大勇, 蒋涛, 陈荣, 刘利林 申请人:塔里木大学